柴辛鼻敏康膠囊的抗炎免疫作用

柴江平劉治中劉仁平葛海生王曉飛

（1中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院廣安門醫(yī)院，北京100053；2中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院中醫(yī)基礎(chǔ)理論研究所，北京100700；3中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所／北京協(xié)和醫(yī)院，北京100050；4中國(guó)人民武裝警察部隊(duì)藥品儀器檢驗(yàn)所，北京102613）

柴辛鼻敏康膠囊的抗炎免疫作用

柴江平1劉治中2劉仁平3葛海生4王曉飛4

（1中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院廣安門醫(yī)院，北京100053；2中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院中醫(yī)基礎(chǔ)理論研究所，北京100700；3中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所／北京協(xié)和醫(yī)院，北京100050；4中國(guó)人民武裝警察部隊(duì)藥品儀器檢驗(yàn)所，北京102613）

目的觀察柴辛鼻敏康對(duì)變應(yīng)性鼻炎治療的抗炎免疫調(diào)節(jié)作用。方法采用小鼠巴豆油致耳腫脹實(shí)驗(yàn)觀察抗急性炎癥，利用腹腔肥大細(xì)胞觀察藥物對(duì)肥大細(xì)胞脫顆粒的抑制作用，利用DNFB致敏的小鼠觀察藥物抗遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)作用，灌服飽和濃度的藥物觀察藥物的安全性。結(jié)果柴辛鼻敏康對(duì)小鼠耳巴豆油致腫脹抑制活性為16.4%，對(duì)肥大細(xì)胞脫顆粒的抑制率為43.1%，顯著降低DNFB誘導(dǎo)的小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)所致的耳腫脹，且在飽和濃度11.1g／kg下未見明顯毒副作用。結(jié)論柴辛鼻敏康膠囊對(duì)過敏性因素引起的速發(fā)型和遲發(fā)型過敏反應(yīng)均有很好的抑制作用，免疫調(diào)節(jié)活性突出。

變應(yīng)性鼻炎，柴辛鼻敏康膠囊，抗炎，免疫調(diào)節(jié)

過敏性鼻炎（Allergicrhinetis，AR），是一種吸入外界變應(yīng)原而導(dǎo)致鼻黏膜發(fā)生以超敏反應(yīng)為主的非感染炎癥性疾病。流行病學(xué)調(diào)查顯示：該病世界范圍內(nèi)的平均發(fā)病率在10%～20%之間，且能夠間接增加支氣管哮喘、鼻竇炎、中耳炎、變應(yīng)性皮炎等發(fā)病機(jī)會(huì)［1］。目前，國(guó)內(nèi)外對(duì)本病尚無特效治療藥物，主要采用抗組胺藥、減充血藥、抗膽堿藥、MC穩(wěn)定劑和糖皮質(zhì)激素等5類藥物單獨(dú)或聯(lián)合交替使用。這些藥物雖可在短時(shí)間內(nèi)緩解癥狀，但不能從根本上改善患者的過敏體質(zhì)及中和變應(yīng)原，致使病情“反跳”，反復(fù)發(fā)作長(zhǎng)期遷延不愈。鼻癢、噴嚏、流清涕、鼻塞是AR的主要臨床癥狀，屬中醫(yī)鼻鼽、鼽噴、鼽嚏、鼽水、鼽、嚏等范疇［2］，臨床中醫(yī)治療多以疏風(fēng)解表通竅的方藥為主，但治療效果并不十分滿意。柴辛鼻敏康膠囊是由柴胡、細(xì)辛、川芎等多味中藥加工而成的中藥膠囊制劑，臨床用于過敏性鼻炎，療效顯著［3］。

1 資料與方法

1.1 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)采用KM雄性小鼠（17～20g）60只，SPF級(jí)，購(gòu)自軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，合格證：SCXK-（軍）2007-004）；ICR雄性小鼠（17～19g）50只，SPF級(jí)，購(gòu)自維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，合格證：SCXK-（京）2006-0009；SD大鼠（220g～250g）5只，SPF級(jí)，購(gòu)自軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，合格證：SCXK-（軍）2007-004）。

1.2 藥物及試劑柴辛鼻敏康（BMK）為自制藥品，使用時(shí)將柴辛鼻敏康逐步加入0.25%CMC（羧甲基纖維素鈉）溶液配成所需濃度。千柏鼻炎片為廣州奇星藥業(yè)產(chǎn)品，地塞米松由四川迪康科技藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)。

1.3 方法

1.3.1 柴辛鼻敏康抗巴豆油致耳腫脹實(shí)驗(yàn)選用KM雄性小鼠（17～19g），隨機(jī)分為對(duì)照組、BMK組2組、千柏鼻炎片組2組和地塞米松（DEX）組，每組10只，口服灌胃給藥，BMK組劑量為7.5g／kg、10g／kg，陽(yáng)性對(duì)照藥千柏鼻炎片組選用5g／kg、10g／kg兩個(gè)劑量，DEX組劑量為0.5mg／kg，對(duì)照組僅灌以蒸餾水，連續(xù)給藥5天。末次給藥1小時(shí)后，小鼠右耳兩面涂抹2%巴豆油50μl，4小時(shí)后處死動(dòng)物。剪下左右耳廓，用直徑8mm的打孔器取下耳片，稱重，以左右耳片重量之差值指示

耳腫脹程度。以對(duì)照組均數(shù)作為標(biāo)準(zhǔn)，按公式：（對(duì)照組腫脹程度-藥物治療耳腫脹程度）／對(duì)照組腫脹程度，計(jì)算各藥物組對(duì)小鼠耳腫脹的抑制率（百分比計(jì)）。

1.3.2 柴辛鼻敏康抑制肥大細(xì)胞脫顆粒實(shí)驗(yàn)取體重220～250g的雄性大鼠，斷頭處死后，以冷PBS液沖洗腹腔，離心1500轉(zhuǎn)10分鐘，收集懸液離心后，以冷PBS液重懸，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，并配成2×107cell／ml的懸液。在小管中分別加入肥大細(xì)胞懸液45μl，同時(shí)加入待測(cè)藥物或空白溶劑5μl，（BMK設(shè)1mg／ml，0.75mg／ml，0.5mg／ml高、中、低3個(gè)劑量，千柏鼻炎片終濃度為1mg／ml、0.75mg／ml作為陽(yáng)性藥），加入化合物48／80 2μl，37℃震蕩溫育3min，取出冰上放置。滴于載有0.25%中性紅乙醇溶液的載玻片上，顯微鏡下觀察計(jì)數(shù)100個(gè)肥大細(xì)胞中脫顆粒的細(xì)胞數(shù)，每管計(jì)數(shù)2次，取均值。按下列公式計(jì)算出脫顆粒肥大細(xì)胞百分率及藥物抑制率。正常的肥大細(xì)胞邊緣光滑，核不著色，胞內(nèi)淺棕色顆粒均勻。脫顆粒的肥大細(xì)胞顯示腫脹和形態(tài)異常，胞膜破裂，顆粒外排。

脫顆粒肥大細(xì)胞（%）=脫顆粒肥大細(xì)胞／肥大細(xì)胞總數(shù)×100%

藥物抑制率（%）=（對(duì)照組脫顆粒率-藥物組脫顆粒率）／對(duì)照組脫顆粒率×100%

1.3.3 柴辛鼻敏康抗遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)實(shí)驗(yàn)選用ICR雄性小鼠（17～19g），小鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、致敏組、BMK組、千柏鼻炎片組和地塞米松（DEX）組，每組10只，小鼠腹部去毛，面積約3×3cm2大小，均勻涂抹1%DNFB溶液50μl致敏，次日強(qiáng)化一次。小鼠自致敏當(dāng)同起每日口服灌胃給藥一次，BMK劑量為10g／kg，陽(yáng)性藥選用千柏鼻炎片劑量為10g／kg，地塞米松組劑量為0.5mg／kg，對(duì)照組僅灌以蒸餾水，連續(xù)給藥6天。于致敏第5天后，各組小鼠左耳（兩面）均勻涂抹1% 2，4二硝基氟苯（DNFB）溶液10μ1進(jìn)行攻擊。24小時(shí)后處死動(dòng)物，剪下雙耳，用直徑為8mm的不銹鋼銃子取下左右耳片，分別稱重，以左右耳片重量之差作為腫脹程度。同時(shí)取小鼠胸腺及脾臟稱重，分別以小鼠每10g體重的脾重（mg）和胸腺重（mg）作為脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)［4］。

1.3.4 柴辛鼻敏康的最大耐受劑量觀察柴辛鼻敏康1g，逐步加入0.25%CMC（羧甲基纖維素鈉）溶液2、1、0.5、0.5、0.5ml配成最大體積CMC的飽和溶液，最終濃度為0.22g／ml。選用KM雄性小鼠（20±0.1）g，隨機(jī)分組，每組10只，于檢疫馴化期結(jié)束日測(cè)定體重，口服給藥1次，藥物濃度為0.22g／ml，給藥1ml，連續(xù)觀察2周內(nèi)小鼠的自主活動(dòng)次數(shù)。給藥當(dāng)天，在給藥后的30分鐘、60分鐘、90分鐘、2小時(shí)進(jìn)行觀察，如無明顯異常癥狀，當(dāng)天即停止觀察；如發(fā)現(xiàn)有明顯異常，應(yīng)繼續(xù)觀察，并在異常癥狀消失后再繼續(xù)觀察30分鐘，但不超過6個(gè)小時(shí)。并且在給藥后第1～14天的每天同一時(shí)刻進(jìn)行1次觀察。主要進(jìn)行臨床癥狀觀察和存活率計(jì)算。動(dòng)物死亡后做尸檢，觀察各臟器變化。

2 結(jié)果

2.1 柴辛鼻敏康對(duì)巴豆油致耳腫脹的影響以7.5g／kg劑量，連續(xù)灌服5次給藥，鼻敏康對(duì)小鼠耳巴豆油致腫脹抑制活性為16.4%（與對(duì)照組比較P=0.086），雖未達(dá)到顯著差異的程度也不及地塞米松的抑制活性，但優(yōu)于陽(yáng)性藥千柏鼻炎片的抑制活性。

表1 柴辛鼻敏康對(duì)巴豆油致耳腫脹的影響（n，%）

2.2 柴辛鼻敏康對(duì)腹腔肥大細(xì)胞脫顆粒抑制作用在體外1mg／ml柴辛鼻敏康的脫顆粒肥大細(xì)胞百分率明顯減少，藥物抑制率為43.1%，明顯高于0.5mg／kg和0.75mg／kg，且也明顯優(yōu)于千柏鼻炎片，具有比較明顯的脫顆粒抑制活性。

表2 柴辛鼻敏康對(duì)腹腔肥大細(xì)胞脫顆粒抑制率（n，%）

2.3 柴辛鼻敏康抗遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)實(shí)驗(yàn)連續(xù)口服10g／kg柴辛鼻敏康6次，對(duì)小鼠DNFB誘導(dǎo)的小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)引起的腫脹程度顯著降低（與致敏組比較P＜0.01），抑制活性為55.8%，且優(yōu)于千柏鼻炎片和地塞米松，但柴辛鼻敏康對(duì)DNFB誘導(dǎo)的小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)的胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)的無顯著影響。

表3 柴辛鼻敏康對(duì)DNFB誘導(dǎo)小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)的影響（n，%）

2.4 柴辛鼻敏康的最大耐受劑量柴辛鼻敏康在藥物最大劑量為11.1g／kg的濃度下各組給藥小鼠未見明顯毒副作用。動(dòng)物處死后，肉眼觀察各臟器無明顯異常。

3 討論

肥大細(xì)胞脫顆粒是機(jī)體的一種防御反應(yīng)，也是速發(fā)型變態(tài)反應(yīng)（Ⅰ型超敏反應(yīng)）和炎癥等病理反應(yīng)的基礎(chǔ)。

肥大細(xì)胞受到抗原攻擊、脫顆粒，通過釋放組胺、白三烯、緩激肽、嗜酸性細(xì)胞趨化因子等炎性介質(zhì)，導(dǎo)致血管通透性增強(qiáng)、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，引起鼻黏膜充血、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、呼吸道平滑肌收縮等過敏性免疫病理反應(yīng)。肥大細(xì)胞脫顆粒產(chǎn)生的多種炎性介質(zhì)和膜磷脂代謝過程中產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物是過敏性鼻炎病理生理反應(yīng)過程和鼻黏膜病理改變的中心環(huán)節(jié)，因此細(xì)胞脫顆粒的百分率反映了肥大細(xì)胞過敏反應(yīng)的程度［5］。柴辛鼻敏康膠囊可明顯抑制腹腔肥大細(xì)胞的脫顆粒反應(yīng)，控制炎癥的發(fā)展。小鼠巴豆油耳炎是經(jīng)典的急性炎癥模型，致炎小鼠耳部充血、血管通透性增加、滲出增多、前列腺素分泌增加，現(xiàn)已被廣泛地應(yīng)用于抗炎藥物篩選。柴辛鼻敏康可明顯抑制巴豆結(jié)合其對(duì)巴豆油所致的耳腫脹，說明該藥對(duì)急性過敏性炎癥有很好的抑制作用。

遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)的組織損傷機(jī)制是由特異性致敏T細(xì)胞所介導(dǎo)，后者與特異性抗原結(jié)合而被激活，分裂并釋放出多種淋巴因子，導(dǎo)致反應(yīng)局部組織發(fā)生以單個(gè)核細(xì)胞浸潤(rùn)為主的炎癥反應(yīng)和組織壞死。DNFB所致遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)是反映藥物對(duì)T細(xì)胞免疫功能影響的標(biāo)志之一，通過小鼠致敏反應(yīng)的產(chǎn)生，以耳腫脹程度、脾指數(shù)、胸腺指數(shù)來反映對(duì)細(xì)胞免疫功能的影響［4］。柴辛鼻敏康膠囊對(duì)DNFB所致的小鼠DTH反應(yīng)的耳腫脹抑制作用突出，使耳腫脹顯著減輕，表明其具有明顯抗遲發(fā)型過敏反應(yīng)的作用。

以上表明，柴辛鼻敏康膠囊對(duì)過敏性因素引起的速發(fā)型和遲發(fā)型過敏反應(yīng)均有很好的抑制作用，免疫調(diào)節(jié)活性突出，對(duì)于過敏性鼻炎的治療具有一定的開發(fā)及研究意義，其作用機(jī)理值得進(jìn)一步深入研究。

［1］周羽，崔英，彭順林.變應(yīng)性鼻炎的中西醫(yī)結(jié)合治療進(jìn)展［J］．北方藥學(xué)，2011，8（2）：59-61．

［2］楊清華，黃建軍．鼻鼽的古代文獻(xiàn)研究［J］．中醫(yī)藥信息，2005，22（1）：4．

［3］柴江平，王曉飛，葛海生，等．柴辛鼻敏康膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究［J］．中國(guó)中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志，2011，17（6）：676-677．

［4］李儀奎．中藥藥理實(shí)驗(yàn)方法上海［M］．上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1994：300-304．

［5］陳吉力，賴新生，唐純志，等．穴位敷貼對(duì)過敏性鼻炎小鼠腹腔肥大細(xì)胞脫顆粒影響的實(shí)驗(yàn)研究［J］．針灸雜志，2007，26（12）：42-45．

Anti-inflammatory and Immune Actions of Chaixinbiminkang Capsule

Chai Jiangping Liu Zhizhong Liu Renping GE Haisheng Wang Xiaofei

（1.Institute for D rug Control of People's Armed Police Forces，Beijing 102613，China；2.Institute of Materia Medica，Chinese Academy of Medical Sciences&Peking Union Medical College，Beijing，100050，China；3.Guang'anmen Hospital，China Academy of Chinese Medical Sciences，Beijing 100053，China）

ObjectiveTo observe the anti-inflmmatory and immune effects of Chaixinbiminkang capsule．MethodsSwelling earflaps ofmice induced by croton oil was used to identify anti-inflammatory effect，themast cell degranulation and delayed type hypersensitivity induced by DNFB-inmice were used to observe immune regulation，fed saturated concentration of Chaixinbiminkang capsule observe the safety of the drug．ResultsChaixinbiminkang capsule had 16.4%inhibitory activity on swelling earflaps ofmice induced by croton oil，inhibition rate ofmast cell degranulation was 43.1%，significantly reduce the ear swelling by DNFB-induced delayed type hypersensitivity inmice，and no side effects was observed in the saturated concentration of 11.1g／kg.Conclusion Chaixinbiminkang capsule has significant inhibitory activity on immediate and delayed-type hypersensitivity caused by allergic factors，and prominent immunomodulatory activity．

Allergicrhinetis；Chaixinbiminkang capsule；Anti-inflammatory；Immune regulation

10.3969／j.issn.1672-2779.2013.11.096

1672-2779（2013）-11-0145-03

??張文娟

2013-05-27）