C反應(yīng)蛋白方法學(xué)相關(guān)性分析

梁丹荔

（廣西壯族自治區(qū)永福縣中醫(yī)院檢驗(yàn)科 541800）

C反應(yīng)蛋白（creation protein，CRP）是機(jī)體一種重要的急性期蛋白，由肝臟合成并釋放入血液，在健康人血液中含量極微，當(dāng)機(jī)體細(xì)菌感染和組織損傷時(shí)，CRP的濃度顯著增高，因而是體內(nèi)各種炎癥和組織損傷的敏感性指標(biāo)［1］。近年來隨著越來越多的檢測(cè)方法相繼問世，CRP的測(cè)定已廣泛應(yīng)用于臨床疾病的早期診斷和鑒別診斷［2－3］。本檢驗(yàn)科近3年來也開展了CRP檢測(cè)，并且根據(jù)不同需要開展了兩種方法學(xué)的檢測(cè)，深受臨床醫(yī)生歡迎?，F(xiàn)對(duì)本科室開展的免疫比濁法（使用全自動(dòng)生化分析儀）和免疫熒光干式定量法（使用免疫熒光分析儀）進(jìn)行相關(guān)性探討，報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料 收集本院2012年3～4月門診和住院的125例做CRP檢測(cè)患者的新鮮血清，其中男73例，女52例，年齡2～80歲，取同份血清用兩種方法測(cè)定CRP濃度。

1.2 儀器與方法

1.2.1 免疫比濁法 試劑1（R1）甘氨酸緩沖液，試劑2（R2）兔抗人C反應(yīng)蛋白致敏膠乳顆粒。校準(zhǔn)品：為以混合人血清為基質(zhì)的液體形式的C反應(yīng)蛋白校準(zhǔn)品1～5，濃度分別為5、20、40、160、320mg／L。C反應(yīng)蛋白校準(zhǔn)品賦值的計(jì)量學(xué)溯源性為IRMMCRM470。在長(zhǎng)春迪瑞CS-600型全自動(dòng)生化分析儀進(jìn)行檢測(cè)。其反應(yīng)類型：兩點(diǎn)終點(diǎn)法反應(yīng)，反應(yīng)方向：吸光度上升的反應(yīng)，溫度37℃，光經(jīng)1cm、主波長(zhǎng)570nm。

1.2.2 免疫熒光干式定量法 將檢測(cè)緩沖液和血液樣本在檢測(cè)瓶中進(jìn)行混合，緩沖液中的熒光標(biāo)記抗CRP抗體和血液中的CRP抗原結(jié)合形成抗原抗體復(fù)合物。當(dāng)混合樣本被放到反應(yīng)板的樣本位上并通過毛細(xì)血管作用擴(kuò)散到硝化纖維基質(zhì)的測(cè)試帶上，該復(fù)合物被檢測(cè)帶上的抗CRP抗體所捕獲。因此，血液樣品的CRP越多，測(cè)試帶上的復(fù)合物聚集得越多。熒光抗體的信號(hào)強(qiáng)度反映了被捕獲的CRP的數(shù)量，經(jīng)過i-CHROMA Reader免疫熒光分析儀的處理，能夠反映出血液樣本中CRP的濃度。試劑盒：（1）反應(yīng)板 25／50／100／200人份／盒；（2）檢測(cè)緩沖液25／50／100／200管／盒（每管500μL）；（3）取樣器25／50／100／200個(gè)／盒；（4）ID芯片1個(gè)／盒。反應(yīng)板含有固化了的鼠抗人CRP單克隆抗體的檢測(cè)線和固化了兔IgG的控制線。預(yù)分裝在管子里的檢測(cè)緩沖液含有熒光標(biāo)記的抗人CRP（鼠單克?。?，熒光標(biāo)記的抗兔IgG的凝膠作為穩(wěn)定劑，疊氮化鈉。試劑準(zhǔn)備 ：從冰箱中取出檢測(cè)緩沖液后需要在室溫環(huán)境中放置10min，使其恢復(fù)至室溫后方可使用。

2 結(jié) 果

對(duì)125例患者的同分血清作CRP的免疫比濁法和免疫熒光干式定量法的測(cè)定結(jié)果，進(jìn)行線性回歸分析，以免疫比濁法結(jié)果為橫坐標(biāo)X，免疫熒光干式定量法為縱坐標(biāo)Y（檢測(cè)范圍0.1～200mg／L），結(jié)果顯示：Y＝1.12 X－0.53（r＝0.92，P＜0.05），證明兩種方法具有良好相關(guān)性。

3 討 論

C反應(yīng)蛋白是一種急性時(shí)相蛋白，在急性和慢性感染、心肌梗死、創(chuàng)傷、腫瘤時(shí)濃度急劇上升，檢測(cè)CRP對(duì)臨床診斷具有重要參考價(jià)值［4］，現(xiàn)在越來越受到臨床醫(yī)生的關(guān)注。

免疫比濁法的檢測(cè)原理：C反應(yīng)蛋白試劑是大小均一的聚苯乙烯乳膠顆粒懸液，顆粒表面包被有兔抗人C反應(yīng)蛋白抗體，樣品中C反應(yīng)蛋白與之結(jié)合后，立即發(fā)生凝集反應(yīng)，并產(chǎn)生濁度改變。該濁度與樣品中C反應(yīng)蛋白濃度成正比，通過在570nm處測(cè)定吸光度的變化值，即可測(cè)得樣品中C反應(yīng)蛋白的濃度。在全自動(dòng)生化分析儀上檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果恒定，較適合大樣本量的工作。而免疫熒光干式定量法的工作原理為：免疫熒光分析儀使用激光作為激發(fā)光源，在檢測(cè)中熒光染料的發(fā)射光被收集并被轉(zhuǎn)化為電信號(hào)，電信號(hào)的強(qiáng)弱和代表熒光染料分子的斑點(diǎn)的數(shù)量嚴(yán)格相關(guān)。當(dāng)經(jīng)緩沖稀釋后的檢測(cè)樣本加入到檢測(cè)板后，檢測(cè)板被插入免疫熒光分析儀中，被分析物的濃度通過一個(gè)預(yù)編程的定標(biāo)過程被檢測(cè)出來，所以熒光免疫分析法測(cè)定快速簡(jiǎn)便，更適合單一的標(biāo)本檢測(cè)。由于這兩種方法學(xué)具有高度的相關(guān)性，給檢測(cè)工作帶來很大的便捷，給臨床提供了很好的服務(wù)。

［1］ 李瑤，劉潔，羅春燕，等.C反應(yīng)蛋白在兒科感染性疾病中的臨床應(yīng)用［J］.云南醫(yī)藥，2009，30（1）：28-29.

［2］ Duelos TW.Function of C-reactive Protein［J］.Ann Med，2007，32（11）：274-278.

［3］ Volanakis JE.Humam C-reactive Protein：expression，Strix-ture，and function［J］.Mol Lmmuno，2006，38（10）：189-197.

［4］ 王慧，羅煒，陳濤.免疫透射比濁法CRP檢測(cè)試劑盒的性能評(píng)價(jià)［J］.中國(guó)熱帶醫(yī)學(xué)，2006，6（8）：1479-1480.