P21和Bcl－2在腺性膀胱炎和膀胱移行細(xì)胞癌中的表達(dá)及意義

趙立江，陳福寶(.寧夏醫(yī)科大學(xué)，寧夏 銀川 750004;.寧夏醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院，寧夏 銀川 750004)

腺性膀胱炎(Cystitis glandularis，CG)為膀胱黏膜增生、化生性病變。目前多數(shù)人認(rèn)為，腺性膀胱炎是癌前病變，與膀胱上皮腫瘤關(guān)系密切。但是目前腺性膀胱炎預(yù)后及癌變的臨床監(jiān)測指標(biāo)報(bào)道少見，是急需解決的問題。P21基因突變是促發(fā)正常膀胱黏膜細(xì)胞惡變的一條重要途徑。Bcl－2是細(xì)胞凋亡的抑制基因，可延長細(xì)胞生存并增加分裂，與膀胱腫瘤的形成密切相關(guān)。筆者采用免疫組織化學(xué)的方法檢測P21和Bcl－2在正常膀胱組織、腺性膀胱炎及膀胱移行細(xì)胞癌中的表達(dá)，并探討其意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料:收集寧夏醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院2010年10月～2012年4月活檢及手術(shù)切除的石蠟包埋正常膀胱組織、腺性膀胱炎及膀胱移行細(xì)胞癌標(biāo)本161例;其中正常膀胱組織標(biāo)本10例，腺性膀胱炎標(biāo)本62例，膀胱移行細(xì)胞癌標(biāo)本89例，其中低級別尿路上皮癌37例，高級別尿路上皮癌52例;所有病例術(shù)前均未經(jīng)放療、化療及免疫治療。試劑:鼠抗P21單克隆抗體(即用型)及鼠抗Bcl－2單克隆抗體(即用型)，均購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

1.2 方法:應(yīng)用免疫組織化學(xué)二步法對各組石蠟包埋組織切片標(biāo)本進(jìn)行P21和Bcl－2表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行檢測。陰性對照切片用PBS替代第一抗體。分別由兩名經(jīng)驗(yàn)豐富的病理醫(yī)師在不知臨床和病理資料的情況下獨(dú)立觀察切片(至少5個(gè)具有代表性的視野，不少于1 000個(gè)細(xì)胞)，對免疫組化結(jié)果進(jìn)行評估。陽性結(jié)果判斷:胞漿或胞核出現(xiàn)黃色為陽性細(xì)胞。①在400倍光學(xué)顯微鏡下，通過攝像頭采集免疫組化切片圖像并輸入圖像分析系統(tǒng)，進(jìn)行單位視場內(nèi)陽性細(xì)胞及細(xì)胞總數(shù)計(jì)數(shù)。②每個(gè)病例隨機(jī)選取5個(gè)不同視野，用鼠標(biāo)點(diǎn)擊法計(jì)數(shù)陽性細(xì)胞和細(xì)胞總數(shù)。免疫組化結(jié)果判斷:陽性染色細(xì)胞數(shù)＜10%為(－);陽性染色細(xì)胞數(shù)10%～25%為(+);陽性染色細(xì)胞數(shù)25%～50%為(++);陽性染色細(xì)胞數(shù)≥50%為(+++)。凡達(dá)不到上述標(biāo)準(zhǔn)及顯色強(qiáng)度與背景無明顯差別者為陰性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:所有數(shù)據(jù)分析采用χ2檢驗(yàn)等相關(guān)檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 P21在正常膀胱組織、腺性膀胱炎和膀胱移行細(xì)胞癌組織的表達(dá):正常膀胱組織、腺性膀胱炎和膀胱移行細(xì)胞癌組織中P21的陽性表達(dá)分別為0/10，18/62(12.9%)和40/89 (44.94%)，P21陽性表達(dá)依次遞增，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，詳見表1。

膀胱移行細(xì)胞癌中低級別尿路上皮癌的 P21表達(dá)為59.46%，顯著高于高級別尿路上皮癌組31.58%的表達(dá)，詳見表2。

表1 正常膀胱組織、腺性膀胱炎、膀胱移行細(xì)胞癌中P21的表達(dá)(例)

表2 膀胱移行細(xì)胞癌中低級別尿路上皮癌及高級別尿路上皮癌P21的表達(dá)(例)

2.2 Bcl－2在正常膀胱組織、腺性膀胱炎和膀胱移行細(xì)胞癌組織的表達(dá):正常膀胱、腺性膀胱炎和膀胱移行細(xì)胞癌組織中Bcl－2的陽性表達(dá)分別為1/10(10%)，42/62(67.74%)，45/89(50.56%)，組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，詳見表3。膀胱移行細(xì)胞癌組中低級別尿路上皮癌與高級別尿路上皮癌組的Bcl－2的陽性表達(dá)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，詳見表4。

表3 正常膀胱組織、腺性膀胱炎、膀胱移行細(xì)胞癌中Bcl－2的表達(dá)(例)

表4 膀胱移行細(xì)胞癌中低級別尿路上皮癌及高級別尿路上皮癌Bcl－2的表達(dá)(例)

3 討論

Ras基因是從人膀胱癌細(xì)胞株中克隆到的第1個(gè)人類癌基因［1］，其編碼蛋白質(zhì)分子為21KD，稱為P21。P21蛋白與其他G蛋白具有同源性，有鳥苷酸結(jié)合的能力，并且有GTP酶的活性，定位于細(xì)胞膜內(nèi)側(cè)。目前相關(guān)研究認(rèn)為，在外界信號作用下，P21結(jié)合GTP，信號系統(tǒng)便處于開放狀態(tài)，使蛋白質(zhì)變構(gòu)而被效應(yīng)器識別，進(jìn)而產(chǎn)生生物學(xué)效應(yīng)，導(dǎo)致細(xì)胞增生，隨后P21蛋白發(fā)揮GTP酶活性，使GTP水解為GDP，又使信號系統(tǒng)關(guān)閉，當(dāng)P21突變導(dǎo)致其GTP酶活性下降，使P21一直處于與GTP結(jié)合的狀態(tài)，不斷傳導(dǎo)生長信號，造成細(xì)胞生長紊亂，導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。

本研究通過免疫組化方法檢測正常膀胱組織、腺性膀胱炎和膀胱移行細(xì)胞癌中P21的表達(dá)發(fā)現(xiàn)，P21在他們間呈遞增表達(dá)，并有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，提示腺性膀胱炎可能是正常膀胱組織惡變?yōu)榘螂装┑闹虚g階段，P21表達(dá)的腺性膀胱炎有潛在的惡變傾向。

進(jìn)一步研究，筆者應(yīng)用免疫組化方法在低級別尿路上皮癌與高級別尿路上皮癌中P21染色發(fā)現(xiàn)，低級別尿路上皮癌中P21表達(dá)顯著高于高級別尿路上皮癌。本研究提示，P21的表達(dá)為腫瘤發(fā)生過程中的早期現(xiàn)象，Ras基因的活化主要是在腫瘤的早期階段，所以P21陽性表達(dá)在早期較多，隨腫瘤的發(fā)展，Ras基因逐漸失活。

Bcl－2基因其產(chǎn)物為Bcl－2蛋白，Bcl－2基因從正常位置的18q21處并置到14q32，可使細(xì)胞異常表達(dá)Bcl－2蛋白。Bcl－2蛋白的過度表達(dá)可導(dǎo)致DNA受損細(xì)胞繼續(xù)生存，突變產(chǎn)物累積，促進(jìn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展。

文獻(xiàn)報(bào)道，膀胱癌中有Bcl－2蛋白過度表達(dá)的現(xiàn)象，且與正常膀胱黏膜細(xì)胞中存在顯著差異。倪少濱等通過在腺性膀胱炎與膀胱癌組織中Bcl－2的檢測發(fā)現(xiàn)［2］，Bcl－2的陽性率表達(dá)依次下降，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。目前對Bcl－2在正常膀胱組織、腺性膀胱炎和膀胱移行細(xì)胞癌中的表達(dá)尚無明確報(bào)道。本研究通過免疫組化方法檢測正常膀胱組織、腺性膀胱炎和膀胱移行細(xì)胞癌中P21的表達(dá)發(fā)現(xiàn)，多組間比較，Bcl－2在正常膀胱組織、腺性膀胱炎與膀胱移行細(xì)胞癌組織之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Bcl－2在腺性膀胱炎標(biāo)本中有42例陽性，陽性率為67.74%，說明其過度表達(dá)在腺性膀胱炎中就已存在。但是，在膀胱移行細(xì)胞癌中有45例Bcl－2表達(dá)呈陽性，陽性率50.56%，與腺性膀胱炎中Bcl－2的表達(dá)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。其可能原因?yàn)?當(dāng)病變尚處于活躍的炎性反應(yīng)性增生、化生階段或腫瘤前期病變時(shí)，Bcl－2即已參與其中發(fā)揮抑制細(xì)胞凋亡的作用。當(dāng)腫瘤發(fā)生后，雖繼續(xù)產(chǎn)生影響，其表達(dá)強(qiáng)度和表達(dá)率有所減弱，其作用地位也逐漸地為其他的癌基因所取代，如P21基因等，因此可以認(rèn)為，Bcl－2基因主要參與了腫瘤的早期事件。

進(jìn)一步研究，筆者應(yīng)用免疫組化方法在低級別尿路上皮癌與高級別尿路上皮癌中Bcl－2染色發(fā)現(xiàn)，低級別尿路上皮癌中Bcl－2表達(dá)低于高級別尿路上皮癌，無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

目前多認(rèn)為腺性膀胱炎是一種癌前病變，與膀胱腫瘤密切相關(guān)。筆者認(rèn)為，P21和Bcl－2可能在腺性膀胱炎發(fā)展成膀胱移行細(xì)胞癌中發(fā)揮了重要作用，其可作為腺性膀胱炎向膀胱癌轉(zhuǎn)變的檢測指標(biāo)之一。若將這兩種基因的聯(lián)合檢測應(yīng)用于臨床工作中，則可作為腺性膀胱炎癌變早期較有價(jià)值的參考指標(biāo)。P21和Bcl－2陽性的腺性膀胱炎，臨床上應(yīng)積極治療并密切隨訪。

［1］ 孟 彥，許純孝.Ras癌基因與膀胱癌［J］.山東醫(yī)藥雜志，2003，43(18):60.

［2］ 倪少濱，陳起引，鄧 索.p53和bcl－2在腺性膀胱炎及膀胱癌組織中的表達(dá)與意義［J］.2004，4:500.