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    小兒健脾膏促胃腸動力作用研究

    2013-03-06 08:29:02李曉東陳婉姬楊明華葉俊杰
    關(guān)鍵詞:離體健脾胃腸

    李曉東,陳婉姬,楊明華,葉俊杰

    (1.浙江中醫(yī)藥大學(xué),杭州 310053;2.浙江省立同德醫(yī)院,杭州 310012;3.浙江省中藥研究所,杭州 310012)

    小兒健脾膏促胃腸動力作用研究

    李曉東1,陳婉姬2*,楊明華3*,葉俊杰1

    (1.浙江中醫(yī)藥大學(xué),杭州 310053;2.浙江省立同德醫(yī)院,杭州 310012;3.浙江省中藥研究所,杭州 310012)

    目的 觀察小兒健脾膏對離體豚鼠回腸和大鼠胃肌收縮、在體大鼠胃肌收縮及整體小鼠胃排空與腸推進(jìn)的影響。方法 離體和在體實驗中,運用生物機(jī)能實驗系統(tǒng)檢測小兒健脾膏對回腸和胃肌收縮張力的影響;整體實驗中,運用稱重法和標(biāo)記法測定小鼠胃排空與腸推進(jìn)比率。結(jié)果 離體實驗中,不同劑量的小兒健脾膏均可增大豚鼠回腸和大鼠胃肌的平均收縮幅度;在體實驗中,中、高劑量小兒健脾膏可顯著增加大鼠胃肌的平均收縮幅度,且高劑量對大鼠胃肌的收縮與新斯的明具有協(xié)同作用;整體實驗中,不同劑量的小兒健脾膏均能顯著加速阿托品所致胃腸動力障礙模型小鼠的胃排空與腸推進(jìn)。結(jié)論 小兒健脾膏具有促進(jìn)胃腸動力的藥理作用。

    小兒健脾膏;胃腸動力;貼劑;藥理作用

    隨著生活節(jié)奏的加快及飲食習(xí)慣的變化,胃腸動力障礙性疾病不斷增多,受其困擾的人群數(shù)量成倍增長。研究顯示,約25%的美國人及5%~10%的亞洲人存在胃腸動力障礙性疾病,目前國內(nèi)兒科常見消化道疾病中,胃腸動力障礙所致的功能性消化不良(FD)的發(fā)病率高達(dá)20%[1-2],且有關(guān)西藥普遍不良反應(yīng)較大,故從中藥中挖掘開發(fā)安全高效、不良反應(yīng)小的促胃腸動力藥具有重要意義。小兒健脾膏為浙江省立同德醫(yī)院兒科陳婉姬主任的經(jīng)驗方,是以穴位貼敷方式治療小兒消化病的外用中藥膏劑,該方主要由山楂、丁香、吳茱萸、肉桂等組成,本實驗在臨床應(yīng)用基礎(chǔ)上,對其藥效進(jìn)行研究,分別從動物離體、在體及整體水平觀察其對胃腸動力的影響。

    1 材料與方法

    1.1 動物

    普通級豚鼠,♀♂各半,250~300 g,合格證號:SCXK(蘇)2009-0005;清潔級SD大鼠,♀♂各半,180~220 g,合格證號:SCXK(浙) 2008-0033;清潔級ICR小鼠,♀♂各半,18~22 g,合格證號:SCXK(浙)2008-0033,均由浙江省醫(yī)學(xué)科學(xué)院動物中心提供。

    1.2 藥物與試劑

    1.2.1 藥物 小兒健脾膏方藥材主要有山楂、丁香、吳茱萸、肉桂,由浙江省立同德醫(yī)院提供(經(jīng)浙江省立同德醫(yī)院張家建主任藥師鑒定)。其制備方法為:原方藥材各自粉碎,過100目篩,混合,加適量姜蒜汁與輔料制成軟膏丸。實驗時,將藥物用去離子水配制成濃度合適的混懸液。離體實驗藥物劑量以浴槽中藥物濃度計;在體實驗,藥液直接加到胃腸器官表面;整體實驗,軟膏用膠布外貼固定于小鼠腹部胃處(事先將此處毛發(fā)剃去),劑量按臨床用量(每劑生藥量62 g)換算設(shè)定,低、中、高劑量依次為5,10,20 g·kg-1。所有劑量均以生藥量計。多潘立酮(西安楊森制藥有限公司,批號:H1091003,規(guī)格:10 mg·片-1);鹽酸阿托品注射液(天津金耀氨基酸有限公司,批號:H12020383,規(guī)格:1 mg·mL-1);甲硫酸新斯的明注射液[上海信誼金朱藥業(yè)有限公司,批號:H31022770,規(guī)格:1 mg·(2 mL)-1]。

    1.2.2 試劑 克氏營養(yǎng)液成分:NaCl 5.54 g·L-1,KCl 0.35 g·L-1,KH2PO40.16 g·L-1,MgSO4·7H2O 0.29 g·L-1,NaHCO32.1 g·L-1,CaCl20.28 g·L-1,C6H12O62.1 g·L-1,以去離子水配制。烏來糖(國家集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司,批號:T20080917),用去離子水配制成20%水溶液。

    1.3 儀器

    CFS-1J張力傳感(換能)器(安徽蚌埠市賽英電子技術(shù)研究所);MD2000U Super Lab(江蘇BME學(xué)會醫(yī)電研究所);超級恒溫水槽501S型(上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠);L-550臺式低速大容量離心機(jī)(長沙湘儀離心機(jī)儀器有限公司)。

    1.4 離體實驗

    開展工程建設(shè)項目審批制度改革,是黨中央、國務(wù)院推進(jìn)“放管服”改革、加快轉(zhuǎn)變政府職能的重大決策部署。南京作為全國16個試點地區(qū)之一,自試點工作啟動以來,全面貫徹習(xí)近平新時代中國特色社會主義思想,認(rèn)真落實黨中央、國務(wù)院“放管服”改革要求,按照全國工程建設(shè)項目審批制度改革試點工作座談會統(tǒng)一部署,聚焦重點領(lǐng)域和關(guān)鍵環(huán)節(jié),對工程建設(shè)項目審批制度進(jìn)行全流程、全覆蓋改革,筑造工程建設(shè)項目審批制度改革和營商環(huán)境優(yōu)化的“南京模式”“南京品牌”。

    1.4.1 藥物對離體豚鼠回腸肌的影響 按文獻(xiàn)[3]方法,豚鼠于實驗前禁食24 h,飲水不限,實驗時重?fù)羝漕^部致死,立即剖腹取回腸段,置入氧飽和的克氏營養(yǎng)液中,分離腸系膜,用克氏液將腸內(nèi)容物沖凈,制備2~3 cm的腸段。將腸段兩端穿線結(jié)扎,一端系于通氣鉤上,輕放入恒溫通氧浴槽中,另一端系于CFS-1J換能器上,連接四通道記錄儀,描記腸段收縮運動。浴槽灌液為20 mL,溫度37±0.5 ℃,通氣調(diào)節(jié)速度為每秒出現(xiàn)1~2個氣泡,穩(wěn)定15 min后,開始進(jìn)行張力檢測。腸段施加1 g前負(fù)荷進(jìn)行定標(biāo)后,將描記線調(diào)節(jié)至1 g左右,收縮平穩(wěn)2~3 min,分別加入不同劑量小兒健脾膏混懸液及40 μL 1 mg·mL-1嗎丁啉藥物水溶液,待其穩(wěn)定后再記錄2~3 min,去除壓力,營養(yǎng)液清洗至恢復(fù)加藥前狀態(tài)。記錄加藥前90 s內(nèi)曲線平均幅度為對照值,加藥后記錄的90 s內(nèi)曲線平均幅度為效應(yīng)值,收縮平均幅度和張力變化以變化百分?jǐn)?shù)來表示,變化百分?jǐn)?shù)=(效應(yīng)值-對照值)/對照值×100%。

    1.4.2 藥物對離體大鼠胃肌的影響 SD大鼠于實驗前禁食24 h,飲水不限。實驗時重?fù)羝漕^部致死,立即沿腹中線剖腹取胃,置入氧飽和克氏營養(yǎng)液中。沿胃大彎打開胃,以克氏液沖洗胃內(nèi)容物,去除胃黏膜。在胃底沿垂直于胃長軸方向剪取得到環(huán)形肌條,沿胃長軸方向剪取得到縱形肌,連接CFS-1J換能器,胃肌條在開始實驗前孵育1 h,每20 min更換一次37 ℃克式營養(yǎng)液,具體操作及加藥方式同“1.4.1”。

    1.5 在體實驗

    1.5.1 藥物對在體大鼠胃肌收縮活動的影響 SD大鼠腹腔注射20%烏來糖0.75 mL·(100 g)-1進(jìn)行麻醉。于腹部開腹暴露胃,剝離胃表面脂肪,將胃兩端用細(xì)繩固定,胃底位置用細(xì)繩將整個胃綁牢,保持胃正常收縮狀態(tài),細(xì)繩另一端系于CFS-1J換能器上,連接四通道記錄儀,記錄收縮運動[3]。胃肌施加2 g前負(fù)荷進(jìn)行定標(biāo)后,將描記線調(diào)節(jié)至2 g左右,收縮平穩(wěn)1~2 min,胃底位置給予40 μL藥物水溶液,待其穩(wěn)定后再記錄1~2 min,去除壓力,用37 ℃生理鹽水進(jìn)行清洗至恢復(fù)加藥前狀態(tài)。收縮幅度檢測同“1.4.1”項下方法。

    1.5.2 藥物對新斯的明致在體大鼠胃肌收縮作用的影響 按“1.5.1”項下方法取出大鼠在體胃肌。以營養(yǎng)液清洗后,按“1.4.1”項下方法操作進(jìn)行實驗,先加入3.12 mg·mL-1新斯的明水溶液40 μL,待其收縮平穩(wěn)后再加入小兒健脾膏藥液40 μL,記錄給藥前后收縮曲線平均幅度變化。

    1.6 整體實驗

    ICR小鼠60只,♀♂各半,隨機(jī)分為正常對照組、模型組、陽性對照組、小兒健脾膏外敷低、中、高劑量組,每組10只。正常對照組和模型組按0.1 mL·(10 g)-1灌胃給予蒸餾水,陽性對照組按0.1 mL·(10 g)-1灌胃給予0.01 g·kg-1嗎叮啉;小兒健脾膏外敷組,腹部去毛,以膠布將藥物貼于腹部胃的位置,保持2 h,連續(xù)3 d,第3天給藥后,各組小鼠禁食不禁水24 h,第4天外敷組貼藥2 h時,陽性對照組按0.1 mL·(10 g)-1灌胃給予多潘立酮,正常對照組、模型組給予等量的蒸餾水,30 min后各組腹腔注射阿托品2 mg·kg-1,其中正常對照組給予等量的生理鹽水。各組注射阿托品后30 min灌胃給予5%炭末混懸液(炭末∶3% CMC-Na=1∶20) 0.3 mL·只-1,20 min后脫頸椎處死小鼠,剪開腹部,結(jié)扎胃賁門和幽門端,取胃稱胃全重,沿胃大彎剪開,洗去內(nèi)容物,稱量得到胃凈重,計算胃內(nèi)容物殘留率,胃殘留率=(胃全重-胃凈重)/(炭末混懸液質(zhì)量+所給藥物質(zhì)量)×100%;在取小鼠胃的同時,迅速取小腸,不加牽引平鋪于玻璃板上,分別量取幽門部到回盲部的距離及小腸總長度,幽門到炭末混懸液前沿作為炭末推進(jìn)距離,計算小腸推進(jìn)率,小腸推進(jìn)率=炭末混懸液推進(jìn)距離/小腸總長度×100%[4]。

    1.7 統(tǒng)計學(xué)處理

    2 結(jié)果

    2.1 離體實驗

    2.1.1 藥物對離體豚鼠回腸的影響 與正常對照組比較,多潘立酮組對離體大鼠胃肌條的收縮幅度沒有明顯變化;不同劑量的小兒健脾膏均可增大離體回腸的平均收縮幅度(P<0.01,P<0.05),并存在一定劑量依賴,見表1。

    表1 小兒健脾膏對離體豚鼠回腸平均收縮幅度的影響(n=10)Tab 1 Effects of Xiaoer Jianpi cream on the contraction tension of guinea pig ileum(n=10)

    2.1.2 藥物對離體大鼠胃肌的影響 與正常對照組相比,多潘立酮組對離體大鼠胃肌條的收縮幅度沒有明顯變化。不同劑量的小兒健脾膏均可增大離體胃肌條的平均收縮幅度(P<0.01),并存在一定的劑量依賴,見表2。

    表2 小兒健脾膏對離體大鼠胃肌條平均收縮幅度的影響(n=10)Tab 2 Effects of Xiaoer Jianpi cream on the contraction tension of rat stomach muscle(n=10)

    2.2 在體實驗

    2.2.1 藥物對在體大鼠胃肌的影響 與正常對照組(去離子水組)相比,多潘立酮對促進(jìn)在體大鼠胃肌收縮有一定的作用,小兒健脾中劑量和高劑量作用十分顯著,小劑量組對在體大鼠胃肌收縮活動影響不大,見圖1~3。

    圖1 對照組在體大鼠胃肌收縮活動(n=8)Fig 1 The contraction tension of rat stomach muscle in situ of control group(n=8)

    圖3 各劑量小兒健脾膏對在體大鼠胃肌收縮活動的影響(n=8)Fig 3 The effects of different doses of Xiaoer Jianpi cream on the contraction tension of rat stomach muscle in situ(n=8)

    2.2.2 藥物對新斯的明致在體大鼠胃肌收縮作用的影響 新斯的明可明顯增大胃肌的平均收縮幅度,小兒健脾膏大劑量可進(jìn)一步促進(jìn)新斯的明對胃肌的收縮作用,見圖4。

    圖4 小兒健脾膏對新斯的明的協(xié)同作用(n=8)Fig 4 The synergistic effect of Xiaoer Jianpi cream combine with neostigmine(n=8)

    2.3 對阿托品致胃腸動力障礙小鼠胃排空與腸推進(jìn)的影響

    與正常對照組相比,模型組的胃內(nèi)容物殘留率明顯高于正常對照組(P<0.05);與模型組相比,多潘立酮、不同劑量的小兒健脾膏均可促進(jìn)小鼠的胃排空(P<0.05)。見表3。

    與正常對照組相比,模型組小鼠的小腸推進(jìn)率模型降低(P<0.05);與模型組相比,多潘立酮、不同劑量的小兒健脾膏均可明顯促進(jìn)小鼠的小腸推進(jìn)率(P<0.05)。見表3。

    表3 藥物對小鼠小腸推進(jìn)、胃排空的影響(n=10)Tab 3 Effects of Xiaoer Jianpi cream on the gastric emptying and intestine propulsion(n=10)

    3 討論

    已知胃腸平滑肌的收縮主要受Ach的M受體支配,西藥的作用機(jī)制是依靠抑制或興奮神經(jīng)系統(tǒng)中的多巴胺或5-TH受體,最終使胃腸道Ach含量增加。本研究離體和在體實驗結(jié)果表明:①不同劑量的小兒健脾膏均可提高離體豚鼠回腸、離體及在體大鼠胃肌的收縮能力,并且中、高劑量組作用顯著;②小兒健脾膏高劑量組可協(xié)同膽堿酯酶抑制劑新斯的明對離體大鼠胃肌的收縮作用;③M受體激動劑毛果蕓香堿和抗膽堿酯酶藥新斯的明,促進(jìn)離體回腸和胃肌收縮作用顯著,而多潘立酮作用不明顯,與這與某些文獻(xiàn)報道不符[5]。原因可能是文獻(xiàn)中多潘立酮是在阿托品等膽堿能神經(jīng)被阻斷情況下,才發(fā)揮促進(jìn)胃腸收縮作用的,而本實驗研究對象為膽堿能神經(jīng)并無阻斷的正常離體胃腸,故其促進(jìn)胃腸收縮作用表現(xiàn)不明顯。

    胃殘留率及胃腸推進(jìn)率實驗是比較經(jīng)典的胃腸動力檢測方法,可以直觀地反映胃腸蠕動的情況。本研究整體實驗結(jié)果表明:與正常組比較,M受體阻斷劑阿托品組胃腸動力明顯減弱,證明造模成功;與模型組比較,外敷小兒健脾膏各劑量組均能顯著加速阿托品所致胃腸動力障礙模型小鼠的胃排空與腸推進(jìn),證明小兒健脾膏具有促胃腸動力作用。

    目前,西藥治療胃腸動力障礙存在一定缺陷,如多潘立酮對食管反流患者無效,胃復(fù)安易產(chǎn)生椎體外系反應(yīng)等。小兒健脾膏為純中藥制劑,主要由山楂、丁香、吳茱萸、肉桂組成,山楂消食化積,丁香溫中降逆,吳茱萸降逆止嘔。目前在臨床上,小兒健脾膏通過穴位貼敷療法,對小兒脾胃虛弱、功能性消化不良及腹泄等療效肯定;穴位貼敷法使各中藥有效成分通過經(jīng)絡(luò)氣血的運行到達(dá)相關(guān)臟腑,以溫化寒痰、疏通經(jīng)絡(luò)、補(bǔ)益陽氣,達(dá)到防病治病的目的[6]。本實驗從離體、在體和整體3個層面進(jìn)行研究,明確了小兒健脾膏促進(jìn)胃腸動力的功效;至于其作用機(jī)制是否興奮了膽堿能M受體,是否抑制了膽堿酯酶,是否與胃動素、胃泌素或胃腸肽等有關(guān),尚待進(jìn)一步研究。

    REFERENCES

    [1] RASK C, THOMSEN P. Cognitive behavioural therapy of functional recurrent abdominal pain in children [J]. Ugeskr Laeger, 2007, 169(45): 38-39.

    [2] HE M S, YU G, HE C R. Relationship between gastrointestinal hormones and gastrointestinal dysmyotonla in functional dyspepsia patients [J]. Med J Chin PLA(解放軍醫(yī)學(xué)雜志), 2003, 28(10): 924-925.

    [3] XU S Y, BIAN R L, CHEN X. The Pharmacological Experimental Methods(藥理實驗方法學(xué)) [M]. Vol 3. Beijing: People's Medical Publishing House, 2001: 1311-1312.

    [4] ZHU L N, LIU X W, ZHU H Y. Effects of five different species of Hera Dendmbii on gastric emptying and small intestinal propulsive in mice [J]. Pharmacol Clin Chin Mater Med(中藥與臨床), 2012, 3(1): 11-13.

    [5] TAKAHASH T, KUROSAWA S, WILEY J W, et al. Mechanism for the gastrokinetic action of domperidone. In vitro studies in guinea pigs [J]. Gastroenterology, 1991, 101(3): 703-710.

    [6] LIU H J. Clinical research on acupoint sticking therapy for pediatric asthma in remission stage [J]. China J Chin Med(中醫(yī)學(xué)報), 2011, 26(6): 761-762.

    Effects of Xiaoer Jianpi Cream on Promoting Gastrointestinal Motility

    LI Xiaodong1, CHEN Wanji2*, YANG Minghua3*, YE Junjie1
    (1.Zhejiang Chinese Medical University, Hangzhou 310053, China; 2.Tongde Hospital of Zhejiang Province, Hangzhou 310012, China; 3.Zhejiang Research Institute of Traditional Chinese, Hangzhou 310012, China)

    OBJECTIVE To evaluate the effects of Xiaoer Jianpi cream on the contractile activity in ileum of guinea-pig and stomach muscle of rat in vitro, and to evaluate the effects of Xiaoer Jianpi cream on the contractile activity in stomach muscle of rat in situ and on the gastric emptying and intestinal propulsion in mice. METHODS In vitro and in situ experiments, the biological functional system was used to observe the effects of Xiaoer Jianpi cream on the contraction of ileum and stomach muscle. The gastric emptying and intestinal propulsion was researched by weighting method and labeling method in vivo. RESULTS In vitro experiment, different dosages of Xiaoer Jianpi cream increased the amplitude of contraction in guinea-pig ileum and stomach muscle of rat. In situ experiment, the large dosage and medium dosage of Xiaoer Jianpi cream could increase significantly the average contractile amplitude in stomach muscle of rat. There was a synergy between the large dosage group and neostigmine. In animal experiment, different doses of Xiaoer Jianpi cream had a significantly promotion on gastric emptying and intestinal propulsion in gastrointestinal disorder mice induced by atropine. CONCLUSION Xiaoer Jianpi cream has the effects on promoting gastrointestinal motility.

    Xiaoer Jianpi cream; gastrointestinal motility; patch; pharmacological effect

    R285.5

    A

    1007-7693(2013)10-1050-05

    2013-01-29

    浙江省中醫(yī)藥科技計劃項目(2012ZA002)

    李曉東,男,碩士生 Tel: 15558050108 E-mail: Lxd6563580@sina.com*

    陳婉姬,女,主任醫(yī)師 Tel: 13588149485 E-mail: hzcwj702@163.com 楊明華,男,博士,教授 Tel: 13857181369 E-mail: ymh702@126.com

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