ELISA法檢測的影響因素及其對策

譚立明

(南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院檢驗科,江西 南昌330006)

酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)是一種特殊的試劑分析方法，在免疫酶技術(shù)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種新型的免疫測定技術(shù)，其試劑易于保存、結(jié)果判斷較為客觀，是目前實(shí)驗室檢測抗原抗體最經(jīng)濟(jì)、最普遍的試驗診斷方法。其原理是將抗原(抗體)結(jié)合到固相載體表面，再將待測抗體(抗原)、酶標(biāo)抗原(抗體)與固相抗原(抗體)結(jié)合形成免疫復(fù)合物，經(jīng)洗滌使免疫復(fù)合物與待測抗體(抗原)呈比例，加入酶反應(yīng)底物使其與固相上的酶反應(yīng)變色，根據(jù)顏色做定性或定量分析，得出檢測結(jié)果[1-3]。ELISA法步驟包括標(biāo)本的采集、保存、加樣、溫育、洗板、顯色、比色以及結(jié)果判斷[4]，臨床采集待檢樣本過程中常出現(xiàn)溶血、黃疸、脂濁，類風(fēng)濕因子、高濃度非特異性免疫球蛋白、藥物及血液抗凝劑等亦對結(jié)果產(chǎn)生一定影響[5]。雖然操作簡單，但還是需要注意一些因素的影響[6-8]，試劑的選擇、正確的操作、優(yōu)良的儀器都與檢測結(jié)果密切相關(guān)。本文根據(jù)樣本的影響因素及操作流程中可能出現(xiàn)的相關(guān)問題展開筆述，對ELISA法檢測的影響因素及相應(yīng)對策作一綜述，希望提高ELISA法檢測的準(zhǔn)確性。

1 樣本的影響因素

臨床采取空腹抽取靜脈血清作為ELISA檢測標(biāo)本，標(biāo)本采集過程中很多因素可能導(dǎo)致檢測結(jié)果不準(zhǔn)確，如溶血、脂濁、類風(fēng)濕因子、甲胎蛋白、高濃度非特異性免疫球蛋白、藥物、血液抗凝劑及細(xì)菌污染等。

1.1 溶血 溶血時紅細(xì)胞破裂釋放出具有過氧化物酶活性的物質(zhì)干擾試驗結(jié)果出現(xiàn)假陽性，孫輝等[9-11]通過實(shí)驗報道樣品溶血血紅蛋白濃度不大于4.95g/L，對雙抗原夾心法、間接法、競爭法、捕獲法檢測結(jié)果均無影響。徐傳國[12]認(rèn)為溶血易導(dǎo)致弱陽性標(biāo)本漏檢，黎學(xué)東等[13，14]認(rèn)為雖然溶血會對HB-sAg檢測造成假陽性影響，但是小于8g/L時可以檢測；王紅等[15，16]使用不同的干擾物濃度及分析方法得出結(jié)論，隨著溶血程度的增高HBsAg檢測OD值有輕微增高趨勢；但是溶血檢測抗-HIV無影響[17]。

臨床工作中無法采集到無干擾物血清或因操作因素導(dǎo)致標(biāo)本出現(xiàn)溶血時，評估標(biāo)本干擾物含量及標(biāo)本處理情況，在有效范圍內(nèi)進(jìn)行ELISA檢測，對于溶血標(biāo)本可先測定血漿Hb含量，不大于5g/L時可用于HBsAg的檢測，超過此范圍的陽性標(biāo)本最好做復(fù)檢，避免假陽性結(jié)果發(fā)生[18]。目前也有通過增設(shè)試驗孔的方法來處理輕度甚至重度溶血標(biāo)本的檢測，使溶血造成的假陽性結(jié)果得到糾正，且有非常顯著性統(tǒng)計學(xué)意義。

1.2 脂濁 孫輝等[9]通過實(shí)驗報道乳糜樣品含福爾馬肼濁度小于1460FTU的乳糜時，對雙抗原夾心法、間接法、競爭法、捕獲法的檢測結(jié)果均無影響。汪建國等[16]認(rèn)為脂質(zhì)顆粒會黏附在反應(yīng)孔內(nèi)壁，使吸光度A值增高出現(xiàn)假陽性；徐學(xué)新等[19，20]認(rèn)為不同程度的乳糜血液隨著放置時間的延長OD值下降，導(dǎo)致不同程度的漏檢。雖然可采取高速離心的方法可將乳糜微粒去除，此過程可能對檢測結(jié)果帶來影響，然而盲目采取高速離心等方法試圖去除干擾物并不可取。

1.3 黃疸 結(jié)合膽紅素濃度不大于344μmol/L對雙抗原夾心法、間接法、競爭法、捕獲法的檢測結(jié)果均無影響，超過濃度的樣本應(yīng)重新采集，對于黃疸病人為保證檢測結(jié)果的可靠性可選擇其他檢測方法。

1.4 類風(fēng)濕因子 在類風(fēng)濕患者及健康者血清中常含有類風(fēng)濕因子 (RF)，RF為一種抗人或動物變性免疫球蛋白IgG的自身抗體，與IgG分子Fc片段抗原決定簇結(jié)合，常見的有IgM、IgA、IgG、IgE型，均能與變性IgG抗體產(chǎn)生非特異性結(jié)合，在ELISA檢測抗原的試劑盒中，RF可與固相包被的表面抗體的Fc片段及酶標(biāo)記物中免疫球蛋白結(jié)合。研究[20]表明高濃度的類風(fēng)濕因子可引起ELISA檢測抗原檢測出現(xiàn)假陽性結(jié)果，類風(fēng)濕因子可與固相上包被的特異性抗體IgG及隨后加入的酶標(biāo)特異性抗體IgG結(jié)合出現(xiàn)假陽性結(jié)果[21]。穆海霞等[22，23]研究報道高濃度 RF(＞500IU/ml)對 ELISA 檢測HBsAg產(chǎn)生假陽性結(jié)果較明顯，且與RF濃度無顯著相關(guān)性。

在臨床工作中，若出現(xiàn)乙肝兩對半少見模式，如僅HBsAg陽性，應(yīng)結(jié)合患者病史并采用其他方法如微粒子酶免疫法進(jìn)行復(fù)檢，慎重報告。

1.5 抗體、補(bǔ)體 人類血清中含有天然異嗜性抗體，而異嗜性抗體可通過交聯(lián)固相和酶標(biāo)的單抗或多抗產(chǎn)生假陽性結(jié)果。來自哺乳動物的固相抗體及酶標(biāo)二抗可激活人體補(bǔ)體系統(tǒng)，在反應(yīng)過程中抗體分子結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，暴露補(bǔ)體的結(jié)合位點(diǎn)，產(chǎn)生假陽性結(jié)果，也可能固相抗體因為活化補(bǔ)體的結(jié)合導(dǎo)致抗原抗體的表位結(jié)合能力下降，出現(xiàn)假陰性結(jié)果。研究報道[23]高濃度的乙型肝炎表面抗體會引起HBsAg檢測出現(xiàn)假陰性結(jié)果，臨床需注意避免攜帶污染造成檢測結(jié)果錯誤。

1.6 血液保存液 志愿者獻(xiàn)血一直是各醫(yī)院血站血液的主要來源方式，低濃度標(biāo)本的檢測對輸血安全至關(guān)重要，按照《獻(xiàn)血者健康體檢要求》和《血站實(shí)驗室質(zhì)量管理規(guī)范》，獻(xiàn)血者需檢測抗-HIV、抗-HCV、HBsAg、梅毒抗體等，且必須建立初次有反應(yīng)標(biāo)本的復(fù)檢程序，常采用抗凝試管血和采血導(dǎo)管血同時復(fù)檢，然而不規(guī)范的操作常導(dǎo)致試管標(biāo)本和末端血袋管混入血液保存液。血液保存液成分、pH值、離子強(qiáng)度等影響均可能導(dǎo)致檢測結(jié)果錯誤。血液保存液對ELISA法檢測抗-HIV結(jié)果影響明顯，能明顯減低試劑對抗-HIV的檢測能力，造成假陰性結(jié)果；也有研究報道[24]，血液保存液對HBsAg、梅毒抗體、ALT弱陽性試管標(biāo)本及血袋管標(biāo)本檢測結(jié)果影響有統(tǒng)計學(xué)意義，造成弱陽性結(jié)果漏檢，但對抗-HIV陽性結(jié)果檢測無影響；張桂芳等[25]通過實(shí)驗證明抗凝劑對HIV陰性抗體檢測結(jié)果無影響，但是當(dāng)抗凝劑高于5mg/ml時對HIV陽性測定造成明顯負(fù)干擾，同時也影響血細(xì)胞分析，且同一抗凝劑同一濃度對不同公司的試劑檢測HIV抗體影響也不相同。

血液保存液是必須使用的，可以通過以下方法避免血液保存液帶來的不良后果：完善標(biāo)本留樣確認(rèn)程序，確保標(biāo)本與血袋同源，采用試管標(biāo)本代替血袋標(biāo)本，避免從血袋導(dǎo)管采取復(fù)檢標(biāo)本；采用新型留樣血袋，附帶留樣試管，將最初采集時未混入血液保存液的血液用于檢測；規(guī)范血液留樣操作，防止待檢標(biāo)本混入血液保存液，若混入，可將抗-HIV的臨界值相應(yīng)調(diào)低。如果使用EDTA-K2做抗凝劑，最好將濃度控制在1.5~2.5mg/ml的范圍內(nèi)，對于較難采集到足夠血液樣品的患者可采用血細(xì)胞分析檢測HIV抗體。如采用抗凝血將做檢測樣本時最好與血清樣本進(jìn)行對比試驗，并建議廠家對試劑的干擾能力進(jìn)行嚴(yán)格的質(zhì)量控制，說明適合使用的試劑及其相應(yīng)濃度。

1.7 藥物 研究表明，高效價乙型肝炎免疫球蛋白可以和HBsAg形成免疫復(fù)合物，使HBsAg陽性患者檢測呈陰性，出現(xiàn)兩對半少見模式；部分HBsAg陰性者接種乙肝疫苗1~2周后血清中可檢測到HBsAg，造成HBsAg一過性陽性，所以乙肝疫苗接種后一個月內(nèi)最好避免做乙肝兩對半檢查。

1.8 細(xì)菌 一些細(xì)菌的菌體中可能含有內(nèi)源性過氧化物酶會對使用相應(yīng)酶做標(biāo)記的測定方法產(chǎn)生影響，污染細(xì)菌可能含有內(nèi)源性辣根過氧化物酶，使試劑出現(xiàn)非特異性顯色造成假陽性而干擾結(jié)果。

1.9 樣品因素小結(jié) 綜合得出，在正確的時間采集標(biāo)本并防止污染、避免破壞，在干擾物處于一定濃度范圍內(nèi)(膽紅素濃度≤344μmol/L，溶血血紅蛋白濃度≤4.95g/L，乳糜樣≤1460FTU)進(jìn)行 ELISA四種方法檢測均不影響檢測結(jié)果，但對競爭法檢測HBeAb的影響有統(tǒng)計學(xué)意義。對于貧血性溶血、新生兒溶血性黃疸及抽血不當(dāng)?shù)仍斐傻娜苎獦?biāo)本盡量避免二次抽血對病人造成不必要的傷害。

2 操作的影響因素

2.1 試劑的準(zhǔn)備 試劑的質(zhì)量如抗原抗體的純度及親和力、標(biāo)記物的比活性、滴度及特異性等直接影響檢測結(jié)果，為保證檢測質(zhì)量，所有試劑必需經(jīng)國家食品藥品監(jiān)督管理總局注冊批準(zhǔn)、批檢測合格，臨床評估特異性、敏感性、穩(wěn)定性較高且在有效期內(nèi)才有使用價值。不同廠家試劑敏感性、特異性不盡相同，有報道不同廠家酶標(biāo)板孔間A值差大小可達(dá)15%，標(biāo)記酶的活性及顯色液的穩(wěn)定性也相差較大，所以合理有效的試劑選擇尤為重要[26]，對ELISA試劑盒應(yīng)正確選擇，定期評價并建立科學(xué)的接收標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)合常規(guī)血液篩查情況，對實(shí)際的均一性、適用性、穩(wěn)定性，選出靈敏度、特異度及精密性合適的試劑保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確。有報道[27，28]不同廠家-IgG配制成的抗HCV-cAg酶結(jié)合物溶液對檢測結(jié)果有區(qū)別，配制抗HCV-cAg酶結(jié)合物溶液前應(yīng)檢測小鼠-IgG與產(chǎn)品的適配性。其次試劑盒的儲存方式、運(yùn)輸條件及有效期均為影響檢測結(jié)果的重要因素，試劑盒一般2~8℃冰箱保存，注意不要緊貼冰箱儲存室后壁以防止試劑凍結(jié)失效，可避免使用時試劑受溫差影響導(dǎo)致酶標(biāo)板上凝集小水珠及反應(yīng)出現(xiàn)溫差而影響抗原抗體的反應(yīng)。使用前需將試劑盒放置37℃恒溫箱溫育30min，且不同廠家、不同批號的試劑不能混合使用。剩余試劑應(yīng)及時放入干燥劑密封保存在2~8℃冰箱，試劑打開后一周內(nèi)有效，同時注意做好室內(nèi)質(zhì)檢，確保實(shí)驗結(jié)果的可靠性。

不同方法學(xué)的檢驗試劑會使乙肝兩對半結(jié)果出現(xiàn)不同，如臨床操作中電化學(xué)檢測HBsAg呈陽性，而采用ELISA檢測則呈陰性，此外，使用單抗或多抗試劑對檢測結(jié)果同樣造成一定的影響。研究表明ELISA檢測細(xì)胞因子時需要根據(jù)檢測的細(xì)胞因子選擇不同的裂解液進(jìn)行處理，避免裂解液對細(xì)胞因子產(chǎn)生影響導(dǎo)致假陰性結(jié)果[29，30]。

2.2 樣本的采集、保存及預(yù)處理 標(biāo)本的運(yùn)輸及保存、檢測人員的自身素質(zhì)均可能對檢測結(jié)果造成不良影響，為避免出現(xiàn)錯誤樣品應(yīng)準(zhǔn)確標(biāo)明編號、種類、受檢者姓名及采集時間，收集后認(rèn)真核對，拒收不符合要求的標(biāo)本及申請單，嚴(yán)格按照拒收制度處理，同時處理合格標(biāo)本，做好后續(xù)工作，避免延誤導(dǎo)致標(biāo)本出現(xiàn)溶血等其它不良情況。標(biāo)本的預(yù)處理對檢測結(jié)果有非常明顯的影響，臨床工作中有時為了快速得出檢測結(jié)果在血液開始凝固前強(qiáng)行離心分離血清，血清中殘留的纖維蛋白絲對實(shí)驗結(jié)果造成影響[31]，標(biāo)本離心需徹底且必須待血液凝固后方能分離血清，也可在標(biāo)本采集時使用帶分離膠的采血管提取[32]，使用未混入保存液的血液做檢測標(biāo)本。在此過程中保證待檢標(biāo)本新鮮、避免細(xì)菌污染，否則易出現(xiàn)假陽性結(jié)果，若不能及時檢測可將分離的血清于4℃保存，超過一周于-20℃保存，避免反復(fù)凍融，防止出現(xiàn)假陰性結(jié)果[33]。若血清中含有類風(fēng)濕因子或免疫復(fù)合物也將造成假陽性結(jié)果。

2.3 加樣 ELISA檢測加樣時應(yīng)垂直將樣本準(zhǔn)確加入微孔底部，注意避免吸頭碰到酶標(biāo)板上的包被物，盡量慢吸快放，防止濺出或產(chǎn)生氣泡，避免液體外濺使血清殘留在反應(yīng)壁上。每次吸樣注意更換吸頭，做到一樣一吸頭，避免交叉污染，干吸頭每次加樣前在血清中抽吸三次保證吸樣準(zhǔn)確，滴加試劑時建議先將滴瓶搖勻擠去第一滴再加樣。加樣前先將微孔板平放在板架臺上，以免對洗板機(jī)的自動操作帶來影響，為了保證加樣的準(zhǔn)確性，建議使用準(zhǔn)確性高的微量移液器且定期進(jìn)行校正。加樣品稀釋液、酶結(jié)合物應(yīng)用液、底物應(yīng)用液及終止液時可采用定量多道加液器，迅速完成加液過程，加樣后用不干膠或膠帶紙封好酶標(biāo)板防止水分蒸發(fā)或雜物進(jìn)入孔內(nèi)，注意封板膜不可二次利用，避免交叉污染，剩余的微孔板、不干膠或膠帶紙與干燥劑一同保存在備用自封塑料袋中。大批量檢測大型機(jī)構(gòu)體檢標(biāo)本時可采用直接加入適量血清的加樣模式，經(jīng)濟(jì)環(huán)保提高工作效率[34]。

在實(shí)際操作過程中，待檢標(biāo)本和酶標(biāo)志物先后順序加入，于是在競爭法中因為兩者的不同時加入而存在一個“不公平”競爭現(xiàn)象，研究表明，競爭法ELISA檢測受加樣方法的影響存在統(tǒng)計學(xué)意義[35]，將標(biāo)本和酶標(biāo)志物先在試管中等量混和均勻后再加入酶標(biāo)板小孔杯中可降低抗-HBc檢測的假陽性率。

2.4 溫育 溫育是ELISA至關(guān)重要的一步，不同的溫育環(huán)境對檢測結(jié)果有影響，操作中應(yīng)嚴(yán)格按照說明書控制溫育時間及溫度，并注意封閉避免邊緣效應(yīng)。為確保各板溫度都能迅速達(dá)到平衡，不可將反應(yīng)板疊加放置，設(shè)定的溫度及時間嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行，一般加入待測標(biāo)本后使其與固相抗原(抗體)置于37℃環(huán)境下溫育。因為很多恒溫箱的構(gòu)造，溫度及檢測的溫度并非酶標(biāo)板溫育溫度，所以使用恒溫箱溫育時建議將溫度計置于酶標(biāo)板旁，保證酶標(biāo)板旁溫度為37℃。干育和水溫的影響差異較為明顯，建議使用水溫，注意將固相板放入水中，防止受熱不均勻。

溫育時間是影響檢測結(jié)果的一大因素，實(shí)際操作過程中工作人員常常試圖縮短溫育時間提高工作效率，曹青梅等[36]通過實(shí)驗證明，對于低濃度的標(biāo)本，待測標(biāo)本與固相抗體反應(yīng)時間過短，極易引起漏檢，反應(yīng)時間最少30min以上。羅保紅等[37]報道，酶標(biāo)反應(yīng)預(yù)孵時間在溫室中不超過15min，不但能保障ELISA檢測抗-HIV、抗-HCV的實(shí)驗結(jié)果，還能提高試劑檢測的靈敏度。其傳統(tǒng)溫育采用水溫箱易受污染，現(xiàn)多采用電熱、電子恒溫培養(yǎng)箱溫育，研究[38]表明溫育方式對ELISA檢測物影響。陳懷霞[39]報道，ELISA檢測中，溫度對抗原、抗體及酶反應(yīng)的影響很大，溫度增高，分子運(yùn)動加速，并可能出現(xiàn)非特異性反應(yīng)，出現(xiàn)假陰性或者假陽性結(jié)果，檢測控制恒溫37℃可保證檢測的準(zhǔn)確性。

2.5 洗板 洗板目的在于將特異性結(jié)合于固相上的抗原(抗體)與溫育過程中吸附的非特異性成份分離，使免疫復(fù)合物與待測抗體(抗原)呈一定比例，洗板是否合格直接影響檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。洗板應(yīng)嚴(yán)格按照說明控制洗板時間及洗板次數(shù)，ELISA檢測一般用洗滌液洗板3次，洗滌液應(yīng)嚴(yán)格按照操作說明進(jìn)行稀釋，洗液應(yīng)注滿每個微孔并注意洗液不外溢，垂直甩板避免交叉污染，防止出現(xiàn)假陰性及假陽性結(jié)果。使用洗板機(jī)洗板可一定程度上避免環(huán)境污染、提高工作效率，洗滌開始時注意觀察每根吸液針是否一直插入孔底并吸干孔內(nèi)全部液體，嚴(yán)格按照要求設(shè)置一定的洗板時間及洗板次數(shù)。洗板過程中注意沖力大小，避免沖力過大導(dǎo)致酶結(jié)合物丟失，吸光度值偏低。洗液應(yīng)根據(jù)不同廠家的酶標(biāo)板調(diào)整注水量，注意不要溢出孔外；稀釋洗液所用的蒸餾水或去離子水酸堿度適中，使配出的洗液pH在7.2~7.6范圍內(nèi)，用非金屬容器保存，保持液體新鮮無污染、沉淀。洗板結(jié)束后將板拍干，應(yīng)垂直扣在備好的干凈的吸水紙或毛巾上，且注意每次更新干凈的吸水紙或毛巾。

洗板時還應(yīng)注意以下問題：(1)需每天校正注液量及殘液量，洗滌后殘液量不得大于2μl；(2)及時更換破損吸液針，避免破壞底板包被；(3)針對不同廠家酶標(biāo)板注意調(diào)整吸液頭下降高度，避免沖洗針頭卡住酶標(biāo)板；(4)注意調(diào)整洗液量，洗液量過多將溢出，過少將達(dá)不到洗滌效果；(5)關(guān)機(jī)前使用蒸餾水沖洗管道，避免洗液的結(jié)晶物堵塞管道；(6)不同種試劑盒的洗液嚴(yán)禁混合使用。

臨床操作中，工作人員由于擔(dān)心洗板次數(shù)過少達(dá)不到去除非特異性物質(zhì)的理想效果而增加洗板次數(shù)，最近研究發(fā)現(xiàn)[5]，隨著洗板次數(shù)的增加樣本檢測的OD值降低，造成假陰性結(jié)果及灰區(qū)標(biāo)本的漏檢。

2.6 顯色及結(jié)果判斷 試劑顯色時A、B液按順序加入且間隔不超過10min，如先將兩液混合再加樣則需保證等體積混合。顯色劑不宜過多，注意避光反應(yīng)。顯色是最后一步溫育反應(yīng)，酶將無色底物催化反應(yīng)呈有色，反應(yīng)的溫度和時間均為影響結(jié)果的重要因素，目前市場上大多數(shù)進(jìn)口的ELISA檢測顯色溫度處于18~30℃。一定時間內(nèi)，陰性孔可保持無色，但陽性孔會隨時間的延長而顯色加強(qiáng)。研究[40]表明，顯色溫度對實(shí)驗結(jié)果有明顯影響，顯色溫度不同，試劑最低檢測能力差距非常大，溫度低于21℃時試劑盒對于質(zhì)控物的檢出能力下降，溫度過低導(dǎo)致結(jié)合反應(yīng)速率變慢[41]，顯色不充分，造成低值陽性結(jié)果的漏檢，所以操作中應(yīng)嚴(yán)格控制溫度。顯色時間不宜過短，因為一些低滴度可能不能及時出現(xiàn)反應(yīng)，造成假陰性結(jié)果。結(jié)果判斷應(yīng)按照說明書在規(guī)定時間內(nèi)完成，研究報道[42]終止反應(yīng)后的時間對OD值結(jié)果有明顯影響，10~15min陽性結(jié)果OD值逐漸下降，陰性結(jié)果的OD值有所上升，所以必須嚴(yán)格按照操作說明進(jìn)行，薛春楊等認(rèn)為結(jié)果判斷需在加入終止液后10min內(nèi)完成，避免出現(xiàn)孔內(nèi)結(jié)晶影響酶標(biāo)儀的測試，避免強(qiáng)光下進(jìn)行。

在加液和混合過程中產(chǎn)生氣泡、微孔條底部不透明、帶水滴、有劃痕及不規(guī)則的表面都可能引起吸光值的升高，易造成假陽性結(jié)果，若顯色但酶標(biāo)儀讀值為陰性的灰色值樣區(qū)的樣本不管其是否來源于高危人群均需復(fù)檢并參考參比試劑。

2.7 其它因素 實(shí)驗室的環(huán)境亦是影響試驗結(jié)果的一大因素，合理控制實(shí)驗室的通風(fēng)、采光及防塵，實(shí)驗室的溫度及濕度可使用空調(diào)加以控制，濕度控制在35%~65%間，并避免噪音及電磁波干擾。

檢測結(jié)果對受檢者的家庭、生活及工作非常重要，可能帶來嚴(yán)重的精神痛苦及巨大的心理壓力，因此檢驗工作者應(yīng)不斷提高自身素質(zhì)，加強(qiáng)使命感與責(zé)任心，盡職盡責(zé)認(rèn)真對待每一份待檢標(biāo)本，嚴(yán)格按照實(shí)驗室的標(biāo)準(zhǔn)化操作，試劑的選擇和準(zhǔn)備、樣品的采集和儲存、操作等方面，嚴(yán)格按照說明書要求，規(guī)范化操作，同時做好實(shí)驗室內(nèi)質(zhì)控[44，45]、室間質(zhì)評，排除影響因素，嚴(yán)格控制試驗環(huán)境，牢牢把關(guān)試劑選擇、試驗溫度、儀器設(shè)備等每一環(huán)節(jié)，最大限度地降低檢測的系統(tǒng)誤差，加強(qiáng)自身理論知識的學(xué)習(xí)，在工作中總結(jié)經(jīng)驗、揚(yáng)長避短，減少人為因素對試驗結(jié)果造成影響，提高檢測的準(zhǔn)確性，減少假陰性、假陽性結(jié)果的出現(xiàn)。

3 小結(jié)

ELISA檢測廣泛應(yīng)用于乙肝、丙肝、梅毒、艾滋以及結(jié)核等傳染類疾病的診斷，對于含有疑似干擾物的待檢樣本做相應(yīng)分析，在保證結(jié)果可靠的前提下盡量避免二次抽血。為保證檢驗工作者的自身安全，操作時必須帶好口罩、手套，穿好工作衣，嚴(yán)格進(jìn)行規(guī)范操作，防止交叉感染。有條件的情況下可使用酶聯(lián)免疫反應(yīng)加速儀縮短反應(yīng)時間，提高工作效率[46]。

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