2012年HIV篩查實(shí)驗(yàn)室室內(nèi)質(zhì)量控制分析的評價

黃新輝，鄒小健

(豐城市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科,江西 豐城 331100)

艾滋病 (Acquired Immune Deficiency Syndrome,AIDS)的流行給人類健康和經(jīng)濟(jì)社會發(fā)展帶來了嚴(yán)重的影響，要了解和掌握AIDS的感染情況，關(guān)鍵是醫(yī)院實(shí)驗(yàn)室的檢測技術(shù)，而HIV抗體的檢測是當(dāng)前AIDS診斷中最常用的方法，因此，提高實(shí)驗(yàn)室檢測的準(zhǔn)確性，減少假陽性和假陰性反應(yīng)的發(fā)生，對診斷AIDS十分重要。為了更嚴(yán)謹(jǐn)準(zhǔn)確地出示檢測報(bào)告，筆者對本室進(jìn)行了 ELISA法檢測HIV抗體的室內(nèi)質(zhì)量控制，現(xiàn)將質(zhì)控過程分析報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 材料 HIV抗體診斷試劑盒：上?？迫A生物有限公司生產(chǎn)ELISA法HIV抗體檢測試劑，試劑盒均在有效期內(nèi)使用；HIV抗體質(zhì)控血清購自衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心,規(guī)格為8NCU/ml抗-HIV質(zhì)控血清。

質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)血清：包括內(nèi)部對照質(zhì)控血清和外部對照質(zhì)控血清。內(nèi)部對照質(zhì)控血清為試劑盒內(nèi)提供的陰性和陽性對照，內(nèi)部對照血清是質(zhì)量控制的基礎(chǔ)。外部對照質(zhì)控血清是為了監(jiān)控HIV抗體檢測的穩(wěn)定性和重復(fù)性以及試劑盒批間差異而由實(shí)驗(yàn)室設(shè)置的一個弱陽性對照血清，以試劑盒臨界值(cut-off)的2～3倍為宜。用HIV抗體陰性血清梯度稀釋HIV抗體高濃度血清后得到，按每次使用量配制分裝而成，-20℃冷凍保存。不可反復(fù)凍融，一旦融化后應(yīng)該存放在2～8℃，一周內(nèi)使用完。

1.2 操作方法 HIV抗體檢測操作嚴(yán)格按照說明書及本室SOP標(biāo)準(zhǔn)文件的操作規(guī)程進(jìn)行操作。加樣時標(biāo)本從冰箱取出時必須平衡到室溫后才能加樣，每板設(shè)陰性對照各2孔、陽性對照各3孔，外部對照1孔，放入恒溫箱37℃孵育30min，孵育后洗板6次，每次洗板浸泡1min，并按我室洗板機(jī)SOP標(biāo)準(zhǔn)文件規(guī)定進(jìn)行洗滌。洗板后加酶標(biāo)抗體，再37℃孵育30min，按上法洗板，再加底物液，孵育10min加終止液，用酶標(biāo)儀雙波長(450nm、630nm)比色，計(jì)算測定結(jié)果。

在最佳條件下，對同一批質(zhì)控血清檢測20次，獲得1組S/CO值，求其均數(shù)(x)和標(biāo)準(zhǔn)差(s)，將均值和標(biāo)準(zhǔn)差分別在Levey-Jennings質(zhì)控圖的框架圖中標(biāo)示出來，繪制質(zhì)控圖。然后，在常規(guī)條件下，對同一批質(zhì)控品繪制質(zhì)控圖，以最佳條件下的S/CO值為縱坐標(biāo)，日期為橫坐標(biāo)，分別用紅筆畫出x±2s警告線，用藍(lán)筆畫出x±3s失控線，作出質(zhì)控圖框架。以后每日將質(zhì)控血清隨標(biāo)本一起測定，將質(zhì)控血清的S/CO值在質(zhì)控圖上找出相應(yīng)的點(diǎn)，將點(diǎn)與點(diǎn)用線連接，每月作一張質(zhì)控圖，反映日常工作質(zhì)量。

1.3 檢測儀器 Biocell 2010型酶標(biāo)儀：根據(jù)本室標(biāo)準(zhǔn)SOP文件的要求，定期進(jìn)行期間檢查，并詳細(xì)填寫期間檢查記錄。普朗全自動洗板機(jī)：嚴(yán)格按照本室標(biāo)準(zhǔn)SOP操作規(guī)程進(jìn)行自校準(zhǔn)，有自校準(zhǔn)報(bào)告。電熱恒溫培養(yǎng)箱(上海電工醫(yī)療器械廠)：調(diào)節(jié)并控制溫度在37℃左右。微量加樣器：均經(jīng)江西省南昌市計(jì)量所檢定合格，并在檢定周期內(nèi)使用。

1.4統(tǒng)計(jì)分析 數(shù)據(jù)分析均采用SPSS11.5軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果

2.1 2012年配制的外部對照質(zhì)控血清在最佳條件下連續(xù)20次檢測HIV抗體結(jié)果，其中陰性對照平均值0.098，陽性對照平均值2.598，獲得1組S/CO值，其均數(shù)(x)=2.011，標(biāo)準(zhǔn)差 s=0.113，CV＝5.6%。

2.2 2012年1月至2012年12月本室每月質(zhì)控結(jié)果見表1。

表1 2012年1月至2012年12月本室每月質(zhì)控結(jié)果

從表1可見，本實(shí)驗(yàn)室在本年度本批次的質(zhì)控品及質(zhì)控結(jié)果CV值均小于10%，表明本批次質(zhì)控血清的穩(wěn)定性和靈敏度較好，均符合抗-HIV診斷試劑盒變異系數(shù)的可行限要求。

3 討論

自從美國休哈特博士首創(chuàng)質(zhì)量控制圖以來，經(jīng)過幾十年的發(fā)展應(yīng)用，已成為廣義質(zhì)量管理和評價日常檢測數(shù)據(jù)是否正確的有效工具，也是最簡單、最有效的統(tǒng)計(jì)技術(shù)之一[1,2]。開展實(shí)驗(yàn)室質(zhì)控是保證實(shí)驗(yàn)室分析結(jié)果準(zhǔn)確性的必要基礎(chǔ)，也是保證實(shí)驗(yàn)間有可比性的關(guān)鍵。在抗-HIV篩查實(shí)驗(yàn)室中觀察臨界值對照的動態(tài)變化是監(jiān)控每一次檢驗(yàn)和各批次檢驗(yàn)之間變化的一種方法，檢驗(yàn)過程中十分微小的變化都可以引起人們的注意。如臨界值對照偏移過度，比如臨界值向負(fù)值偏移，常常提示同批檢驗(yàn)樣品有可能出現(xiàn)假陰性[3,4]。

室內(nèi)質(zhì)量控制是實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部對所有影響檢測質(zhì)量的各個環(huán)節(jié)進(jìn)行系統(tǒng)控制，目的是讓檢驗(yàn)結(jié)果更準(zhǔn)確可靠。本室2012年所開展的HIV室內(nèi)質(zhì)控工作中，用ELISA法檢測HIV抗體，每次實(shí)驗(yàn)外部對照質(zhì)控血清的S/CO值均在Levey-Jennings質(zhì)控規(guī)定范圍內(nèi)波動，表明實(shí)驗(yàn)條件正常，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)可靠[5,6]。如果外部對照質(zhì)控血清的S/CO值超出Levey-Jennings質(zhì)控失控規(guī)則范圍，稱為失控，則本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果不能被接受，應(yīng)及時分析找出失控的原因，及時糾正，對檢驗(yàn)過程進(jìn)行回顧性分析，查找原因后給予糾正并重復(fù)測試，并最后作好試驗(yàn)記錄。按HIV抗體檢測的要求把臨界值上下10%的范圍定為灰區(qū)，對灰區(qū)標(biāo)本要進(jìn)行復(fù)測，以減少假陰性和假陽性結(jié)果的出現(xiàn)，并對其三個月后進(jìn)行跟蹤復(fù)測。引起室內(nèi)質(zhì)控失控的原因很多[7,8]。如換用新批號診斷試劑、儀器設(shè)備未經(jīng)校定，加樣量不準(zhǔn)確，檢驗(yàn)人員未經(jīng)培訓(xùn)，質(zhì)控血清反復(fù)凍融等，要及時查找原因予以糾正[9]。為了提高艾滋病的檢測水平，購買質(zhì)量可靠的 試劑材料也是很重要的，同時實(shí)驗(yàn)人員要加強(qiáng)工作責(zé)任心，實(shí)驗(yàn)過程中要嚴(yán)格按照操作規(guī)程，加入血液標(biāo)本時要避免混入纖維蛋白原，放人低溫冰箱的血清不能反復(fù)凍融，灰區(qū)的標(biāo)本要進(jìn)行復(fù)檢，能做到以上這幾點(diǎn)，才能避免假陽性和假陰性的發(fā)生，使艾滋病的檢測工作能夠準(zhǔn)確、有效地開展[10]。

室內(nèi)質(zhì)控是對檢驗(yàn)結(jié)果的即時性評價，通過對室內(nèi)質(zhì)控結(jié)果的連續(xù)觀察，監(jiān)測實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)結(jié)果的精密性[11]。室內(nèi)質(zhì)控是質(zhì)量保證的基礎(chǔ)，沒有完善的室內(nèi)質(zhì)控措施就談不上質(zhì)量保證，即使在室間質(zhì)評中取得很好的成績也不能說明實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)結(jié)果的可靠性。因此，實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量保證工作，應(yīng)首先從室內(nèi)質(zhì)控抓起，持之以恒，不斷觀察、分析和解決實(shí)驗(yàn)中的質(zhì)量問題，才能使檢驗(yàn)工作的質(zhì)量得到穩(wěn)步提高[5,12]。

總之，要解決我們在質(zhì)控考核中所發(fā)現(xiàn)的問題，關(guān)鍵在于檢測技術(shù)人員在檢測中應(yīng)具有高度責(zé)任心，認(rèn)真對待每一環(huán)節(jié)，嚴(yán)格按照操作規(guī)程進(jìn)行操作，就能避免類似問題的出現(xiàn)，把艾滋病檢測工作做得更好。

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