紅花黃色素與雙亞酸的抗血栓作用

楊曉君，穆合塔爾，包曉瑋，郭雪婷，陳 瀟

(1.新疆醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，新疆 烏魯木齊 830054；2.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與藥學(xué)學(xué)院，新疆 烏魯木齊 830052)

血栓形成是許多缺血性疾病的生理基礎(chǔ)，抑制血小板的聚集與釋放、抑制凝血酶系統(tǒng)、激活抗凝血酶及纖溶酶系統(tǒng)均可抑制血栓的形成[1-3]。紅花系菊科紅花屬植物紅花(Carthmus tinctorinsL.)的干燥管狀花[4]。紅花黃色素(SY)是紅花的主要有效成分[5]，其中羥基紅花黃色素A (hydroxysafflor yellow A，HSYA)是紅花發(fā)揮藥理作用的主要物質(zhì)[6-9]?，F(xiàn)代研究表明，紅花黃色素具有擴(kuò)張血管、改善心肌供血、抑制血小板聚集、抗氧化等多種藥理作用，適用于冠心病、血管栓塞性疾病、高血壓、腦梗塞并發(fā)癥等[10]。紅花黃色素也是世界衛(wèi)生組織允許鼓勵(lì)使用的天然食用色素之一[11]，是理想的食品添加劑。紅花籽油的亞油酸含量是所有已知植物中最高的，號(hào)稱(chēng)“亞油酸之王”。亞油酸、α-亞麻酸是人體必需脂肪酸，具有軟化血管作用，主要功效是降血脂和抗血栓、預(yù)防動(dòng)脈粥樣硬化等[12]。

本實(shí)驗(yàn)將紅花不同部位的化學(xué)成分——紅花黃色素和亞油酸、亞麻酸進(jìn)行合并后使用，觀察其單用及合并使用的抗血栓作用，為開(kāi)發(fā)紅花新產(chǎn)品——紅花黃色素軟膠囊提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑與儀器

清潔級(jí)昆明種小鼠，體質(zhì)量18～22g，雌雄各半；清潔級(jí)SD大鼠，體質(zhì)量200～250g，雄性，均由新疆維吾爾自治區(qū)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心提供。

雙亞酸即含有40%紅花籽油與60%亞麻酸，由新疆醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院提供；紅花黃色素 新疆宏展中藥科技有限公司。

尿激酶 天津生物化學(xué)制藥有限公司；TXB2放免試劑盒、6-Ke-PGF1a放免試劑盒、PGE2放免試劑盒北京永輝生物科技有限公司。

BL 1500電子天平 北京賽多利斯公司；分析天平梅特勒-托利多(上海)儀器廠；3Sigma K30 低溫高速離心機(jī)、全貝克自動(dòng)生化分析儀 美國(guó)Sigma公司。

1.2 方法

1.2.1 小鼠血栓塊的溶解率檢測(cè)

使用健康昆明種小鼠80只，依體質(zhì)量隨機(jī)均分為8組，每組10只，雌雄各半。取其中一組小鼠，每只取血1mL，待凝固后，用生理鹽水洗60min后，將血凝塊烘干后稱(chēng)質(zhì)量得m，求算平均m值。另用同法取血漂洗，將凝塊直接置于凍存管中分別加入SY、雙亞酸、合并后低劑量、中劑量和高劑量藥液各2mL，給藥劑量見(jiàn)表1，陽(yáng)性對(duì)照組加入等體積的尿激酶，對(duì)照組加入等體積的生理鹽水。于37℃保溫箱中保溫1、2、4、6、8h后，將凝塊取出，用生理鹽水洗60min后，烘干稱(chēng)質(zhì)量得m1，計(jì)算血凝塊的溶解率。

1.2.2 對(duì)大鼠血漿TXB2、6-Ke-PGF1a、PGE2含量的影響

將60只大鼠隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，每組10 只，自由攝食、飲水2d后，每只大鼠頸靜脈取血，分離血漿，－20℃凍存，第2天，實(shí)驗(yàn)組大鼠按1mL/100g劑量每日灌胃SY、雙亞酸，合并后低、中、高劑量藥液，給藥劑量見(jiàn)表1，每只大鼠按250g計(jì)，折合灌胃劑量為2.5mL/(d·只)，對(duì)照組灌胃等量的生理鹽水。每天灌胃，20d后，每只大鼠頸靜脈取血、抗凝、分離血凍，－20℃凍存。然后，按TXB2、6-Ke-PGF1A、PGE2試劑盒方法測(cè)定各組大鼠血漿TXB2、6-Ke-PGF1A、PGE2的含量。

表1 各給藥組劑量Table 1 Dosages of each experimental groups g

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

2 結(jié)果與分析

2.1 對(duì)小鼠血栓塊溶解率的影響

表2 對(duì)小鼠血栓塊溶解率的影響(±s，n=10)Table 2 Effect of dual sub-acid, safflor yellow and combination on dissolving rate of blood clots in rats (±s，n=10)

表2 對(duì)小鼠血栓塊溶解率的影響(±s，n=10)Table 2 Effect of dual sub-acid, safflor yellow and combination on dissolving rate of blood clots in rats (±s，n=10)

注：*.與對(duì)照組比較，差異較顯著(P＜0.05)；**.與對(duì)照組比較，差異顯著(P＜0.01)；***.與對(duì)照組比較，差異極顯著(P＜0.001)。

組別 給藥劑量 溶解率/%對(duì)照組 2.93±1.66陽(yáng)性對(duì)照組 0.5U/mL 11.87±0.61***SY組 27.6mg/mL 5.94±0.91*雙亞酸組 28mg/mL 6.82±2.95**合并后低劑量組 39mg/mL 8.20±1.33***合并后中劑量組 55.6mg/mL 6.91±1.70**合并后高劑量組 97mg/mL 7.17±1.10***

由表2可見(jiàn)，與對(duì)照組比較，各實(shí)驗(yàn)組血凝塊的溶解率均明顯增加，紅花黃色素與雙亞酸合并后劑量組作用強(qiáng)于紅花黃色素和雙亞酸單一組分，其中合并后低劑量組的溶解率最高，且血凝塊的溶解率不隨劑量的增加而增大。與對(duì)照組比較，尿激酶陽(yáng)性對(duì)照組有顯著的溶解血栓作用。紅花黃色素能抑制血小板聚集，防止血栓形成；亞油酸、α-亞麻酸具有一定抗血栓作用，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，將二者合并使用，抗血栓作用優(yōu)于單用，體現(xiàn)了二者抗血栓作用的共性。合并后低劑量組的血栓塊溶解率最高，提示紅花黃色素軟膠囊中，紅花黃色素的用量有待進(jìn)一步探討。

2.2 對(duì)大鼠血漿TXB2、6-Ke-PGF1a、PGE2含量的影響

表3 對(duì)大鼠血漿TXB2、6-Ke-PGF1a、PGE2含量的影響(±s，n=10)Table 3 Effects of dual sub-acid, safflor yellow and combination on TXB2, 6-Ke-PGF1a and PGE2 in rats( ±s，n=10)

表3 對(duì)大鼠血漿TXB2、6-Ke-PGF1a、PGE2含量的影響(±s，n=10)Table 3 Effects of dual sub-acid, safflor yellow and combination on TXB2, 6-Ke-PGF1a and PGE2 in rats( ±s，n=10)

組別 灌胃劑量/(mg/(kg·d)) TXB2/(pg/mL) PGE2/(pg/mL) 6-Ke-PGF1α/(pg/mL)對(duì)照組 5.42±1.28 28.45±4.74 61.35±9.51 SY 276 4.92±2.07 20.36±3.42** 67.50±8.50雙亞酸 280 5.19±1.42 22.13±2.47** 62.00±17.54合并后低劑量 390 4.89±1.41 28.15±2.17 83.38±10.66***合并后中劑量 556 5.07±2.03 26.98±5.01 76.54±10.91合并后高劑量 970 3.23±1.41* 20.26±3.64*** 69.34±9.03

由表3可見(jiàn)，與對(duì)照組比較，各給藥組均能使TXB2含量下降，其中合并后高劑量組使TXB2含量下降顯著，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；各給藥組均能使PGE2含量下降，其中合并后高劑量組有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.001)；各給藥組均能使6-Ke-PGF1a含量升高，其中合并后低劑量組有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.001)，且合并后各劑量組對(duì)6-Ke-PGF1a含量升高效果優(yōu)于單用紅花黃色素和雙亞酸組。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明紅花黃色素、雙亞酸及合并使用均能降低TXB2和PGE2含量，升高6-Ke-PGF1a含量，從而維持TXA2與前列環(huán)素(PGI2)間平衡，促進(jìn)血管擴(kuò)張，抑制血栓形成。

3 討 論

紅花黃色素、雙亞酸及合并后低、中、高劑量組體外對(duì)小鼠血凝塊均具有較好的溶解作用，且合并后低劑量組作用最佳，無(wú)劑量依賴(lài)關(guān)系。

TXA2和PGI2均為花生四烯酸(AA)的環(huán)加氧酶代謝產(chǎn)物，TXA2具有很強(qiáng)的致血小板聚集作用，而PGI2則具有較強(qiáng)的抗聚集效應(yīng)，二者呈生理拮抗關(guān)系[13]。PGE2能收縮血管，TXB2和6-Ke-PGF1a分別為T(mén)XA2和PGI2的穩(wěn)定代謝產(chǎn)物，其含量高低與TXA2和PGI2量含量一致。TXA2/PGI2比值升高易導(dǎo)致血小板聚集、血栓形成，促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化和冠心病。各給藥組均能降低大鼠血漿TXB2與PGE2的含量；增加6-Ke-PGF1a的含量，其中紅花黃色素與雙亞酸合并后對(duì)PGE2的影響呈明顯的量效關(guān)系，作用強(qiáng)于紅花黃色素和雙亞酸單用，具有抗血小板聚集作用。該結(jié)果提示，紅花黃色素與雙亞酸合并使用能維持TXA2-PGI2間的平衡，促進(jìn)血管擴(kuò)張，抑制血小板聚集從而抑制血栓形成。紅花黃色素與雙亞酸合并后的抗血小板聚集作用可能是抑制內(nèi)源性AA釋放，從而減少TXA2生成所致。PGE2能夠收縮血管，因此它的含量降低可使血栓形成減少。

血管內(nèi)血栓的形成是產(chǎn)生冠心病和腦血栓等心血管疾病的主要原因[14-15]，發(fā)病率呈上升趨勢(shì)，已經(jīng)嚴(yán)重威脅人類(lèi)健康。因此，抗血栓產(chǎn)品的研究已成為當(dāng)今的研究熱點(diǎn)之一。紅花黃色素與雙亞酸合并后制劑的研究能為開(kāi)發(fā)出新的口服制劑——紅花黃色素軟膠囊提供一定的參考。

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