p16、p21和K i-67在CINⅡ～Ⅲ年輕患者宮頸組織中的表達(dá)

蘇智峰，徐新偉

（浙江省杭州市余杭區(qū)第一人民醫(yī)院病理科，浙江杭州311100）

·論 著·

p16、p21和K i-67在CINⅡ～Ⅲ年輕患者宮頸組織中的表達(dá)

蘇智峰，徐新偉

（浙江省杭州市余杭區(qū)第一人民醫(yī)院病理科，浙江杭州311100）

目的探討宮頸上皮內(nèi)瘤變（cervical intraepithelial neoplasia，CIN）Ⅱ～Ⅲ年輕患者宮頸組織p16、p21和Ki-67表達(dá)及相關(guān)性。方法148例CINⅡ～Ⅲ及高危型人乳頭狀瘤病毒（human papilloma virus，HPV）陽(yáng)性的患者，按年齡分為A組（≤35歲）78例和B組（＞35歲）70例，分析宮頸組織中p16、p21和Ki-67的表達(dá)率及相關(guān)性。結(jié)果p16在A、B組宮頸組織中表達(dá)率均較高，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），p21和Ki-67在A組宮頸組織中的表達(dá)率顯著高于B組（P＜0.05），2組高危型HPV患者p16、p21和Ki-67的表達(dá)率均高于低危型HPV患者（P＜0.05），A組高危型和低危型HPV患者宮頸組織中p21和Ki-67表達(dá)率均分別高于B組高危型和低危型HPV患者（P＜0.05），p16表達(dá)率與年齡無(wú)相關(guān)性（P＞0.05），p21與Ki-67的表達(dá)率與年齡呈負(fù)相關(guān)（P＜0.05），p16的表達(dá)率與p21與Ki-67表達(dá)率無(wú)相關(guān)性（P＞0.05），p21與Ki-67的表達(dá)率之間呈正相關(guān)（P＜0.05）。結(jié)論高危型HPV陽(yáng)性年齡≤35歲的年輕CINⅡ～Ⅲ患者p21和Ki-67的表達(dá)率較年長(zhǎng)者高，并與年齡存在相關(guān)性。

宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變；乳頭狀瘤病毒；感染；年輕因素

宮頸上皮內(nèi)瘤變（cervical intraepithelial neoplasia，CIN）與宮頸浸潤(rùn)癌密切相關(guān)，是癌前病變，可發(fā)展為子宮頸癌。高危型人乳頭狀瘤病毒（human papilloma virus，HPV）感染是宮頸癌及CIN的危險(xiǎn)因素［1］，發(fā)病率逐漸增長(zhǎng)，而目前對(duì)高級(jí)別CIN年輕患者的特點(diǎn)研究較少，本研究對(duì)比≤35歲和＞35歲CINⅡ～Ⅲ及HPV陽(yáng)性的患者宮頸組織中p16、p21和Ki-67的表達(dá)及與HPV類型的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料：研究對(duì)象來(lái)源于2009年1月—2011年12月我院婦科門診篩查CIN患者148例，年齡24～73歲，平均（36.83±9.29）歲，均經(jīng)宮頸液基細(xì)胞學(xué)檢測(cè)、陰道鏡活檢證實(shí)為CINⅡ～Ⅲ級(jí)，經(jīng)HPV DNA檢測(cè)均為陽(yáng)性，其中高危型HPV陽(yáng)性102例，低危型HPV陽(yáng)性46例。排除嚴(yán)重心、腦、肝、腎、內(nèi)分泌及血液系統(tǒng)等疾病史；近期妊娠史及盆腔化療史；無(wú)宮頸疾病治療史。年齡≤35歲78例設(shè)為A組，年齡＞35歲70例設(shè)為B組。均按美國(guó)陰道鏡和宮頸病理學(xué)會(huì)指南進(jìn)行臨床診療處理［2］。

1.2 研究方法：p16鼠抗人單克隆抗體、p21鼠抗人單克隆抗體、Ki-67鼠抗人單克隆抗體、即用型快捷免疫組織化學(xué)MaxVisionTM檢測(cè)試劑盒、DAB顯色試劑盒均購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司。宮頸病灶組織標(biāo)本均由4%中性甲醛液固定，石蠟

包埋，切片1.5～2.0μm，二甲苯脫蠟，梯度酒精水化，H2O2處理，高溫修復(fù)抗原，磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered saline，PBS）沖洗。采用免疫組織化學(xué)染色法，操作均按試劑盒說(shuō)明進(jìn)行。DAB顯色，沖洗，蘇木素復(fù)染，以PBS代替一抗作陰性對(duì)照。

1.3 評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)：高倍光學(xué)鏡檢，每視野計(jì)200個(gè)細(xì)胞，隨機(jī)觀察5個(gè)視野，p16、Ki-67定位于細(xì)胞漿，p21定位于細(xì)胞核。細(xì)胞漿或細(xì)胞核無(wú)染色為陰性；染色呈淡黃色至棕色為陽(yáng)性，根據(jù)染色強(qiáng)度及陽(yáng)性細(xì)胞的比例分為，弱陽(yáng)性（+）為陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)≤25%或淡黃色；中度陽(yáng)性（++）為陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)26%～50%或黃色；強(qiáng)陽(yáng)性（+++）為陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)＞50%或棕色。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析。計(jì)數(shù)資料以百分率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；兩變量間相關(guān)性采用Pearson直線相關(guān)分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 p16、p21和Ki-67的表達(dá)：p16在A、B組宮頸組織中表達(dá)率均較高，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；p21和Ki-67在A組宮頸組織中的表達(dá)率顯著高于B組（P＜0.05）。2組高危型和低危型HPV陽(yáng)性率之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。2組高危型HPV患者p16、p21和Ki-67的表達(dá)率均高于低危型HPV患者；A組高危型和低危型HPV患者宮頸組織中p21和Ki-67表達(dá)率均分別高于B組患者（P＜0.05），見表1，2。

表1 2組宮頸組織中p16、p21和Ki-67表達(dá)比較（例數(shù)，%）

表2 2組高危型與低危型HPV患者宮頸組織中p16、p21和Ki-67表達(dá)比較（例數(shù)，%）

2.2 p16、p21和Ki-67表達(dá)率的相關(guān)性：p16表達(dá)率與年齡無(wú)相關(guān)性（r=0.21，P＞0.05），p21和Ki-67的表達(dá)率與年齡呈負(fù)相關(guān)（r=0.47，P＜0.05）。p16的表達(dá)率與p21和Ki-67表達(dá)率無(wú)相關(guān)性（r=0.18，P＞0.05），p21與Ki-67的表達(dá)率呈正相關(guān)（r=0.38，P＜0.05）。

3 討 論

CIN是一組宮頸癌的癌前病變，與HPV感染密切相關(guān)，其中高危型HPV感染對(duì)CIN組織惡性進(jìn)展有促進(jìn)作用，其致癌作用表現(xiàn)為對(duì)細(xì)胞周期監(jiān)控機(jī)制通路的破壞［3］。p16和p21是2條主要通路“p53途徑”和“pRb通道”的下游調(diào)控因子，通過(guò)抑制細(xì)胞周期素依賴蛋白激酶2下調(diào)細(xì)胞周期蛋白D1的表達(dá)，控制細(xì)胞有絲分裂停滯于細(xì)胞周期的G1/S期。當(dāng)高危型HPV感染并與宿主細(xì)胞基因整合后，E6、E7基因得到持續(xù)過(guò)量的表達(dá)，對(duì)p53及pRb產(chǎn)生抑制，阻斷了p53、pRb對(duì)下游p16、p21的負(fù)向調(diào)控作用［4-6］。使細(xì)胞分裂異?？缭紾1/S期，導(dǎo)致細(xì)胞增殖失控，而成為癌變的基礎(chǔ)過(guò)程［7］。Ki-67也是與細(xì)胞增殖相關(guān)的一種核抗原，其表達(dá)反應(yīng)了細(xì)胞周期的變化過(guò)程，其過(guò)度表達(dá)表明細(xì)胞增殖的活躍程度增加，細(xì)胞增殖失控［8］。

本研究中以年齡劃分研究對(duì)象，對(duì)比≤35歲和＞35歲患者宮頸組織中p16、p21和Ki-67的表達(dá)率，結(jié)果顯示，p16在不同年齡段的患者中的表達(dá)均較高，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，p21和Ki-67在≤35歲患者中的表達(dá)則顯著高于＞35歲患者（P＜0.05）。提示HPV陽(yáng)性高級(jí)別CIN患者宮頸組織細(xì)胞增殖活躍程度高，而≤35歲患者的細(xì)胞增殖活躍程度可能高于＞35歲患者，并可能與CIN病變進(jìn)展密切相關(guān)。

HPV感染是CIN癌變的重要因素，而高危型和低危型HPV的致癌作用存在顯著差異［9］，本研究中A組和B組高危型和低危型HPV感染率之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說(shuō)明HPV感染率與年齡無(wú)相關(guān)性。

高危型HPV感染者宮頸組織中p21和Ki-67的表達(dá)率均顯著高于低危型HPV感染患者（P＜0.05）。而≤35歲高危型和低危型HPV患者宮頸組織中p21和Ki-67表達(dá)率均分別高于同型HPV的＞35歲患者。說(shuō)明高危型HPV的感染與宮頸組織中p16、p21和Ki-67的高表達(dá)密切相關(guān)，而對(duì)≤35歲患者較＞35歲患者調(diào)高作用更為明顯。

p16的表達(dá)與年齡無(wú)相關(guān)性，而p21和Ki-67的表達(dá)與年齡呈弱負(fù)相關(guān)性，隨年齡的增長(zhǎng)其表達(dá)呈現(xiàn)下降的趨勢(shì)。而p16與p21和Ki-67的表達(dá)無(wú)相關(guān)性，p21與Ki-67表達(dá)呈正相關(guān)性。提示在HPV陽(yáng)性高級(jí)別CIN患者宮頸組織中p16持續(xù)高表達(dá)，組織細(xì)胞處于增殖活躍狀態(tài)［10］，而p21和Ki-67對(duì)細(xì)胞周期的調(diào)控可能受到年齡的影響，隨年齡增長(zhǎng)調(diào)控作用減弱。

綜上所述，CINⅡ～Ⅲ合并高危型HPV感染≤35歲患者宮頸組織中p21和Ki-67表達(dá)顯著增高，細(xì)胞病態(tài)增殖狀態(tài)加速，對(duì)≤35歲患者的早期檢測(cè)和監(jiān)控有利于了解患者宮頸組織的病變進(jìn)展程度，并給予及時(shí)的干預(yù)處理，預(yù)防宮頸癌的發(fā)生。

［1］MUNOZ N，BOSCH FX，CASTELLSAGUE X，et al.Against

which human papillomavirus types shall we vaccinate and screen the international perspective［J］.Int J Cancer，2004，111（2）：278-285.

［2］周淑新，張俊英，李爾曼.宮頸細(xì)胞學(xué)異常的管理［J］.中國(guó)全科醫(yī)學(xué)，2005，8（20）：1674-1676.

［3］張玉陽(yáng)，鄭飛云，趙紅琴，等.人乳頭狀瘤病毒感染與p16蛋白表達(dá)在宮頸鱗癌中的意義［J］.中華醫(yī)院感染學(xué)雜志，2011，21（14）：2965-2967.

［4］俞小元，萬(wàn)美珍，楊宇星，等.P16、脆性組氨酸三聯(lián)體基因在子宮頸癌中的表達(dá)及其臨床意義［J］.腫瘤研究與臨床，2011，23（6）：376-378，383.

［5］THAKUR VS，RUHUL AMIN AR，PAUL RK.P53-dependent p21-mediated growth arrest pre-empts and protects HCT116 cells from PUMA-mediated apoptosis induced by EGCG［J］.Cancer Lett，2010，296（2）：225-232.

［6］PIRNGRUBER J.Induced G1 cell-cycle arrest controls replication-dependent histone mRNA 3'end processing through p21，NPAT and CDK9［J］.Oncogene，2010，29（19）：2853-2863.

［7］劉福囝，滕勇，張曉旭，等.P21活化激酶1小分子干擾RNA對(duì)胃癌BGC823細(xì)胞生長(zhǎng)的影響［J］.中華臨床醫(yī)師雜志，2011，5（8）：2236-2239.

［8］COLIZZA M，SIDONIA，PICCART GEBHARTM.Value of Ki67 in breast cancer：the debate is still open［J］.LancetOncol，2010，11（5）：414-415.

［9］許雪，張杰.宮頸上皮內(nèi)瘤變與人類乳頭瘤病毒不同亞型感染的關(guān)系［J］.腫瘤，2011，31（4）：364-368.

［10］來(lái)永靜，戴淑真，初慧君，等.高危型人乳頭瘤病毒負(fù)荷量檢測(cè)合并年齡因素在宮頸病變篩查中的作用［J］.腫瘤防治研究，2011，38（5）：542-544.

（本文編輯：趙麗潔）

R711.74

B

1007-3205（2013）03-0339-03

2012-03-22；

2012-04-10

蘇智峰（1975-），男，浙江余杭人，浙江省杭州市余杭區(qū)第一人民醫(yī)院主治醫(yī)師，醫(yī)學(xué)學(xué)士，從事臨床病理診斷研究。

10.3969/j.issn.1007-3205.2013.03.036