帕羅西汀對(duì)大鼠海上災(zāi)害創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙的影響

賀順龍，謝培增，汪先兵，周赤龍，朱 暉

創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙(post-traumatic stress disorder，PTSD)是對(duì)創(chuàng)傷等嚴(yán)重應(yīng)激因素的一種異常精神反應(yīng)。在平時(shí)的陸地災(zāi)害中，普通人群PTSD的患病率為7% ～12%［1］。隨著海洋科學(xué)和航海事業(yè)的發(fā)展，平戰(zhàn)時(shí)海上災(zāi)害急劇增加，海上災(zāi)害PTSD的患病率比陸地高而嚴(yán)重［2］。本研究建立海上創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙(maritime post-traumatic stress disorder，MPTSD)動(dòng)物模型，選用不同劑量帕羅西汀進(jìn)行干預(yù)，探討海上應(yīng)激后帕羅西汀(paroxetine)對(duì)大鼠MPTSD的治療作用。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組

動(dòng)物:健康雄性 Sprague-Dawley大鼠50只，體質(zhì)量(200±20)g。光亮/黑暗周期為12 h/12 h，環(huán)境溫度為22～25℃，相對(duì)濕度60%，分籠飼養(yǎng)于塑料籠中(50 cm×30 cm×20 cm)，常規(guī)攝食攝水，飼養(yǎng)1周后開(kāi)始實(shí)驗(yàn)。根據(jù)動(dòng)物的應(yīng)激狀況和帕羅西汀用量的不同，將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物按數(shù)字表法隨機(jī)分為5組:空白對(duì)照組(空白組，不予應(yīng)激和不給藥)、海上應(yīng)激組(應(yīng)激組，予以應(yīng)激，不給藥)、單純用藥組(單純組，不予應(yīng)激，但給帕羅西汀3 mg/(kg·d))、常規(guī)劑量組(常量組，予以應(yīng)激，帕羅西汀3 mg/(kg·d))、大劑量組(大量組，予以應(yīng)激，帕羅西汀10 mg/(kg·d))，每組10只。

1.2 動(dòng)物模型的建立

1.2.1 實(shí)驗(yàn)條件 海上氣溫(Ta)(32±5)℃，相對(duì)濕度(RH)(92.3±6.0)%;海上風(fēng)力4 ～6 級(jí);海面浪高3～5 m。全部實(shí)驗(yàn)在醫(yī)院船航行中進(jìn)行，艦船搖擺度15°～30°。

1.2.2 動(dòng)物的應(yīng)激方法 首先對(duì)大鼠進(jìn)行2 h的緊密束縛［3］，隨后將大鼠放進(jìn)直徑為30 cm，高50 cm的圓形透明玻璃缸，內(nèi)裝入40 cm高的海水(NaC1 含量25.3 g/L，pH 8.1，滲透壓 1250 ～1350 mmol/L，平均水溫21～23℃)，玻璃缸固定放在醫(yī)院船甲板上，強(qiáng)迫游泳20 min，休息15 min后乙醚麻醉至意識(shí)喪失，在籠中不經(jīng)任何打擾，常規(guī)喂養(yǎng)15 d。

1.2.3 藥物應(yīng)用 (1)藥物配制:鹽酸帕羅西汀配制成所需濃度 0.015 mg/ml［3 mg/(kg·d)］、0.3 mg/ml［10 mg/(kg·d)］。(2)用藥方法:采用飲水給藥，應(yīng)激后當(dāng)天單純組、常量組、大量組按配制要求開(kāi)始連續(xù)飲水給藥15 d，空白組、應(yīng)激組大鼠自由飲用自來(lái)水15 d。

1.3 行為測(cè)定

1.3.1 曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)［4］在應(yīng)激結(jié)束后第15天進(jìn)行測(cè)試，分析大鼠的活動(dòng)次數(shù)、水平運(yùn)動(dòng)路程，各組間相互比較。

1.3.2 高架十字實(shí)驗(yàn)［5］應(yīng)激結(jié)束后第15天進(jìn)行測(cè)試，記錄大鼠開(kāi)臂停留時(shí)間以及大鼠進(jìn)入開(kāi)臂的次數(shù)等行為學(xué)指標(biāo)，各組間相互比較。

1.3.3 MWM(morris water maze)水迷宮定位航行實(shí)驗(yàn)［6］測(cè)量平均上臺(tái)潛伏期，在第 1、2、3、4、5 天分別重復(fù)上述步驟，各組內(nèi)不同時(shí)間和各組組間相互比較。

1.3.4 MWM水迷宮空間探索實(shí)驗(yàn)［7］測(cè)量大鼠在靶象限活動(dòng)時(shí)間的比率和穿臺(tái)次數(shù)，各組間相互比較。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 12.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，實(shí)驗(yàn)結(jié)果采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，多組均數(shù)的比較采用方差分析，率的比較采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果

曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)中，應(yīng)激組水平活動(dòng)度和中央停留時(shí)間分別為(5748.56 ±519.16)mm 和(24.68 ±3.29)s，顯著低于其他各組;大量組中央停留時(shí)間為(51.96±5.43)s］，高于其他組(F=6.927，P＜0.05)，單純組與空白組和常量組相互比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。見(jiàn)表1。

2.2 各組大鼠高架十字實(shí)驗(yàn)結(jié)果

在高架十字測(cè)試中，大鼠開(kāi)臂進(jìn)入次數(shù)和停留時(shí)間的百分比，應(yīng)激組分別為(23.59±3.09)%、(14.58 ±3.19)%;大量組分別為 (49.59 ±5.58)%、(24.67 ±5.50)%，2 組參數(shù)分別與其他組相互比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F≥7.981，P＜0.05)。見(jiàn)表1。

2.3 各組大鼠MWM水迷宮定位航行實(shí)驗(yàn)結(jié)果

在MWM定位航行測(cè)試中，5組大鼠上臺(tái)潛伏期均數(shù)值第1至第5天逐漸降低，后一天數(shù)值與前一天數(shù)值比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F≥11.686，P＜0.01)。5組組間第1～5天大鼠上臺(tái)潛伏期均數(shù)都不相同，應(yīng)激組潛伏期高于空白組、帕羅西汀常量組和大量組(F≥7.641，P＜0.05)，第2天起大量組與常量組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F≥7.641，P＜0.05)。見(jiàn)表2。

2.4 大鼠在MWM水迷宮空間探索實(shí)驗(yàn)結(jié)果

5組大鼠之間靶象限花費(fèi)時(shí)間的百分比和穿臺(tái)次數(shù)均不相同，應(yīng)激組靶象限活動(dòng)時(shí)間百分比和穿越站臺(tái)次數(shù)顯著低于其他4組(F≥7.641，P＜0.05)，大劑量組與常量組2項(xiàng)參數(shù)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F≥7.847，P＜0.05)，見(jiàn)表3。

表3 各組大鼠MWM水迷宮空間探索實(shí)驗(yàn)結(jié)果比較(每組n=10，±s)

表3 各組大鼠MWM水迷宮空間探索實(shí)驗(yàn)結(jié)果比較(每組n=10，±s)

注:與其他4組比較aP＜0.05;與常量組比較bP＜0.05

組別 靶象限花費(fèi)時(shí)間的百分比(%) 穿越站臺(tái)次數(shù)(次)63.91 ± 5.19 3.60 ±0.44應(yīng)激組 39.40 ±4.63a 1.39 ±0.20a單純組 60.33 ±4.58 3.76 ±0.40常量組 63.35 ±6.28 3.76 ±0.41大量組 56.53 ±5.84b 2.79 ±0.51空白組b

3 討論

陸地災(zāi)害如地震、空難、瘟疫等重大災(zāi)難事件對(duì)人類來(lái)說(shuō)是突發(fā)的，往往給人們帶來(lái)嚴(yán)重的心理反應(yīng)，由于其突發(fā)性、不可預(yù)測(cè)性，會(huì)導(dǎo)致個(gè)體產(chǎn)生無(wú)法抵御的感覺(jué)，引發(fā)一系列生理、心理和行為反應(yīng)，如沮喪、緊張、焦慮和恐懼等［8］。海上災(zāi)害是指源于海洋的自然災(zāi)害和人為災(zāi)害，自然災(zāi)害主要有海浪、海冰、赤潮、海嘯和風(fēng)暴潮、龍卷風(fēng)、臺(tái)風(fēng)等;人為災(zāi)害在海上主要有戰(zhàn)爭(zhēng)、碰撞、觸礁、火災(zāi)與爆炸等。海上災(zāi)害傷員機(jī)體創(chuàng)傷主要特點(diǎn)是傷因多、傷情重、傷口受海水浸泡和海上其他因素所致的二次創(chuàng)傷等［9］;海上災(zāi)害傷員心理創(chuàng)傷主要有以下特點(diǎn):由于海上災(zāi)害傷員機(jī)體創(chuàng)傷特點(diǎn)和海上災(zāi)害救生難點(diǎn)，傷員除災(zāi)害時(shí)的恐怖現(xiàn)場(chǎng)的應(yīng)激外，還因落水后傷員在海水中掙扎求生，較長(zhǎng)時(shí)間暴露在恐怖的海難場(chǎng)面中，可反復(fù)受到強(qiáng)烈的精神刺激［10］，表現(xiàn)出病理性重現(xiàn)、易激惹癥狀、持續(xù)性和警覺(jué)性增高和回避癥狀。本研究中觀察到海上應(yīng)激后大鼠癥狀表現(xiàn)嚴(yán)重。

表1 各組大鼠曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)、高架十字實(shí)驗(yàn)結(jié)果比較(每組n=10，±s)

表1 各組大鼠曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)、高架十字實(shí)驗(yàn)結(jié)果比較(每組n=10，±s)

注:與其他4組比較aP＜0.05

組別高架十字實(shí)驗(yàn)水平活動(dòng)度(mm) 中央停留時(shí)間(s) 開(kāi)臂進(jìn)入(%) 開(kāi)臂停留(%)曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)空白組 11 595.93 ± 1006.69 44.58 ± 5.26 44.58 ±5.26 22.60 ±2.78應(yīng)激組 5748.56 ± 519.16a 24.68 ± 3.29a 23.59 ±3.09a 14.58 ±3.19a單純組 11 973.27 ± 1382.96 49.28 ± 5.26 43.31 ±4.91 19.31 ±3.63常量組 10 817.59 ± 1082.56 50.29 ± 5.40 40.78 ±5.71 21.98 ±4.38大量組 11 119.81 ± 749.73 51.96 ± 5.43a 49.59 ±5.58a 24.67 ±5.50a

表2 各組大鼠MWM水迷宮定位航行實(shí)驗(yàn)結(jié)果比較(每組n=10，s，±s)

表2 各組大鼠MWM水迷宮定位航行實(shí)驗(yàn)結(jié)果比較(每組n=10，s，±s)

注:與其他4組比較aP＜0.05;與常量組比較bP＜0.05

組別 第1天 第2天 第3天 第4天 第5天空白組 61.40 ±4.16 26.05 ±1.85 20.93 ±1.28 17.19 ±0.9612.09 ± 1.19應(yīng)激組 62.69 ±3.74 42.53 ±1.94a 33.21 ±2.01a 22.20 ±1.89a 16.90 ±1.24a單純組 59.21 ±5.19a 24.14 ±1.86 21.31 ±2.41 15.10 ±0.71 12.81 ±0.84常量組 62.35 ±6.35 33.89 ±2.19 25.64 ±2.00 17.29 ±1.59 12.64 ±0.90大量組 62.36 ±4.43 31.90 ±2.56b 23.83 ±2.40b 16.46 ±1.58b 11.76 ±1.79b

文獻(xiàn)報(bào)道［11］，在陸地災(zāi)害 PTSD防治上，采用氟西汀、帕羅西汀、舍曲林治療取得了較好的療效。對(duì)PTSD的模型方面多采用電擊模型、捕食情景應(yīng)激模型和SPS等動(dòng)物模型，對(duì)PTSD的檢測(cè)方法多采用曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)、高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)、MWM水迷宮實(shí)驗(yàn)、空間探索實(shí)驗(yàn)。曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)和高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)可以正確反應(yīng)大鼠的探究行為和焦慮、恐懼情緒。Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)主要用于評(píng)價(jià)大鼠空間認(rèn)知能力。本研究制作出MPTSD動(dòng)物模型的目的是用于海上災(zāi)害PTSD的研究。本研究選擇帕羅西汀對(duì)大鼠海上災(zāi)害PTSD進(jìn)行治療，是因?yàn)榕亮_西汀是一種選擇性5-HT再攝取抑制劑，常用劑量時(shí)，對(duì)其他遞質(zhì)無(wú)明顯影響。帕羅西汀的藥理作用是通過(guò)阻止5-HT的再吸收而提高神經(jīng)突觸間隙內(nèi)5-HT的濃度，從而達(dá)到防治海上災(zāi)害PTSD的作用。實(shí)驗(yàn)觀察看到:(1)給予應(yīng)激而不給藥的大鼠(應(yīng)激組)，在曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)和高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)中，大鼠水平活動(dòng)路程、中央格活動(dòng)時(shí)間均明顯減少，在Morris水迷宮的定位航行實(shí)驗(yàn)和空間探索實(shí)驗(yàn)中，大鼠的上臺(tái)潛伏期明顯延長(zhǎng)，穿臺(tái)次數(shù)明顯減少，均說(shuō)明動(dòng)物探究行為受到抑制，回避和恐懼、焦慮水平增高，環(huán)境適應(yīng)能力下降和學(xué)習(xí)記憶功能降低。(2)不給予應(yīng)激而給藥大鼠(單純組)的行為與空白組無(wú)明顯差異，說(shuō)明帕羅西汀對(duì)正常鼠的行為、學(xué)習(xí)記憶功能無(wú)明顯的影響，提示帕羅西汀可作為PTSD的理想治療用藥。(3)給予應(yīng)激后采用帕羅西汀干預(yù)(常量組和大量組)顯示出較好的效果，應(yīng)激后即開(kāi)始給予不同劑量帕羅西汀進(jìn)行干預(yù)，均能改善大鼠在各實(shí)驗(yàn)中的行為表現(xiàn)，活動(dòng)度、中央格活動(dòng)時(shí)間，改善大鼠在Morris水迷宮中的行為表現(xiàn)，提高大鼠的學(xué)習(xí)和記憶能力，且證明大量組多項(xiàng)參數(shù)明顯優(yōu)于常量組，說(shuō)明帕羅西汀治療海上災(zāi)害PTSD有較好療效，且證明適當(dāng)增加帕羅西汀的用量療效更好。

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