樹突狀細(xì)胞在部分乳腺癌中的表達(dá)及意義

成 媛，羅文彥，王翀奎，王 榮，張 梁，趙 松

（1.河北醫(yī)科大學(xué)西山校區(qū)護理基礎(chǔ)部病理教學(xué)組，河北石家莊050228；2.河北醫(yī)科大學(xué)西山校區(qū)教務(wù)處，河北石家莊050228；3.河北醫(yī)科大學(xué)西山校區(qū)護理基礎(chǔ)部護理教研組，河北石家莊050228；

4.河北醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病理學(xué)教研室，河北石家莊050017）

·論 著·

樹突狀細(xì)胞在部分乳腺癌中的表達(dá)及意義

成 媛1，羅文彥1，王翀奎2，王 榮3，張 梁1，趙 松4*

（1.河北醫(yī)科大學(xué)西山校區(qū)護理基礎(chǔ)部病理教學(xué)組，河北石家莊050228；2.河北醫(yī)科大學(xué)西山校區(qū)教務(wù)處，河北石家莊050228；3.河北醫(yī)科大學(xué)西山校區(qū)護理基礎(chǔ)部護理教研組，河北石家莊050228；

4.河北醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病理學(xué)教研室，河北石家莊050017）

目的通過測定乳腺癌組織中樹突狀細(xì)胞的計數(shù)，探討其與乳腺癌臨床病理特征（病理分類、組織分化程度、腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、患者年齡、月經(jīng)狀況）的關(guān)系，闡明乳腺癌中樹突狀細(xì)胞的分布表達(dá)與其臨床預(yù)后的相關(guān)性。方法應(yīng)用免疫組織化學(xué)（immunohistochemistry，IHC）方法檢測60例乳腺癌組織中樹突狀細(xì)胞的表達(dá)。結(jié)果樹突狀細(xì)胞主要分布于腫瘤間質(zhì)中，少量散布于腫瘤細(xì)胞之間，呈卵圓形或不規(guī)則形，胞漿豐富，細(xì)胞表面突起較短或無突起，與淋巴細(xì)胞相伴浸潤。樹突狀細(xì)胞計數(shù)隨著乳腺癌組織分化程度增高而增多，高分化與中分化、低分化之間樹突狀細(xì)胞計數(shù)差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；樹突狀細(xì)胞計數(shù)在患者年齡、月經(jīng)狀況、病理學(xué)分類及淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。乳腺癌患者樹突狀細(xì)胞數(shù)目與預(yù)后呈正相關(guān)（r=0.280，P＜0.05）。結(jié)論樹突狀細(xì)胞的計數(shù)隨著乳腺癌組織分化程度增高而增多，其數(shù)目與乳腺癌患者生存期呈正相關(guān)。

乳腺腫瘤；樹突細(xì)胞；免疫組織化學(xué)

乳腺癌是危害女性健康常見的惡性腫瘤。腫瘤微環(huán)境中的免疫狀態(tài)比外周血免疫狀態(tài)更能反映出宿主的抗瘤免疫狀態(tài)。乳腺癌的免疫應(yīng)答反應(yīng)以細(xì)胞免疫為主，腫瘤間質(zhì)中免疫細(xì)胞的表達(dá)和浸潤程度與乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移關(guān)系更為密切。樹突狀細(xì)胞（dentric cells，DC）是參與乳腺癌局部免疫的細(xì)胞之一，其在機體的抗腫瘤免疫應(yīng)答中發(fā)揮了重要作用。本研究采用免疫組織化學(xué)（immunohistochemistry，IHC）染色方法，分析乳腺癌組織中DC的表達(dá)情況，探討其在乳腺癌組織浸潤過程中的分布特點及與乳腺癌的臨床病理特征的關(guān)系，旨在闡明DC的表達(dá)與預(yù)后的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料：選取河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院病理科2005年7月—2006年7月病歷資料完整的存檔蠟塊60例，所有患者均為初次手術(shù)，術(shù)前均未接受過放療、化療及免疫治療?；颊呔鶠榕裕挲g38～74歲，中位年齡50.5歲。年齡≤45歲13例，＞45～60歲37例，＞60歲10例。所有患者中未絕經(jīng)者30例，絕經(jīng)者30例。60例乳腺癌病理切片均經(jīng)高年資病理醫(yī)師診斷復(fù)核，組織學(xué)類型根據(jù)WHO分類分為導(dǎo)管內(nèi)癌14例，浸潤性導(dǎo)管癌27例，浸潤性小葉癌19例（浸潤性乳腺癌中有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移25例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移21例）。組織分化程度包括高分化19例，中分化22例，低分化19例。隨訪時間5～60個月。

標(biāo)本均經(jīng)10％中性緩沖福爾馬林固定，常規(guī)取材、脫水、石蠟包埋切成4μm厚，連續(xù)切片5張，貼于涂有0.05％多聚賴氨酸的載玻片備用，為確保實驗結(jié)果評估的準(zhǔn)確性，所有病例均經(jīng)2名有經(jīng)驗的病理科醫(yī)師經(jīng)行光鏡觀察共同確診并對乳腺癌進行組織學(xué)分型。

1.2 試劑：兔抗人CD14多克隆抗體（美國Proteintech集團有限公司）；兔抗人CD40多克隆抗體（北京博奧森生物公司）；兔抗人CD127多克隆抗體（北京博奧森生物公司）；DAB顯色試劑盒（北京中杉生物技術(shù)有限公司）；S-P試劑盒（北京中杉生物技術(shù)有限公司）。

1.3 IHC染色方法：采用S-P法。切片經(jīng)常規(guī)脫蠟，用3％過氧化氫甲醇溶液室溫下避光孵育15min，以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶的活性，微波爐抗原修復(fù)。染色按S-P試劑盒提供的說明書進行。同步設(shè)有陽性和陰性對照。用已知陽性組織切片作為陽性對照，陰性對照采用PBS代替一抗，其余操作

步驟同實驗片。

1.4 IHC結(jié)果判定：CD40標(biāo)記的DC以細(xì)胞膜和（或）細(xì)胞漿內(nèi)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色顆粒為陽性細(xì)胞。陽性細(xì)胞的計數(shù)方法，對每張切片隨機選取10個高倍視野（×400），計數(shù)每個視野陽性細(xì)胞的數(shù)量，求其均值為該病例的陽性表達(dá)細(xì)胞數(shù)［1］。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法：應(yīng)用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析。計量資料以±s表示，分別采用F檢驗和q檢驗；相關(guān)性采用Pearson相關(guān)分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 DC檢測結(jié)果：CD40陽性染色顆粒定位于T細(xì)胞、單核巨噬細(xì)胞、DC、上皮細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、及乳腺癌細(xì)胞。通過形態(tài)學(xué)觀察排出除DC以外的CD40+表達(dá)細(xì)胞。

CD40+DC胞漿與胞膜呈棕黃色或棕褐色，主要分布于腫瘤間質(zhì)中，少量散布于腫瘤細(xì)胞之間，呈卵圓形或不規(guī)則形，胞漿豐富，細(xì)胞表面突起較短或無突起，與淋巴細(xì)胞相伴浸潤（圖1～5）。

2.2 DC計數(shù)與乳腺癌臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系：浸潤性導(dǎo)管癌與浸潤性小葉癌之間DC計數(shù)差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；未絕經(jīng)者與絕經(jīng)者DC計數(shù)差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；各年齡段（≤45歲、＞45～60歲、＞60歲）DC計數(shù)差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者DC計數(shù)差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；DC計數(shù)隨著乳腺癌組織分化程度增高而增多，其中高分化者與中分化、低分化組者DC計數(shù)差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01），而中分化者與低分化者DC計數(shù)差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。見表1。

2.3 相關(guān)性分析：乳腺癌患者DC數(shù)目與預(yù)后呈正相關(guān)（r=0.280，P＜0.05）。

表1 DC計數(shù)與乳腺癌臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系 （±s，個）

表1 DC計數(shù)與乳腺癌臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系 （±s，個）

臨床病理參數(shù)例數(shù)計數(shù)年齡≤45 13 2.30±1.00＞45～60 37 2.19±1.36＞60 10 2.15±1.68月經(jīng)狀況未絕經(jīng)30 2.29±1.08絕經(jīng)30 2.12±1.56病理分類浸潤性導(dǎo)管癌27 1.78±1.16浸潤性小葉癌19 1.77±0.84

*P＜0.05與高分化比較（q檢驗）

3 討 論

DC是Steinman等［2］從小鼠的脾和淋巴器官中分離發(fā)現(xiàn)的，其形狀可呈樹突樣。DC起源于骨髓CD34+造血干細(xì)胞，廣泛分布于除腦以外的全身各個組織與器官，數(shù)量甚微，約占外周血單核細(xì)胞0.5％～1.0％。DC是目前已知的體內(nèi)功能最強的專職抗原提呈細(xì)胞，具有攝取、處理和提呈抗原至T細(xì)胞的功能。處于不同分化階段的DC具有不同的功能。未成熟的DC高表達(dá)補體受體、Fc受體等與吞噬有關(guān)的受體，具有較強的抗原內(nèi)吞和加工處理能力，其在向淋巴組織T區(qū)遷移過程中可能誘導(dǎo)免疫耐受；成熟的DC高表達(dá)主要組織相容性復(fù)合物（major histocompatibility complex，MHC）Ⅰ、Ⅱ類分子和CD40、CD80、CD86等共刺激分子及黏附分子，具有較強的抗原提呈和激活初始型T細(xì)胞的能力，它通過處理、提呈抗原從而介導(dǎo)機體的免疫應(yīng)答。

CD40是由Koho等［3］在人的膀胱癌細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)的。它是一種相對分子質(zhì)量為45 000～50 000的Ⅰ型跨膜糖蛋白，屬于腫瘤壞死因子受體超家族成員，CD40在B細(xì)胞、成熟DC、上皮細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、血小板等［4］上均有表達(dá)。研究發(fā)現(xiàn)CD40還可表達(dá)于一些腫瘤細(xì)胞上，如乳腺癌、膀胱癌、卵巢癌等［5］。本研究采用CD40作為DC的表面標(biāo)記，結(jié)合其形態(tài)學(xué)特點來檢測乳腺癌組織中DC的表達(dá)情況。

本研究結(jié)果顯示DC主要分布于乳腺癌間質(zhì)中，少量散布于腫瘤細(xì)胞之間，細(xì)胞呈卵圓形或不規(guī)則形，表面突起較短或無突起。這不同于正常成熟DC的形態(tài)特點，這種差異與DC表面分子低表達(dá)或不表達(dá)有關(guān)。羅小玲等［6］在淋巴瘤中發(fā)現(xiàn)DC胞漿突起與腫瘤細(xì)胞密切接觸，認(rèn)為DC可以在腫瘤細(xì)胞間移行，且借助突起直接攝取腫瘤相關(guān)抗原。

本研究結(jié)果顯示DC計數(shù)隨著乳腺癌組織分化程度增高而增多，高分化者與中分化、低分化者之間的DC計數(shù)差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。提示DC可能會影響乳腺癌的增殖與分化。這與曹榮華等［7］、馮瑞娥等［8］的研究結(jié)果一致。谷彥軍等［9］卻

得出了相反的結(jié)論。機體產(chǎn)生的免疫反應(yīng)是否會隨著腫瘤惡性度增高而增強有待進一步證實。本研究淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者與無淋巴結(jié)者DC計數(shù)差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。提示DC可能不參與乳腺癌的轉(zhuǎn)移。

本研究還發(fā)現(xiàn)DC的表達(dá)與乳腺癌患者預(yù)后呈正相關(guān)。這與相關(guān)腫瘤的研究結(jié)果一致［10-11］。DC抗腫瘤免疫機制為DC捕獲腫瘤抗原后，通過細(xì)胞表面的MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ類分子提呈腫瘤抗原給T細(xì)胞（抗原）受體。同時，DC提供高水平的共刺激分子、黏附分子激活T細(xì)胞。DC與T細(xì)胞結(jié)合后可通過分泌白細(xì)胞介素12來誘導(dǎo)T細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞等產(chǎn)生腫瘤壞死因子γ、穿孔素和顆粒酶，增強對靶細(xì)胞的溶解作用。DC可反映機體的免疫狀態(tài)，尤其是腫瘤灶局部的DC即腫瘤浸潤性DC更能反映宿主的抗瘤免疫狀態(tài)。腫瘤細(xì)胞可以通過釋放白細(xì)胞介素10、血管內(nèi)皮生長因子及轉(zhuǎn)化生長因子β1等免疫抑制因子抑制DC的成熟，降低DC表面分子的表達(dá)。MHC-Ⅱ類分子的不表達(dá)或低表達(dá)提示DC提呈外源性抗原的能力低下，而DC表面的共刺激分子、黏附分子的低表達(dá)或不表達(dá)也可以導(dǎo)致DC的抗原提呈能力低下，從而使DC無法有效地識別和殺傷腫瘤細(xì)胞［12］。馬靜等［13］提出可采用DC作為疫苗載體（或稱佐劑），以腫瘤抗原體外沖擊使其致敏，不僅可以保證腫瘤抗原被有效地攝取，而且可以提供所需的共刺激信號，從而實現(xiàn)腫瘤的免疫治療。

總之，DC的計數(shù)隨著乳腺癌組織分化程度增高而增多，其數(shù)目與乳腺癌患者生存期呈正相關(guān)。提示乳腺癌中DC的計數(shù)可作為評估患者預(yù)后的一個獨立因素。（本文圖見封三）

［1］FURUKARWA T，WATANABE S，KODAMA T，et al.T-zone histiocytes in adenocarcinoma of the lung in relation to postoperative prognosis［J］.Cancer，1985，56（11）：2651-2657.

［2］STEINMAN RM，COHN ZA.Identification of a novel cell type in peripheral lymphoid organs ofmice.I.Morphology，quantitation，tissue distribution［J］.JExp Med，1973，137（5）：1142-1162.

［3］KOHO H，PAULIE S，BEN-AISSA H，et al.Monoclonal antibodies to antigens associated with transitional cell carcinoma of the human urinary bladder［J］.Cancer Immunol Immunother，1984，17（3）：165-172.

［4］SMITH CA，F(xiàn)ARRAH T，GOODWIN RG.The TNF receptor superfamily of cellular and viral protein：activation，costimulation，and death［J］.Cell，1994，76（6）：959-962.

［5］PHIPPS RP.Atherosclerosis：the emerging role of inflammation and the role CD40-CD40 ligand system［J］.Proc Natl Acad Sci USA，2000，97（13）：6930-6932.

［6］羅小玲，葛連英，謝裕安，等.肝癌組織中浸潤樹突狀細(xì)胞的數(shù)量和表面分子表面的臨床意義［J］.廣西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2007，24（3）：345-348.

［7］曹榮華，袁宏銀，楊國梁.乳腺癌腫樹突狀細(xì)胞浸潤的臨床意義［J］.鄖陽醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2001，20（4）：203-205.

［8］馮瑞娥，李敬軍，王軍梅，等.乳腺癌組織中S-100蛋白陽性樹突狀細(xì)胞的研究［J］.首都醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，1997，18（4）：369-375.

［9］谷彥軍，馬洪達(dá)，魏煥萍.樹突狀細(xì)胞與乳腺癌［J］.國際病理科學(xué)與臨床雜志，2006，26（1）：31-34.

［10］TSUJITANIS，KAKEJI Y，WATANABE A，et al.Infiltration of dendritic cells in relation to tumor invasion and lymph node metastasis in human gastric cancer［J］.Cancer，1990，66（9）：2012-2016.

［11］FONTENOT JD，GAVIN MA，RUDENSKY AY.FoxP3 programs the development and function of CD4+CD25+regulatory T cells［J］.Nat Immunol，2003，4（4）：330-336.

［12］NESSELHUT T，MATTHES C，MARS D，et al.Cancer therapy with immature monocyte-derived dendritic cells in patients with advanced breast cancer［J］.Clinnical Oncology，2005，23（165）：25-28.

［13］馬靜，程建新.樹突狀細(xì)胞疫苗與婦科腫瘤免疫治療［J］.河北醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2009，30（8）：854-856.

（本文編輯：劉斯靜）

R737.9

B

1007-3205（2013）06-0683-03

2012-12-24；

2013-01-25

成媛（1982-），女，河北新樂人，河北醫(yī)科大學(xué)西山校區(qū)助教，醫(yī)學(xué)碩士，從事病理學(xué)教學(xué)與科研工作。

*通訊作者。E-mail：abcxph@163.com

10.3969/j.issn.1007-3205.2013.06.022