元安顆粒對(duì)慢性心力衰竭大鼠心肌組織黏附分子表達(dá)的影響*

范建民 張 穩(wěn) 唐 瑩 廖若夷 雍蘇南

（湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，湖南 長(zhǎng)沙 410007）

慢性心力衰竭（chronic heart failure，CHF）是指任何原因造成的心肌損傷，使心肌結(jié)構(gòu)和功能發(fā)生改變，導(dǎo)致心室泵血功能降低而引起的臨床綜合征，是各種心臟病的終末階段。一經(jīng)診斷，少有完全恢復(fù)，大多數(shù)呈進(jìn)行性惡化。中醫(yī)藥在防治CHF方面積累了許多寶貴經(jīng)驗(yàn)，特別是在改善癥狀，提高生活質(zhì)量，防止病情反復(fù)方面顯示著良好的療效。本實(shí)驗(yàn)旨在觀察元安顆粒對(duì)CHF大鼠心肌組織黏附分子表達(dá)的影響，探討其可能的作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物 14周齡WKY（Wistar Kyoto）大鼠 60只，體質(zhì)量（213±19.4） g，健康雄性，批號(hào)，SCXK（滬 2010-0003），由上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司提供。

1.2 藥物 元安顆粒（組成：當(dāng)歸、玄參、丹參、金銀花、甘草、毛冬青）由湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院藥劑科制備，批號(hào)：101103；卡托普利片：每片 25 mg，湖南湘雅制藥有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：1009106。

1.3 儀器 SJ-42型多導(dǎo)生理記錄儀，EUB-565A型彩色超聲波診斷儀，BS-600L型高精度電子天平（上海友聲衡器有限公司制造），BTS-20型數(shù)字彩色圖象顯微分析系統(tǒng) （英國(guó)華粵行公司），YH-4型壓力換能器（航天醫(yī)學(xué)工程研究所），KDC-2046型低溫離心機(jī)（中國(guó)科學(xué)技術(shù)大學(xué)科技實(shí)業(yè)總公司，中德光電儀器分公司），AF100 型制冰機(jī)（意大利 SCOTSMAN），D-8 型切割式勻漿器 （德國(guó)ART公司），LKB-Ⅲ型超薄切片機(jī)（廣州市華俊醫(yī)療器械有限公司）。

1.4 分組及造模 采用結(jié)扎大鼠冠狀動(dòng)脈前降支法造成心肌梗死后形成CHF模型。實(shí)驗(yàn)前將60只大鼠常規(guī)喂養(yǎng)1周，然后隨機(jī)分為空白組、模型組、卡托普利組、元安顆粒劑低劑量組、元安顆粒劑中劑量組、元安顆粒劑高劑量組，每組10只，分籠喂養(yǎng)。除空白組外，其余5組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物麻醉后，氣管插管，連接呼吸機(jī)，在左側(cè)2~3肋間開(kāi)胸暴露心臟，挑破心包，于左心耳下2 mm穿線結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈前降支，輕輕擠壓胸腔排出空氣，關(guān)胸。以結(jié)扎后心電圖ST段弓背抬高為造模成功依據(jù)。并于造模前后分別用SJ-42型多導(dǎo)生理記錄儀記錄心電圖、心音圖、心尖搏動(dòng)圖，于手術(shù)6周后用EUB-565A型彩色超聲波診斷儀進(jìn)行心功能檢測(cè)，檢測(cè)每只大鼠造模前后心率（Heart Rate，HR）、心臟射血前期 （PEP）、 左室射血時(shí)間 （left ventricular ejection time，LVET），以射血分?jǐn)?shù)（ejectionfraction，EF）下降到60%以下作為造模成功標(biāo)志。

1.5 給藥方法 元安顆粒高劑量組以人等效量4倍［4×大鼠體表面積/成人平均體表面積（以60 kg換算）×成人每日用量］灌胃；元安顆粒中劑量組以人等效量2倍灌胃；元安顆粒低劑量組以人等效量1倍灌胃；卡托普利片成人每日用量為25 mg，以人等效量4倍灌胃。以上藥物用蒸餾水溶解稀釋為2 mL/只灌胃，每日1次，連續(xù)4周?？瞻捉M及模型組均以2 mL蒸餾水灌胃，每日1次，連灌4周。

1.6 標(biāo)本采集與檢測(cè)

1.6.1 組織學(xué)觀察 觀察造模成功后心肌梗死程度，取全層心肌經(jīng)甲醛固定、包埋、切片、HE染色，光學(xué)顯微鏡下觀察，由專(zhuān)業(yè)病理學(xué)醫(yī)師進(jìn)行鑒定。

1.6.2 ELISA法檢測(cè)血清中心肌組織黏附分子表達(dá)治療4周后，從所有存活的WKY大鼠腹主動(dòng)脈采血1 mL，經(jīng)3500 r/min低溫離心機(jī)離心10 min，取上清液采用ELISA法檢測(cè)血清中心肌組織黏附分子［細(xì)胞黏附分子（ICAM-1）、血管黏附分子（VCAM-1），P-選擇素（P-selectin）］表達(dá)的情況，試劑盒購(gòu)自?shī)W地利Blender Med System提供。

2 結(jié) 果

2.1 組織學(xué)變化 見(jiàn)圖1。光鏡下觀察結(jié)扎WKY大鼠冠狀動(dòng)脈前降支法造成心肌梗死后，心肌缺血45 min后可見(jiàn)心肌組織水腫，組織疏松，間隙加寬，多數(shù)心肌細(xì)胞核正常，胞質(zhì)染色均勻，可見(jiàn)少量細(xì)胞核固縮，心肌纖維排列失去正常結(jié)構(gòu)，呈明顯的波浪狀，符合心梗早期病理變化，認(rèn)為造模成功，可形成CHF模型。

圖1 模型組大鼠心肌病理改變

2.2 元安顆粒對(duì)CHF大鼠造模前后心肌組織黏附分子表達(dá)的影響 見(jiàn)表1。與模型組比較，元安顆粒低、中、高劑量組及卡托普利組心肌組織黏附分子（ICAM-1，VCAM-1，P-selectin）表達(dá)均有不同程度降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），其中元安顆粒高劑量組療效顯著（P＜0.01）。結(jié)果表明，心肌細(xì)胞黏附分子（ICAM-1，VCAM-1，P-selectin）在冠狀動(dòng)脈硬化及斑塊破裂中的作用已越來(lái)越顯著。在細(xì)胞因子的作用下，內(nèi)皮細(xì)胞、白細(xì)胞等ICAM-1、VCAM-1，P-selectin的表達(dá)明顯增加，可促進(jìn)單核細(xì)胞進(jìn)入內(nèi)皮下成為巨噬細(xì)胞進(jìn)而轉(zhuǎn)變?yōu)榕菽?xì)胞，與心肌損傷直接相關(guān)。

表1 給藥前后各組CHF大鼠ICAM-1、VCAM-1、P-selectin比較

表1 給藥前后各組CHF大鼠ICAM-1、VCAM-1、P-selectin比較

與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。

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3 討 論

中醫(yī)學(xué)對(duì)心衰病因的認(rèn)識(shí)，多為感受外邪、勞損久病、情志內(nèi)傷、先天不足。其病理基礎(chǔ)為心氣不足，與肺、脾、腎關(guān)系密切。心衰病機(jī)主要有心脈痹阻、心陽(yáng)不足、水飲凌心?！端貑?wèn)·逆調(diào)論》所描述心功不全的種種表現(xiàn)，與美國(guó)紐約心臟學(xué)會(huì)（NYHA）心功能分級(jí)極為相似。中醫(yī)對(duì)胸痹辨證分型的研究較多，所分證型種類(lèi)不盡相同。1985年全國(guó)冠心病辨證論治研究座談會(huì)制定了《冠心病心絞痛中醫(yī)辨證試行標(biāo)準(zhǔn)》，其辨證分為本虛標(biāo)實(shí)兩大類(lèi)，分兩類(lèi)13證［1］。1992年《中藥新藥治療胸痹（冠心病心絞痛）的臨床研究指導(dǎo)原則》分為心血瘀阻、痰濁壅塞、陰寒凝滯、心腎陰虛、氣陰兩虛、陽(yáng)氣虛衰共6證。王永炎［2］對(duì)其辨證分兩類(lèi)7型。郭志華［3］認(rèn)為冠心病心絞痛臨床常見(jiàn)證型為心血瘀阻、寒凝心脈、氣陰兩虛、心陽(yáng)不振、痰濁阻塞、氣滯心胸6種。2002年《中藥新藥治療充血性心力衰竭的臨床研究指導(dǎo)原則》［4］分為心血瘀阻、氣虛血瘀、氣滯血瘀、痰阻心脈、陰寒凝滯、氣陰兩虛、心腎陰虛、陽(yáng)氣虛衰8種。因此本方從熱毒血瘀著手，方中當(dāng)歸甘溫而潤(rùn)，辛香善行，既可補(bǔ)血，又可活血；玄參甘、苦、咸，清熱涼血、瀉火解毒；兩者共為君藥。丹參“專(zhuān)入血分，其功在于活血行血，內(nèi)之能達(dá)臟腑而化瘀滯”；毛冬青活血祛瘀，清熱解毒，共為臣藥。金銀花甘寒清香，“養(yǎng)血止渴通絡(luò)”，清熱解毒為佐。甘草甘平，調(diào)和諸藥為使。諸藥相伍，共奏活血化瘀、清熱解毒之功，喜獲良效。

［1］ 張伯臾.中醫(yī)內(nèi)科學(xué)［M］.3版.上海：上海科學(xué)技術(shù)出版社，1985：755-757.

［2］ 王永炎.中醫(yī)內(nèi)科學(xué)［M］.5版.上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，2002：108.

［3］ 郭志華.冠心病心絞痛2432例中醫(yī)辨證分型綜合統(tǒng)計(jì)分析［J］.湖南中醫(yī)雜志，1998，14 （2）：7-8.

［4］ 國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局.中藥新藥治療充血性心力衰竭的臨床研究指導(dǎo)原則［M］.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2002：68-73.