苦豆籽粕-兩歧雙歧桿菌-唾液乳桿菌合生元對早期斷奶仔豬腸道pH值和消化酶活性的影響

■孫曉磊 楊 英 王雪飛 郭東清 胡彥卿 范琳琳

（內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院，內(nèi)蒙古呼和浩特 010018）

近年來，世界各國意識到在動物飼料中添加抗生素的危害性。為了尋求代替品，世界衛(wèi)生組織(WHO)、聯(lián)合國糧農(nóng)組織(FAO)及美、日等國極為重視抗生素替代物的研制。針對現(xiàn)代豬生產(chǎn)中早期斷奶應(yīng)激所引起的仔豬消化系統(tǒng)紊亂、嚴(yán)重腹瀉、生長停滯甚至死亡等問題，開發(fā)安全、有機(jī)、高效、無殘留、無公害的飼料添加劑是畜牧業(yè)發(fā)展的客觀要求和必然結(jié)果。益生菌、益生素及合生元等微生態(tài)制劑有其獨(dú)特的優(yōu)勢，前人沒有將益生菌和益生素進(jìn)行有機(jī)地整合制成一個微膠囊整體。本研究以中醫(yī)藥基礎(chǔ)理論“扶正祛邪”為指導(dǎo)，將提取苦參堿后剩余的殘?jiān)喽棺哑勺鳛橐嫔?，與具有良好生物學(xué)效應(yīng)的雙歧桿菌及仔豬腸道中固有的能夠抑制致病菌（沙門氏菌、大腸桿菌）生長的優(yōu)勢乳酸菌作為益生菌，研制成苦豆籽粕與多重益生菌復(fù)合的微膠囊合生元，針對目前仔豬早期斷奶應(yīng)激過程中消化道內(nèi)環(huán)境變化引起的生長遲緩等內(nèi)容開展多途徑、多層面的研究。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

苦豆籽粕-兩歧雙歧桿菌-唾液乳桿菌合生元由內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院中獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室制備（活菌含量為1.98×108cfu/g）。

1.2 試驗(yàn)動物及飼養(yǎng)管理

60頭(21±2)日齡的杜長大三元雜交仔豬，購于內(nèi)蒙古鄂爾多斯市水鏡湖豬場。

試驗(yàn)豬自由采食、飲水。進(jìn)欄前對豬舍進(jìn)行全面消毒，按豬場正常飼養(yǎng)管理進(jìn)行飼養(yǎng)。

1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)采用單因素試驗(yàn)設(shè)計(jì)，選取60頭體重接近的(21±2)日齡斷奶仔豬隨機(jī)分為4個處理，每個處理3個重復(fù)，每個重復(fù)5頭仔豬。第1、2、3組在飼喂基礎(chǔ)日糧的基礎(chǔ)上分別添加0.5%、1.0%和2.0%的合生元，第4組(對照組)飼喂基礎(chǔ)日糧(見表1)。預(yù)試期3 d，試驗(yàn)期為4周。

表1 試驗(yàn)分組及處理

1.4 基礎(chǔ)日糧

試驗(yàn)基礎(chǔ)日糧為內(nèi)蒙古正大有限公司提供的“代乳寶”配合飼料。主要原料組成：玉米、豆粕、魚粉、磷酸鹽、石粉、食鹽、復(fù)合預(yù)混料等，營養(yǎng)保證值見表2。

表2 試驗(yàn)基礎(chǔ)日糧營養(yǎng)保證值

1.5 指標(biāo)測定及方法

1.5.1 樣品采集及處理

分別于28、35、42、49日齡各試驗(yàn)組每個重復(fù)組隨機(jī)選取1頭仔豬前腔靜脈采血后，放血處死，迅速結(jié)扎幽門瓣、回盲瓣以防樣品相互污染。取已結(jié)扎兩端的十二指腸、空腸、回腸、盲腸3～5 cm各小腸段，立即浸入液氮后，于-80℃儲存待測。

1.5.2 腸道內(nèi)容物pH值的測定

取低溫保存的十二指腸、空腸、回腸和盲腸各段4℃解凍，輕輕刮取內(nèi)容物，蒸餾水10倍稀釋，振蕩均勻，用pH計(jì)測定。

1.5.3 腸道內(nèi)消化酶活性的測定

取低溫保存的十二指腸、空腸和回腸各段4℃解凍，輕輕刮取內(nèi)容物，以生理鹽水稀釋后，冰浴條件下勻漿，收集勻漿液，4℃、2 500 r/min離心10 min，吸取上清液待測，采用南京建成生化工程研究所試劑盒測定脂肪酶和淀粉酶活性。

1.6 數(shù)據(jù)分析

采用SAS9.0軟件對測得的數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，MEANS過程中的MENA和STD計(jì)算均值和標(biāo)準(zhǔn)差，使用ANOVA過程中的Duncan’s法進(jìn)行多重區(qū)組檢驗(yàn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 苦豆籽粕-兩歧雙歧桿菌-唾液乳桿菌合生元對早期斷奶仔豬腸道pH值的影響（見表3）

由表3可知，飼喂合生元有降低消化道pH值的趨勢，其中42日齡時2.0%合生元組空腸和盲腸內(nèi)容物的pH值顯著低于對照組（P＜0.05），49日齡時2.0%合生元組空腸和回腸內(nèi)容物的pH值顯著低于對照組（P＜0.05）。

2.2 苦豆籽粕-兩歧雙歧桿菌-唾液乳桿菌合生元對早期斷奶仔豬腸道脂肪酶活性的影響(見表4)

由表4試驗(yàn)結(jié)果可知，合生元對十二指腸、空腸作用效果顯著，而對回腸效果不顯著，其中0.5%合生元組和2%合生元組效果較好。

28日齡時，十二指腸脂肪酶活性的比較中，合生元組相對于對照組，0.5%合生元組和2.0%合生元組升高了 19.67%(P＜0.05)和14%(P＜0.05)；空腸脂肪酶活性比較中，1.0%合生元組和2.0%合生元組高于對照組 14.68%(P＜0.01)和 5.59%(P＜0.05)?；啬c脂肪酶活性比較中，0.5%合生元組高于對照組11.16%(P＞0.05)；35日齡時，2.0%合生元組空腸脂肪酶活性比對照組升高了40.30%(P＜0.01)。42日齡時，合生元組相對于對照組，差異不顯著(P＞0.05)。49日齡時，十二指腸脂肪酶活性的比較中，合生元組相對于對照組，0.5%合生元組、1.0%合生元組和2.0%合生元組分別升高了22.84%(P＜0.05)、24.90%(P＜0.05)和52.75%(P＜0.01)；空腸脂肪酶活性比較中，合生元組相對于對照組，0.5%合生元組、1.0%合生元組和2.0%合生元組升高了23.39%(P＜0.05)、28.31.0%(P＜0.05)和79.45%(P＜0.01)。

2.3 苦豆籽粕-兩歧雙歧桿菌-唾液乳桿菌合生元對早期斷奶仔豬腸道淀粉酶活性的影響(見表5)

表3 腸道內(nèi)容物pH值的測定結(jié)果

表4 脂肪酶活性測定結(jié)果(U/g prot.)

表5 淀粉酶活性測定結(jié)果(U/g prot.)

淀粉酶活性的比較結(jié)果表明，添加合生元對提高試驗(yàn)組仔豬消化道淀粉酶活性有著良好的作用，其中1.0%合生元組和2.0%合生元組效果較好。

28日齡時，十二指腸淀粉酶活性比較中，合生元組相對于對照組，0.5%合生元組和1.0%合生元組升高了73.68%(P＜0.01)和31.58%(P＜0.01)；空腸淀粉酶活性比較中，合生元組相對于對照組，0.5%合生元組和2%合生元組升高了333.33%(P＜0.01)和140%（P＜0.01）。35日齡時，空腸脂肪酶活性比較中，合生元組相對于對照組，1.0%合生元組和2.0%合生元組升高了55.01%(P＜0.01)和48.31%（P＜0.01）；回腸淀粉酶活性比較中，合生元組相對于對照組，0.5%合生元組和1.0%合生元組分別升高了24%(P＜0.01)和 56%(P＜0.01)。42 日齡時，十二指腸淀粉酶活性比較中，合生元組相對于對照組，0.5%合生元組和1.0%合生元組升高了15.94%(P＜0.05)和18.84%(P＜0.05)；回腸淀粉酶活性比較中，合生元組相對于對照組，0.5%合生元組和1.0%合生元組升高了 60%(P＜0.01)和 26.67%(P＜0.05)。49日齡時，回腸淀粉酶活性比較中，1.0%合生元組比對照組升高了83.72%(P＜0.01)。

3 討論

3.1 苦豆籽粕-兩歧雙歧桿菌-唾液乳桿菌合生元對早期斷奶仔豬腸道pH值的影響

腸道各部位pH值的不同不僅對消化酶有著直接的影響，也是影響腸道微生態(tài)的重要因素。

辛娜等（2011）研究了芽孢桿菌制劑對斷奶仔豬胃腸道pH值的影響，結(jié)果表明，芽孢桿菌制劑有降低胃腸道pH值的趨勢，但效果不顯著。劉傳虎等（2012）證明了益生菌制劑對斷奶仔豬各腸道組織內(nèi)容物pH值具有降低的趨勢，但差異不顯著。本試驗(yàn)結(jié)果表明，試驗(yàn)仔豬消化道處于酸性環(huán)境中，合生元不僅可以提高消化酶的活性，也對病原菌的生長繁殖起到一定的抑制作用，苦豆籽粕-兩歧雙歧桿菌-唾液乳桿菌合生元具有降低仔豬腸道pH值的趨勢，這也與上述試驗(yàn)結(jié)果相似。

3.2 苦豆籽粕-兩歧雙歧桿菌-唾液乳桿菌合生元對早期斷奶仔豬腸道消化酶活性的影響

微生態(tài)制劑可以提高動物消化酶的活性，消化酶含量是由酶分泌和降解的動態(tài)平衡所反映的，而酶活性增加主要與酶分泌加大或酶降解減少有關(guān)。雙歧桿菌、乳酸桿菌及其代謝產(chǎn)物能促進(jìn)動物消化酶的分泌和腸道蠕動，腸內(nèi)容物中酶活性是反映機(jī)體消化能力的良好指標(biāo)。大量研究證明，仔豬受到斷奶應(yīng)激的影響時，體內(nèi)消化酶活性都會低于斷奶前的水平，但隨著日齡和采食量的增加，體內(nèi)消化酶活性也會恢復(fù)到正常水平。王志祥等(2006)研究了乳酸桿菌對斷奶仔豬消化酶活性的影響，研究結(jié)果表明，添加乳酸桿菌能夠極顯著提高胰臟和十二指腸中脂肪酶和淀粉酶的活性(P＜0.01)。班慧（2010）研究表明，在飼料中添加苦豆籽粕-雙歧桿菌合生元對雞小腸不同部位的胰蛋白酶、淀粉酶等消化酶活性均有提高。陳國順等（2012）研究了中草藥飼料添加劑對斷奶仔豬消化酶活性的影響，結(jié)果表明，中草藥飼料添加劑對斷奶仔豬空腸后段和回腸的消化酶活性有不同程度的提高。本試驗(yàn)研究結(jié)果表明，在日糧中添加苦豆籽粕-兩歧雙歧桿菌-唾液乳桿菌合生元可使早期斷奶仔豬小腸內(nèi)脂肪酶和淀粉酶活性均有不同程度的提高。但脂肪酶活性的測定中，斷奶初期（28日齡）脂肪酶活性為最高，分析原因可能與樣品采集及處理有關(guān)。

4 結(jié)論

4.1 苦豆籽粕-兩歧雙歧桿菌-唾液乳桿菌合生元具有降低斷奶仔豬消化道pH值的趨勢，其中2%合生元組空腸（42、49日齡）、回腸（49日齡）和盲腸（42日齡）效果顯著（P＜0.05）。

4.2 苦豆籽粕-兩歧雙歧桿菌-唾液乳桿菌合生元能在一定程度上提高腸道內(nèi)脂肪酶和淀粉酶的活性，且對空腸消化酶活性的提高效果明顯，其中添加量為2.0%時效果較好。

（參考文獻(xiàn)若干篇，刊略，需者可函索）