HPLC測(cè)定桂林西瓜霜膠囊中黃芩苷的含量

董建輝

（三金集團(tuán)桂林三金生物藥業(yè)有限責(zé)任公司，廣西桂林541100）

桂林西瓜霜膠囊是由西瓜霜、黃芩、黃連、黃柏等數(shù)味中藥研制而成的復(fù)方制劑，具有清熱解毒、消腫止痛的功效。臨床用于治療肺胃熱盛兼有風(fēng)熱或痰熱所致咽喉腫痛、口舌生瘡、牙齦腫痛或出血、急慢性咽炎、口腔潰瘍等疾病。方中黃芩為臣藥，具有清熱燥濕、瀉火解毒、止血、安胎的功效[1]，能加強(qiáng)君藥治療咽喉諸疾之功效，含多種黃酮類成分，主要有黃芩苷、漢黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素等，其中黃芩苷為黃芩中的主要活性成分[2-3]。為有效控制桂林西瓜霜膠囊的質(zhì)量，保證臨床用藥安全有效，本研究采用高效液相色譜法（HPLC）測(cè)定該藥中黃芩苷的含量，以期為該藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的提高提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 1200高效液相色譜儀（四元梯度泵，可變波長(zhǎng)紫外檢測(cè)器），Agilent 1200在線色譜工作站（Agilent）；HR-200電子天平（Mettler Toledo），SCQ-5201D超聲儀（上海聲彥超聲波儀器有限公司）。

1.2 試藥

黃芩苷對(duì)照品（原中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，批號(hào)：110715-201016，供含量測(cè)定用）；桂林西瓜霜膠囊（三金集團(tuán)桂林三金生物藥業(yè)有限責(zé)任公司，批號(hào)：110302、110303、110304）；甲醇為色譜純，水為娃哈哈純凈水，其他試劑均為分析純。

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Phenomenex luna C18柱（250 mm× 4.6mm，5μm）；流動(dòng)相：甲醇-水-磷酸（50∶50∶0.2）；檢測(cè)波長(zhǎng)：280 nm；柱溫：40℃；流速：1.0 m L/m in；進(jìn)樣量：10μL。

2.2 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取黃芩苷對(duì)照品13.15 mg，加70%乙醇溶解并定容至25 m L，搖勻即得（每1 m L含黃芩苷0.526mg）。

2.3 供試品溶液的制備

精密稱取樣品（批號(hào)：110304）0.5 g，置25 m L具塞錐形瓶中，精密加入70%乙醇25 m L，稱定重量，加熱回流40 m in，放冷，再稱定重量，用70%乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，用0.45μm微孔濾膜濾過(guò)，棄去初濾液，留取續(xù)濾液，即得。

2.4 陰性樣品溶液的制備

取缺黃芩陰性樣品0.5 g，精密稱定，按2.3項(xiàng)同法制得陰性樣品溶液。

2.5 陰性干擾試驗(yàn)

分別精密吸取上述對(duì)照品溶液、供試品溶液及陰性樣品溶液各10μL，在上述色譜條件下，進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果樣品分離效果良好，陰性無(wú)干擾（見(jiàn)圖1）。

圖1 桂林西瓜霜膠囊HPLC圖

2.6 線性關(guān)系考察

分別精密吸取黃芩苷對(duì)照品溶液1.0、3.0、2.0、4.0、1.0m L，分別置25、20、5、5、1 m L量瓶中，加70%乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得。分別精密吸取以上對(duì)照品溶液10μL，在上述色譜條件下分別測(cè)定，以對(duì)照品進(jìn)樣量（X）為橫坐標(biāo)，峰面積積分值（Y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，求得回歸方程：

結(jié)果表明黃芩苷對(duì)照品進(jìn)樣量在0.210 4～5.260 0μg范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。

2.7 精密度試驗(yàn)

精密吸取2.2項(xiàng)下的對(duì)照品溶液10μL，在上述色譜條件下連續(xù)重復(fù)進(jìn)樣6次，以黃芩苷峰面積計(jì)算RSD為0.23%，表明儀器精密度良好。

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密吸取2.3項(xiàng)下制備的供試品溶液1μL，在上述色譜條件下，分別在0、2、4、8、12、24 h進(jìn)樣測(cè)定，以黃芩苷峰面積計(jì)算RSD為0.48%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.9 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批號(hào)樣品6份（批號(hào)：110304），按上述供試品溶液的制備方法和色譜條件進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算黃芩苷的含量，結(jié)果表明本方法具有較好的重復(fù)性，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果

2.10 加樣回收率試驗(yàn)

精密稱取6份已知含量的同一批樣品（批號(hào)：110304，黃芩苷含量為1.07%）0.25 g，再分別向樣品液中加入同一濃度的黃芩苷對(duì)照品溶液（0.526mg/m L）5.0m L，按供試品溶液的制備方法和色譜條件進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.11 樣品的含量測(cè)定

按供試品溶液的制備方法和色譜條件，分別對(duì)3批樣品按上述含量測(cè)定方法進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 樣品含量測(cè)定結(jié)果（n=6）

3 討論

3.1 在流動(dòng)相的選擇中，本實(shí)驗(yàn)曾采用不同比例的甲醇-水-磷酸[4-5]作為流動(dòng)相，結(jié)果以甲醇-水-磷酸（50∶50∶0.2）為流動(dòng)相時(shí)黃芩苷吸收峰與雜質(zhì)峰均能得到較好的分離，且其保留時(shí)間和完成樣品分析時(shí)間較為合適。故定為流動(dòng)相。

3.2 實(shí)驗(yàn)中曾對(duì)樣品的處理方法進(jìn)行考察。實(shí)驗(yàn)分別選擇了回流和超聲兩種方法；甲醇、50%甲醇、乙醇、70%乙醇4種提取溶劑；25、50、75 m L 3個(gè)梯度的溶劑用量；10、20、40、60 m in 4個(gè)梯度的提取時(shí)間等進(jìn)行逐一考察。比較提取效果，結(jié)果表明以25 m L的70%乙醇回流提取40 m in效果最好，且操作簡(jiǎn)便，故定為樣品的處理方法。

3.3 本研究所建立的方法重復(fù)性良好，回收率高，且該方法快速、簡(jiǎn)便、易操作，可用于桂林西瓜霜膠囊中黃芩苷的含量測(cè)定。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（2010年版）一部[M].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：282-283.

[2]徐玉田.黃芩的化學(xué)成分及現(xiàn)代藥理作用研究進(jìn)展[J].光明中醫(yī)，2010，25（3）：544-545.

[3]聶愛(ài)國(guó).黃芩的研究進(jìn)展[J].內(nèi)蒙古中醫(yī)藥，2010，29（12）：119-120.

[4]姬生國(guó)，王東，付蕾.HPLC法測(cè)定黃芩中黃芩苷的含量[J].內(nèi)蒙古中醫(yī)藥，2002，21（2）：41.

[5]劉凡澤.HPLC法測(cè)定清喉利咽顆粒中黃芩苷的含量[J].中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2008，14（6）：112-113.