甲苯磺酸索拉非尼片劑含量測定方法研究

劉冰松，袁昕蓉

(1.遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬第四醫(yī)院，遼寧 沈陽 110101;2.遼寧省沈陽市食品藥品檢驗(yàn)所，遼寧 沈陽 110013)

甲苯磺酸索拉非尼是一種多激酶抑制劑，能夠抑制腫瘤細(xì)胞的生長，臨床用于治療不能手術(shù)的晚期腎細(xì)胞癌及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的原發(fā)肝細(xì)胞癌。其治療的耐用性良好，主要的不良反應(yīng)為可控制的腹瀉、皮疹、疲乏、手足綜合征、高血壓、脫發(fā)、惡心嘔吐和食欲不振。美國食品和藥物管理局快速批準(zhǔn)了甲苯磺酸索拉非尼作為晚期腎癌治療的新藥，也是世界上第一個批準(zhǔn)應(yīng)用于臨床的多靶點(diǎn)靶向治療藥物。筆者參閱文獻(xiàn)[1]采用高效液相色譜(HPLC)法測定自制甲苯磺酸索拉非尼片劑的含量，為甲苯磺酸索拉非尼及其制劑的進(jìn)一步研究開發(fā)提供有效的檢測方法，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

Agilent 1200型高效液相色譜儀(安捷倫儀器公司);AUW220D型分析天平(島津儀器制作所);KQ－300型超聲清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。甲苯磺酸索拉非尼原料(自制，純度為99.6%，批號為20111208);甲苯磺酸索拉非尼工作對照品(自制，純度為 99.8%，干燥失重 0.21%，批號為 20111201);甲苯磺酸索拉非尼片(自制，批號分別為 20111212，20111213，20111214);甲醇(色譜純，天津市康科德科技有限公司)，水為重蒸餾水，磷酸二氫鉀、磷酸等均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:Agilent Eclipse C18柱(250 mm × 4.6 mm，5 μm);流動相:25 mmol/L磷酸鹽緩沖液(磷酸調(diào)pH=2.5)－甲醇(30∶70);檢測波長:250 nm;流速:1 mL/min;進(jìn)樣量:20 μL。

2.2 溶液制備

取甲苯磺酸索拉非尼工作對照品，配制成質(zhì)量濃度為每1 mL中含甲苯磺酸索拉非尼0.1 mg的對照品溶液。取按處方配制不含甲苯磺酸索拉非尼的空白輔料，精密稱定，用流動相制成陰性對照品溶液。取自制甲苯磺酸索拉非尼片適量(約相當(dāng)于甲苯磺酸索拉非尼1.0 g)，精密稱定，溶解后置100 mL容量瓶中，流動相定容，濾過，取續(xù)濾液加流動相稀釋10倍，搖勻，即得供試品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

專屬性試驗(yàn):分別取對照品溶液、陰性對照品溶液和供試品溶液各20 μL，注入液相色譜儀，按上述色譜條件測定，記錄色譜圖。結(jié)果見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

最低檢測限和定量限確定:當(dāng)信噪比為3∶1時，最低檢出限為0.25 ng/mL;當(dāng)信噪比為10∶1時，定量限為1 ng/mL。

精密度試驗(yàn):在上述色譜條件下，取對照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，每次進(jìn)樣20 μL。結(jié)果色譜峰面積 RSD為0.40%。

線性關(guān)系考察:取甲苯磺酸索拉非尼工作對照品約25 mg，精密稱定，溶解后置25 mL容量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，再分別精密吸取 0.1 mL，置 50 mL 容量瓶中，取 0.1，0.5，1.0，1.5，2.0 mL，置 10 mL 容量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，分別取各稀釋液20 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以甲苯磺酸索拉非尼質(zhì)量濃度(X)為橫坐標(biāo)、色譜峰面積(Y)為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，回歸方程為 Y=97.798 X－5.876 2，r=0.999 9(n=6)。結(jié)果表明，甲苯磺酸索拉非尼質(zhì)量濃度在 5.1 ～200.1 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。

加樣回收試驗(yàn):分別取甲苯磺酸索拉非尼工作對照品和甲苯磺酸索拉非尼片適量(相當(dāng)于樣品含量測定項(xiàng)取樣量的80%，100% ，120%)，精密稱定，配制成供試液，用 0.45 μm 微孔濾膜過濾，備用。取上述供試液各20 μL進(jìn)樣，記錄色譜圖。按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

表1 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=9)

穩(wěn)定性試驗(yàn):取甲苯磺酸索拉非尼片適量，按供試品溶液的制備方法操作，制成的供試品溶液于室溫條件下放置，分別在0，2，4，8，24 h 時各進(jìn)樣 20 μL。結(jié)果峰面積值 RSD 為 0.39%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.4 樣品含量測定

取工作對照品和3批自制片劑各適量，按溶液制備項(xiàng)下方法制備供試液，進(jìn)樣分析，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算含量。3批樣品的含量測定結(jié)果見表2。

表2 甲苯磺酸索拉非尼片含量測定結(jié)果(%)

3 討論

甲苯磺酸索拉非尼作為第一個被美國食品和藥物管理局批準(zhǔn)用于治療晚期腎細(xì)胞癌的靶向藥物，已經(jīng)成為備受關(guān)注的研究對象。本試驗(yàn)中采用高效液相色譜法測定自制甲苯磺酸索拉非尼片的含量，并進(jìn)行了方法學(xué)研究，結(jié)果顯示，該法可準(zhǔn)確用于本品含量測定，為該藥的進(jìn)一步研究開發(fā)提供了有效的質(zhì)量檢測方法。

[1]黃自通.HPLC法測定索拉非尼含量及有關(guān)物質(zhì)[J].黑龍江科技信息，2007(19):148，217.