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    腺花香茶菜地下根莖化學(xué)成分研究

    2013-02-14 04:20:13肖朝江周星利韓冰洋田新雁孫俊哲
    關(guān)鍵詞:甘油酯果酸石油醚

    肖朝江,周星利,韓冰洋,田新雁,孫俊哲,姜 北

    大理學(xué)院藥物研究所藥學(xué)與化學(xué)學(xué)院,大理671000

    腺花香茶菜Isodon adenantha(Diel)Hara為香茶菜屬植物,多年生半木質(zhì)草本,根莖呈不規(guī)則結(jié)節(jié)狀;分布于云、貴、川地區(qū);生于海拔1150~3400 m的松林、松櫟林、竹林下,或林緣草地上[1]。根據(jù)文獻(xiàn)記載,腺花香茶菜的莖葉(又稱水龍膽草)具有清熱解毒的功效,主治熱毒瘡瘍;其塊狀根莖(又稱食疙瘩、路邊金)具有化濕健脾、理氣止嘔、解毒消腫的功效,可以治療腸胃炎、痢疾等[2]。目前,該植物莖葉化學(xué)成分已多有研究,但其地下根莖化學(xué)成分未見研究報(bào)道。由于腺花香茶菜地下根莖有藥用記載且形狀與同屬其它植物有顯著不同,為了解該植物部位的成分組成,為活性研究提供依據(jù),本課題對(duì)其進(jìn)行了系統(tǒng)的化學(xué)成分研究;從其70%丙酮提取物的乙酸乙酯部位分離得到16個(gè)化合物,分別鑒定為維西香茶菜甲素(weisiensin A,1)、2α-羥基齊墩果酸(2α-hydroxyloleanolic acid,2)、2α,23-二羥基齊墩果酸(2α,23-dihydroxyoleanolic acid,3)、2β,3β-二-O-異丙叉基-齊墩果-12-烯-28-酸 (2β,3β-bis-O-isopropylidene-olean-12-en-28-acid,4)、乙酰熊果酸(3-O-acetylursolic acid,5)、1-棕櫚酸單甘油酯(1-monopalmitin,6)、1-油酸單甘油酯(1-monoolein,7)、1-亞油酸單甘油酯(1-monolinolein,8)、1,2-亞油酸甘油二酯(glycerol 1,2-dilinoleate,9)、α-亞麻酸甲酯(αlinolenic acid methylester,10)、棕櫚酸(palmitic acid,11)、硬脂酸 (octadecanoic acid,12)、油酸 (oleic acid,13)、7α-羥基豆甾醇 (7α-hydroxystigmasterol,14)、7β-羥基谷甾醇(7β-hydroxysitosterol,15)、β-谷甾醇(β-sitosterol,16)。其中化合物 4、6 ~10 和13~15為首次從該屬植物中分離得到,化合物2、3、5、11和12為首次從該植物中分離得到。

    1 儀器和材料

    VG Auto Spec-3000質(zhì)譜儀(電離條件為70 eV);Bruker AM-400和AvanceⅢ-600核磁共振波譜儀(TMS為內(nèi)標(biāo))。柱色譜硅膠為青島海洋化工廠產(chǎn)品,反相填充材料RP-18為日本Fuji公司產(chǎn)品。

    腺花香茶菜[Isodon adenantha(Diel)Hara]地下根莖2010年7月采自云南大理蒼山西坡海拔2 100米處,由中國科學(xué)院昆明植物研究所向春雷博士鑒定,植物標(biāo)本(20100805-1b)存放于大理學(xué)院藥學(xué)與化學(xué)學(xué)院姜北教授研究組。

    2 提取分離

    腺花香茶菜干燥根莖17.0 kg,粉碎后用70%丙酮冷浸提取8次,減壓濃縮得總浸膏后用適量水混懸,再依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇分配數(shù)次;得相應(yīng)部位萃取物。乙酸乙酯萃取物(200 g)以適量粗硅膠(80~100目)拌樣后經(jīng)200~300目硅膠柱色譜,氯仿-丙酮混合溶劑(1∶0,9∶1,8∶2,7∶3,6∶4,5∶5,0∶1)梯度洗脫,在 TLC 的檢測下合并相同組分得7個(gè)組分(A~G)。A組分經(jīng)經(jīng)硅膠柱色譜(石油醚-乙酸乙酯10∶1 至1∶1、石油醚-乙酸乙酯30∶1、環(huán)己烷-異丙醇 10∶1、純石油醚、氯仿-丙酮 10∶1)和反相RP-18(甲醇-水)柱色譜,得到化合物16(1 250 mg)、15(25 mg)、13(100 mg)、5(200 mg)、10(60 mg)、11(100 mg)和14(5 mg)。C組分經(jīng)硅膠柱色譜(石油醚-丙酮4∶1、石油醚-乙酸乙酯7∶1、石油醚-乙酸乙酯3∶2)和反相 RP-18柱色譜(甲醇-水),得到化合物 7(300 mg)、8(40 mg)、6(20 mg)、2(2 mg)和9(15 mg)。D組分經(jīng)硅膠柱色譜(石油醚-乙酸乙酯 1∶1、石油醚-乙酸乙酯 10∶1、石油醚-乙酸乙酯9∶2、石油醚-乙酸乙酯3∶1)和反相 RP-18柱色譜(甲醇-水),得到化合物 3(4 mg)、12(3 mg)、4(5 mg)和1(10 mg)。

    3 結(jié)構(gòu)鑒定

    化合物1 無色片晶(甲醇);1H NMR(CDCl3,400 MHz)δ:5.77(1H,brs,H-17a),5.67(1H,d,J=3.7 Hz,H-11α),5.14(1H,brs,H-17b),5.11(1H,dd,J=11.4,4.2 Hz,H-1β),4.98(1H,d,J=3.4 Hz,H-7α),3.96(1H,brs,H-6β),3.48(1H,brs,H-3α),3.00(1H,brs,H-13α),2.85 and 1.64(各1H,brd,J=12.7 Hz,H2-14),2.25(1H,s,H-9β),2.22,2.04 and 1.79(各 3H,s,3 × -OAc),1.59(3H,s,Me-20),1.25(3H,s,Me-19),0.97(3H,s,Me-18);13CNMR(CDCl3,100 MHz)δ:79.7(C-1),31.9(C-2),76.5(C-3),37.8(C-4),41.0(C-5),69.6(C-6),74.3(C-7),48.2(C-8),54.3(C-9),42.7(C-10),69.7(C-11),38.2(C-12),36.5(C-13),35.9(C-14),205.0(C-15),149.9(C-16),112.4(C-17),28.4(C-18),24.2(C-19),15.6(C-20),170.9(-OAc),170.6(-OAc),169.4(-OAc),21.8(-OAc),21.4(-OAc),21.3(-OAc)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[3],并經(jīng) HSQC、HMBC、COSY、ROESY二維譜圖中的相關(guān)耦合信息確證,故鑒定化合物1為維西香茶菜甲素。

    化合物2 白色粉末(石油醚-乙酸乙酯);1H NMR(CDCl3,400 MHz)δ:5.22(1H,brs,H-12),3.59(1H,brt,J=9.0 Hz,H-2β),3.30(1H,brs,H-3α),2.89(1H,brd,J=9.3 Hz,H-18β),1.07,0.95,0.91,0.87,0.84,0.74,0.71(各 3H,s,7 ×Me);13C NMR(CDCl3,150 MHz)δ:46.0(C-1),68.5(C-2),83.4(C-3),39.2(C-4),55.2(C-5),18.3(C-6),32.5(C-7),39.2(C-8),41.1(C-9),38.1(C-10),23.0(C-11),122.0(C-12),143.9(C-13),41.7(C-14),27.5(C-15),23.3(C-16),46.3(C-17),41.1(C-18),45.8(C-19),30.6(C-20),33.0(C-21),32.5(C-22),28.5(C-23),16.8(C-24),16.5(C-25),16.7(C-26),25.8(C-27),180.8(C-28),33.0(C-29),23.5(C-30)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[4],故鑒定化合物2為2α-羥基齊墩果酸。

    化合物3 無色針晶(丙酮);1H NMR(CDCl3,400 MHz)δ:5.21(1H,brs,H-12),3.82(1H,brd,J=11.0 Hz,H-2β),3.53(1H,brs,H-3α),3.45(1H,brd,J=11.5 Hz,H-23a),3.35(1H,brd,J=11.4 Hz,H-23b),2.76(1H,brd,J=10.3 Hz,H-18β),1.09,0.92,0.86,0.83,0.71,0.66(各 3H,s,6 × Me);13C NMR(CDCl3,150 MHz)δ:45.8(C-1),66.1(C-2),78.1(C-3),39.2(C-4),47.1(C-5),17.8(C-6),32.4(C-7),39.2(C-8),42.2(C-9),37.8(C-10),22.9(C-11),121.9(C-12),144.1(C-13),41.7(C-14),27.5(C-15),23.3(C-16),46.3(C-17),41.1(C-18),40.9(C-19),30.6(C-20),33.7(C-21),32.0(C-22),70.7(C-23),17.1(C-24),16.6(C-25),16.7(C-26),25.9(C-27),180.7(C-28),33.0(C-29),23.5(C-30)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[5],故鑒定化合物3為2α,23-二羥基齊墩果酸。

    化合物4 無色簇晶(丙酮);1H NMR(CDCl3,400 MHz)δ:5.29(1H,brs,H-12),4.17(1H,brt,J=4.7 Hz,H-2α),3.69(1H,d,J=4.1 Hz,H-3α),2.82(1H,brd,J=10.0 Hz,H-18β),1.47(3H,s,Me-2'),1.32(3H,s,Me-3'),1.14,1.07,0.92,0.89,0.89,0.87,0.72(各 3H,s,7 × Me);13C NMR(CDCl3,150 MHz)δ:42.3(C-1),72.0(C-2),83.0(C-3),38.2(C-4),49.7(C-5),18.4(C-6),33.2(C-7),39.5(C-8),47.1(C-9),35.6(C-10),23.1(C-11),122.8(C-12),143.6(C-13),42.5(C-14),27.7(C-15),23.4(C-16),46.7(C-17),41.1(C-18),46.0(C-19),30.8(C-20),33.9(C-21),32.6(C-22),29.0(C-23),23.7(C-24),15.6(C-25),17.1(C-26),26.1(C-27),183.1(C-28),33.2(C-29),28.5(C-30),107.2(C-1'),26.7(C-2'),24.0(C-3')。參考文獻(xiàn)報(bào)道[6,7],鑒定化合物 4 為 2β,3β-二-O-異丙叉基-齊墩果-12-烯-28-酸。

    化合物5 無色方晶(石油醚-乙酸乙酯);1H NMR(CDCl3,400 MHz)δ:5.23(1H,m,H-12),4.52(1H,dd,J=9.9,5.2 Hz,H-3),2.19(3H,s,Me-2'),1.30,1.07,0.96,0.95,0.94,0.85,0.76(各 3H,7 × Me);13C NMR(CDCl3,100 MHz)δ:37.6(C-1),23.9(C-2),80.6(C-3),37.6(C-4),55.2(C-5),18.5(C-6),36.6(C-7),39.4(C-8),47.3(C-9),36.8(C-10),23.5(C-11),125.7(C-12),137.8(C-13),41.8(C-14),28.0(C-15),24.9(C-16),47.9(C-17),52.4(C-18),38.9(C-19),38.9(C-20),31.1(C-21),37.6(C-22),28.0(C-23),17.0(C-24),15.5(C-25),16.7(C-26),23.5(C-27),183.9(C-28),16.9(C-29),22.4(C-30),173.0(C-1'),21.2(C-2')。在 TLC 上多種溶劑系統(tǒng)分別展開時(shí)化合物5與乙酰熊果酸對(duì)照品Rf值及斑點(diǎn)顏色均一致,故鑒定化合物5為乙酰熊果酸。

    化合物6 C19H38O4,無色簇晶(甲醇);EI-MSm/z(rel.int.%):331[M+H]+(5),299(41),257(41),239(85),134(70),98(92),57(100);1H NMR(MeOD,400 MHz)δ:4.15(1H,dd,J=11.3,4.3 Hz,H-1'a),4.05(1H,dd,J=11.3,6.2 Hz,H-1'b),3.84(1H,m,H-2'),3.55(1H,d,J=5.7 Hz,H-3'a),3.30(1H,d,J=5.7 Hz,H-3'b),2.35(2H,t,J=7.4 Hz,H2-2),1.61(2H,brs,H2-3),1.28(16H,brs,12 ×-CH2),0.89(3H,t,J=6.2 Hz,Me-16);13C NMR(MeOD,100 MHz)δ:175.7(C-1),35.1(C-2),33.1(C-3),30.8 ~ 30.2(11×-CH2),23.8(C-15),14.7(C-16),66.5(C-1'),71.1(C-2'),64.1(C-3')。在TLC上多種溶劑系統(tǒng)分別展開時(shí)化合物6與1-棕櫚酸單甘油酯對(duì)照品Rf值及斑點(diǎn)顏色均一致,故鑒定化合物6為1-棕櫚酸單甘油酯。

    化合物7 C21H40O4,白色簇晶(甲醇);EI-MSm/z(rel.int.%):357[M+H]+(20),356[M]+(10),338(20),299(19),264(32),257(21),239(55),222(8),137(10),134(40),112(30),98(72),83(56),69(69),57(92),55(100);1H NMR(CDCl3,400 MHz)δ:5.35(2H,t,J=5.6 Hz,H-9,10),4.18(1H,dd,J=11.6,4.8 Hz,H-1'a),4.13(1H,dd,J=11.6,4.8 Hz,H-1'b),3.92(1H,brt,J=4.6 Hz,H-2'),3.69(1H,dd,J=11.6,3.8 Hz,H-3'a),3.59(1H,dd,J=11.5,5.8 Hz,H-3'b),2.34(2H,t,J=7.6 Hz,H2-2),2.00(4H,brd,J=5.6 Hz,H2-8,11),1.61(2H,brt,J=6.4 Hz,H2-3),1.29 ~ 1.24(20H,brs,10 ×-CH2),0.84(3H,t,J=6.2 Hz,Me-18);13C NMR(CDCl3,100 MHz)δ:174.4(C-1),34.1(C-2),24.9(C-3),29.7 ~ 29.1(10 ×-CH2),130.0(C-9),129.7(C-10),31.9(C-16),22.7(C-17),14.1(C-18),65.1(C-1'),70.2(C-2'),63.3(C-3')。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[8],故鑒定化合物7為1-油酸單甘油酯。

    化合物8 C21H38O4,無色油狀物;EI-MSm/z(rel.int.%):354 [M]+(8),262(71),55(100);1H NMR(MeOD,400 MHz)δ:5.38(4H,overlap,H-9,10,12,13),4.14(1H,dd,J=11.3,4.4 Hz,H-1'a),4.05(1H,dd,J=11.3,4.4 Hz,H-1'b),3.81(1H,brt,J=5.3 Hz,H-2'),3.54(2H,d,J=5.3 Hz,H-3'),2.78(2H,m,H2-11),2.34(2H,t,J=7.4 Hz,H2-2),2.04(4H,m,H2-8,14),1.61(2H,brs,H2-3),1.32 ~ 1.28(14H,brs,7 ×-CH2),0.88(3H,t,J=6.8 Hz,Me-18);13C NMR(MeOD,100 MHz)δ:175.5(C-1),34.9(C-2),30.7 ~25.9(11 ×-CH2),130.9(C-9),129.1(C-10),129.0(C-12),130.9(C-13),14.4(C-18),66.5(C-1'),71.1(C-2'),64.0(C-3')。在 TLC 上多種溶劑系統(tǒng)分別展開時(shí)化合物8與1-亞油酸單甘油酯對(duì)照品Rf值及斑點(diǎn)顏色均一致,故鑒定化合物8為1-亞油酸單甘油酯。

    化合物9 C39H68O5,無色油狀物;EI-MSm/z(rel.int.%):337(7),277(11),255(39),229(15),181(18),155(37),135(35),109(50),95(47),83(82),81(79),69(62),67(65),57(98),55(100);1H NMR(CDCl3,400 MHz)δ:5.59,5.57,5.51 and 5.46(8H,m,H-9',10',12',13',9'',10'',12'',13''),4.24(1H,m,H-2),4.14(2H,brt,J=4.4 Hz,H2-1),3.69(1H,dd,J=11.3,2.9 Hz,H-3a),3.59(1H,dd,J=11.3,2.9 Hz,H-3b),2.90(2H,brs,H2-11'),2.78(2H,brs,H2-11''),2.33(4H,t,J=7.6 Hz,H2-2',2''),2.04(8H,brt,J=6.7 Hz,H2-8',14',8'',14''),1.61(4H,brs,H2-3',3''),1.29 ~ 1.24(28H,brs,14 ×-CH2),0.86(6H,t,J=6.5 Hz,Me-18',18'');13C NMR(CDCl3,100 MHz)δ:65.1(C-1),70.2(C-2),63.3(C-3),174.3(C-1'),174.2(C-1''),34.1(C-2',2''),24.7(C-3',3''),29.2 ~ 28.6(16 ×-CH2),134.5(C-9'),134.3(C-9''),127.9(C-10'),127.7(C-10''),127.3(C-12'),127.2(C-12''),134.1(C-13'),133.9(C-13''),31.4(C-16',16''),22.5(C-17',17''),14.0(C-18',18'')。參考文獻(xiàn)報(bào)道[9,10],鑒定化合物 9 為 1,2-亞油酸甘油二酯。

    化合物10 C19H32O2,無色油狀物;EI-MSm/z(rel.int.%):293 [M+H]+(41),263(12),237(8),185(15),165(8),151(18),137(21),123(25),109(43),95(62),83(66),81(91),69(63),57(87),55(100);1H NMR(CDCl3,400 MHz)δ:5.34(6H,m,H-9,10,12,13,15,16),3.65(3H,s,-OCH3),2.75(4H,brt,J=6.5 Hz,H2-11,14),2.28(2H,t,J=7.5 Hz,H2-2),2.02(4H,m,H2-8,17),1.59(2H,brt,J=6.5 Hz,H2-3),1.28~1.24(8H,brs,4 ×-CH2),0.84(3H,t,J=6.9 Hz,Me-18);13C NMR(CDCl3,100 MHz)δ:174.4(C-1),34.1(C-2),31.9 ~22.6(9 ×-CH2),130.0(C-9),127.8(C-10),129.9(C-12),129.6(C-13),128.0(C-15),130.1(C-16),14.1(C-18),51.3(-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[11],故鑒定化合物10為α-亞麻酸甲酯。

    化合物11 C16H32O2,無色片晶(甲醇);EI-MSm/z(rel.int.%):256 [M]+(55),213(18),199(5),185(7),171(8),157(8),129(28),97(18),83(30),73(91),69(52),60(92),55(100);1H NMR(CDCl3,400 MHz)δ:2.34(2H,t,J=7.5 Hz,H2-2),1.62(2H,brt,J=7.3 Hz,H2-3),1.30 ~1.25(24H,brs,12 × -CH2),0.88(3H,t,J=6.5 Hz,Me-16);13CNMR(CDCl3,100 MHz)δ:180.4(C-1),34.1(C-2),24.9(C-3),29.7 ~29.0(10 × -CH2),31.9(C-14),22.7(C-15),14.1(C-16)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[12],故鑒定化合物11為棕櫚酸。

    化合物12 C18H36O2,白色粉末(石油醚-乙酸乙酯);EI-MSm/z(rel.int.%):284[M]+(1);1H NMR(CDCl3,400 MHz)δ:2.35(2H,t,J=7.4 Hz,H2-2),1.63(2H,brt,J=7.0 Hz,H2-3),1.30~1.25(28H,brs,14 × -CH2),0.88(3H,t,J=6.4 Hz,Me-18);13C NMR(CDCl3,100 MHz)δ:179.0(C-1),34.0(C-2),24.9(C-3),31.2 ~ 29.3(12×-CH2),32.1(C-16),22.9(C-17),14.1(C-18)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[13],故鑒定化合物12為硬脂酸。

    化合物13 C18H34O2,白色油脂狀固體;EI-MSm/z(rel.int.%):282 [M]+(1),264(6),239(11),236(8),223(7),167(12),60(25),55(100);1H NMR(CDCl3,400 MHz)δ:5.34(2H,brs,H-9,10),2.35(2H,t,J=7.4 Hz,H2-2),2.00(4H,m,H2-8,11),1.62(2H,brt,J=6.5 Hz,H2-3),1.30 ~1.25(20H,brs,10 × -CH2),0.88(3H,t,J=5.8 Hz,Me-18)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[14],故鑒定化合物13為油酸。

    化合物14 無色針晶(丙酮);1H NMR(CDCl3,500 MHz)δ:5.60(1H,d,J=5.1 Hz,H-6),5.16(1H,dd,J=8.6,15.1 Hz,H-22),5.02(1H,dd,J=8.6,15.1 Hz,H-23),3.85(1H,brs,H-7),3.59(1H,m,H-3),0.99(3H,s,Me-19),0.92(3H,d,J=6.5 Hz,Me-21),0.86(3H,overlap,Me-26),0.84(3H,overlap,Me-29),0.80(3H,overlap,Me-27),0.68(3H,s,Me-18)。13C NMR(CDCl3,125 MHz)δ:37.0(C-1),31.4(C-2),71.3(C-3),42.0(C-4),146.2(C-5),123.8(C-6),65.3(C-7),37.5(C-8),42.2(C-9),37.4(C-10),23.1(C-11),39.2(C-12),42.3(C-13),49.4(C-14),24.3(C-15),29.7(C-16),55.7(C-17),11.6(C-18),19.0(C-19),40.4(C-20),18.2(C-21),138.2(C-22),129.4(C-23),51.2(C-24),31.9(C-25),20.2(C-26),21.1(C-27),25.4(C-28),11.9(C-29)。在TLC上多種溶劑系統(tǒng)分別展開時(shí)化合物14與7α-羥基豆甾醇對(duì)照品Rf值及斑點(diǎn)顏色均一致,故鑒定化合物14為7α-羥基豆甾醇。

    化合物15 白色粉末(甲醇);1H NMR(CD3OD,400 MHz)δ:5.24(1H,brs,H-6),3.74(1H,brd,J=8.0 Hz,H-7α),3.42(1H,m,H-3α),1.07(3H,s,Me-19),0.95(3H,d,J=6.3 Hz,Me-21),0.86(3H,t,J=9.0 Hz,Me-29),0.85(3H,d,J=7.0 Hz,Me-26),0.83(3H,d,J=7.0 Hz,Me-27),0.72(3H,s,Me-18);13C NMR(CD3OD,100 MHz)δ:38.2(C-1),32.5(C-2),72.1(C-3),42.5(C-4),144.0(C-5),127.4(C-6),73.7(C-7),41.2(C-8),50.0(C-9),37.5(C-10),22.2(C-11),41.1(C-12),44.0(C-13),56.8(C-14),27.1(C-15),29.5(C-16),57.7(C-17),12.3(C-18),19.4(C-19),37.4(C-20),19.4(C-21),35.1(C-22),27.3(C-23),47.2(C-24),30.3(C-25),20.2(C-26),20.2(C-27),24.1(C-28),12.3(C-29)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[15],故鑒定化合物15為7β-羥基谷甾醇。

    化合物16 無色針晶(丙酮);在TLC上多種溶劑系統(tǒng)分別展開時(shí)化合物16與β-谷甾醇對(duì)照品Rf值及斑點(diǎn)顏色均一致,故鑒定化合物16為β-谷甾醇。

    1 Delectis Florae Reipublicae Popularis Sinicae Agendae Academiae Sinicae Edita(中國科學(xué)院中國植物志編輯委員會(huì)).Flora Reipublicae Popularis Sinicae(中國植物志):Tomus(66).Beijing:Science Press,1997.532-534.

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