鱗癌患者外周血淋巴細胞亞群變化與放療療效相關性的研究

董 方，高力英，薛金才，田曉剛，冉俊濤，李益民，胡永果，蘇 群

（1.甘肅省腫瘤醫(yī)院，甘肅 蘭州 730050；2.甘肅省人民醫(yī)院，甘肅 蘭州 730000）

鱗癌患者外周血淋巴細胞亞群變化與放療療效相關性的研究

董 方1，高力英1，薛金才1，田曉剛1，冉俊濤1，李益民1，胡永果2，蘇 群1

（1.甘肅省腫瘤醫(yī)院，甘肅 蘭州 730050；2.甘肅省人民醫(yī)院，甘肅 蘭州 730000）

目的探討中分化鱗癌患者放療前、中、后外周血淋巴細胞亞群各指標變化與放療療效的相關性。方法應用FACSont流式細胞儀對61例中分化鱗癌患者外周血淋巴細胞亞群進行檢測，分別于放療前、中、后測定每位患者淋巴細胞亞群指標一次，并對檢測結果進行比較。采用實體瘤療效評價標準（RECIST）評價療效。結果中分化鱗癌患者放療前與放療中：CD3+、B 淋巴細胞差異有顯著性（P＜0.05）。放療前與放療后：CD3+、CD8+、CD4+、B 淋巴細胞、CD4+/CD8+水平差異有顯著性（P＜0.05）。放療中與放療后：CD8+、CD4+、B 淋巴細胞、CD4+/CD8+水平差異有顯著性（P＜0.05）。治療過程有差異組差值與放療中療效相關性分析：B淋巴細胞放療前后差值與放療中療效呈負相關（r=-0.343，P=0.007），CD8+放療前后差值與放療中療效呈正相關（r=0.331，P=0.009），其余組差值與放療療效相關性無顯著性差異（P＞0.05）。治療過程有差異組差值與放療后療效相關性無顯著性差異（P＞0.05）。結論中分化鱗癌患者在放療前、中、后，外周血淋巴細胞亞群的變化提示患者的細胞免疫及體液免疫功能不同程度紊亂，B淋巴細胞及CD8+細胞與患者放療中期療效具有相關性，放療對免疫功能的影響、免疫功能與放療遠期療效的相關性還有待進一步研究探討。

鱗癌；淋巴細胞亞群；放療

機體免疫功能降低是導致惡性腫瘤發(fā)生發(fā)展的重要因素，淋巴細胞亞群是構成機體免疫防御系統(tǒng)的重要組成部分。放療在殺傷腫瘤細胞的同時，也抑制免疫活性細胞。我院于2008年1月至2011年12月，通過檢測61例中分化鱗癌患者放療前、中、后淋巴細胞亞群指標變化，探討放療過程中機體免疫功能的狀態(tài)，為改善機體免疫功能提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 研究對象

入選研究對象為2008年1月至2011年12月我院首診中分化鱗癌患者61人。男性32例，女性29例，年齡7～72歲，中位年齡51歲。病種：頭頸部腫瘤23例，其中鼻咽癌4例，喉癌9例，口咽癌4例，鼻腔副鼻竇癌6例；胸部腫瘤19例，其中食管癌12例，肺癌7例；腹部腫瘤19例，均為宮頸癌。臨床分期根據(jù)UICC 2002分期標準，Ⅰ期7例，Ⅱ期18例，Ⅲ期26例，Ⅳ期10例。

1.2 入組標準

（1）我院首診病理檢查證實的頭、胸、腹部中分化鱗癌患者；（2）無腦、心、肝、腎等器質性病變；（3）無紅斑狼瘡、類風濕性關節(jié)炎、銀屑病等自身免疫性疾病病史；（4）無器官移植病史；（5）入院后血常規(guī)、血生化、病毒全套及心電圖檢測未見異常；（6）胸部正側位片、B 超、ECT 檢查排除遠處轉移；（7）卡氏評分在70分以上；（8）治療結束后可隨訪6個月。

1.3 排除標準

（1）入院前3個月內用過中草藥或生物反應調節(jié)劑等影響免疫功能者；（2）合并嚴重感染或出血傾向者；（3）治療前發(fā)現(xiàn)有肝、肺、骨、腦等遠處轉移者；（4）治療中免疫力低下，合并病毒感染或出現(xiàn)嚴重并發(fā)癥者；（5）治療中使用免疫增強劑者。

1.4 治療方法

放療技術采用直線加速器三維適形放療，其中頭頸部及胸部腫瘤原發(fā)病灶區(qū)及陽性淋巴結轉移區(qū)予以DT：64～70 Gy/32～35次，可疑陽性淋巴結引流區(qū)予以60～66 Gy/30～33次，預防性淋巴結引流區(qū)予以50 Gy/25次，均采用常規(guī)分割：2.0 Gy/次，5次/周。19例腹部腫瘤采用三維適形全盆腔外照射46 Gy加腔內近距離照射30～42 Gy，6 Gy/次，1次/周。Ⅰ期采用單純放療，Ⅱ～Ⅳ期采用放療后續(xù)貫配合全身化療，化療采用順鉑（30mg/m2/d）×d 1～3+5-氟尿嘧啶（500mg/m2/d）×d 1～5，放療結束后即開始全身化療。

1.5 療效評價方法

采用實體瘤評價標準（RECIST）評價療效。（1）目標病灶的評價：CR：所有目標病灶消失；PR：基線病灶長徑總和縮小≥30%；PD：基線病灶長徑總和增加≥20%或出現(xiàn)新病灶；SD：基線病灶長徑總和有縮小但未達PR或有增加但未達到PD。（2）非目標病灶的評價：CR：所有非目標病灶消失和腫瘤標志物水平正常；SD：一個或多個非目標病灶和/或腫瘤標志物高于正常持續(xù)存在；PD：出現(xiàn)一個或多個新病灶或/和存在非目標病灶進展。

1.6 淋巴細胞亞群檢測方法

1.6.1 實驗材料 美國BD公司的4色熒光標記抗人CD分子單克隆抗體，美國BD公司FACSont流式細胞儀。

1.6.2 檢測方法 于放療前、放療第三周、放療第七周（放療結束后）取患者空腹狀態(tài)下外周血2 m l，肝素抗凝；50μl血液與20μl抗體混勻，室溫避光15～20分鐘，加入450μl溶血素，室溫避光反應15～20分鐘，以隨機軟件分析測定值。

1.7 統(tǒng)計學方法

2 結果（見表1）

表1 外周血淋巴細胞亞群放療前、中、后變化（±s，%）

表1 外周血淋巴細胞亞群放療前、中、后變化（±s，%）

項目 放療前 放療中 放療后CD3+CD8+CD4+NK細胞B淋巴細胞CD4+/CD8+70.15±8.79 30.38±1.23 36.21±9.24 18.02±9.11 9.34±4.57 1.41±0.80 72.31±10.17 31.16±10.71 35.82±10.55 18.66±9.89 5.89±4.66 1.42±0.96 73.36±10.61 34.89±12.56 32.33±12.17 18.00±10.42 4.95±4.42 1.16±0.89

（1）比較61例鱗癌患者放療前、中、后淋巴細胞亞群變化情況，放療前與放療中：CD3+、B淋巴細胞差異有顯著性（P＜0.05）、CD8+、CD4+、NK 細胞、CD4+/CD8+水平差異無顯著性（P＞0.05）。放療前與放療后：CD3+、CD8+、CD4+、B 淋巴細胞、CD4+/CD8+水平差異有顯著性（P＜0.05），NK 細胞差異無顯著性（P＞0.05）。放療中與放療后：CD8+、CD4+、B 淋巴細胞、CD4+/CD8+水平差異有顯著性（P＜0.05），CD3+、NK 細胞差異無顯著性（P＞0.05）（見表 2）。

表2 鱗癌患者外周血淋巴細胞亞群放療前、中、后組間比較分析

（2）治療過程有差異組差值與放療中療效相關性分析：B淋巴細胞放療前后差值與放療中療效呈負相關（r=-0.343，P=0.007），CD8+放療前后差值與放療中療效呈正相關（r=0.331，P=0.009），其余組差值與療效相關性無顯著性差異（P＞0.05）（見表 3）。

表3 外周血淋巴細胞亞群有差異組差值與放療中療效相關性分析

（3）治療過程有差異組差值與放療后療效相關性分析：各組差值與放療后療效均無顯著性差異（P＞0.05）（見表4）。

表4 外周血淋巴細胞亞群有差異組差值與放療后療效相關性分析

3 討論

機體免疫功能低下或受抑制時腫瘤的發(fā)生率增高，腫瘤進行性生長時患者的免疫功能往往受抑制，兩者有著互為因果的關系。抗腫瘤免疫反應主要是細胞免疫反應，其中，T淋巴細胞亞群是機體免疫系統(tǒng)中重要的細胞群，它表達一些表面抗原、標志物和受體，并具有多種效應和免疫調節(jié)功能。當不同的淋巴細胞亞群的數(shù)量和功能發(fā)生異常時，可導致機體免疫功能紊亂并發(fā)生一系列病理變化[1]。

T淋巴細胞亞群對機體免疫功能的穩(wěn)定起著重要的調節(jié)作用，尤其是輔助性T細胞（Th）和抑制性T細胞（Ts）之間的相互協(xié)調與制約，產(chǎn)生適度的免疫應答，使之既能清除異物抗原，又不至于損傷自身組織。T淋巴細胞表型異常是反映自身免疫性疾病患者免疫調節(jié)功能紊亂的重要指標[2]。T淋巴細胞亞群中，CD8+細胞根據(jù)生物學功能可分為細胞毒性T淋巴細胞（CTL）和抑制性T細胞（TS）。CTL主要發(fā)揮細胞毒性作用，TS的功能是抑制免疫應答的活化階段，同時也能抑制B淋巴細胞產(chǎn)生抗體、抑制細胞毒性T細胞亞群的殺傷能力。

多數(shù)文獻[3，4]認為，腫瘤形成發(fā)展過程中，產(chǎn)生或分泌可溶性因子，可誘導CD8+淋巴細胞的產(chǎn)生、阻止CD4+淋巴細胞的形成和成熟，使CD4+淋巴細胞下降，CD8+淋巴細胞升高。目前多數(shù)學者[5～8]認為，大部分腫瘤細胞的加速再增殖時間可能開始于放療后3～4周。加速再增殖是常規(guī)分割放療局部失敗的主要原因之一，已有多篇鼻咽癌、食管癌、宮頸癌等后程加速超分割治療療效分析的報道。本研究選擇觀察61例來源于黏膜上皮細胞的中分化鱗癌患者，考慮到他們有大致相同的腫瘤發(fā)生來源和相近的腫瘤生物學行為，放療都是主要的治療手段之一。本研究觀察61例中分化鱗癌患者在放療前與放療后、放療中與放療后患者外周血T淋巴細胞亞群中CD8+、CD4+、CD4+/CD8+均具有顯著性差異，提示在放療后半程中患者機體免疫功能紊亂更加顯著，同時存在腫瘤加速增殖的可能。因此，我們認為這是從機體免疫機制的角度為鱗癌患者后程加速超分割放射治療提供了臨床免疫學檢測依據(jù)。要提高腫瘤的局控率，就必須追加一定的劑量以殺死再增殖形成的腫瘤細胞，在機體免疫功能紊亂的狀態(tài)下，應該在調節(jié)免疫功能的前提下追加放療劑量才能達到更好的腫瘤控制效果。

另外，本研究61例鱗癌患者外周血淋巴細胞亞群在放療過程存在B細胞下降趨勢，CD8+細胞呈升高趨勢，CD4+、CD4+/CD8+呈下降趨勢的表現(xiàn)與文獻報道[9，10]符合。

體液免疫B淋巴細胞是體內可以產(chǎn)生免疫球蛋白分子抗體的細胞，在腫瘤抗原刺激下，B淋巴細胞增殖分化形成漿細胞，而漿細胞分泌免疫抗體（Ig）并通過與K細胞、NK細胞、巨噬細胞或補體的協(xié)同作用發(fā)揮殺傷腫瘤細胞的作用。

本研究顯示，在放療前與放療中、放療中與放療后、放療前與放療后的3組對比中B淋巴細胞均有顯著性差異。提示在中分化鱗癌患者中存在明顯的體液免疫功能紊亂。在3組外周血NK細胞亞群的檢測中，NK細胞的變化并無顯著性差異。由于B淋巴細胞介導的體液免疫與體液內很多因素相關，常常需要通過和其他細胞或體液因子協(xié)同而發(fā)揮作用，目前本組數(shù)據(jù)還不能說明B淋巴細胞變化與鱗癌放療療效的關系，有待于更廣泛的多因素基礎和臨床研究。

綜合本研究我們認為：中分化鱗癌患者在放療過程中存在免疫功能異常，這種異常與患者細胞免疫及體液免疫異常反應有關，放療對患者淋巴細胞亞群的影響明顯且持久[11]，無論是T淋巴細胞還是B淋巴細胞介導的免疫功能都有所變化，在放療后期T淋巴細胞功能的降低及鱗癌細胞在放療后期的再增殖使我們重新認識到鱗癌患者后程加速超分割放療或在常規(guī)分割放療時追加劑量的必要性。在采用特殊分割方式及追加劑量時要同時應用免疫調節(jié)藥物，使治療發(fā)揮更好的效果。本研究提示，在合理制訂鱗癌患者的治療方案前及治療中全面了解患者的免疫狀態(tài)，對指導臨床治療、判斷預后具有重要意義。

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R730.261

A

1671-1246（2013）09-0143-03

甘肅省技術研究與開發(fā)專項計劃經(jīng)費資助“外周血T細胞亞群檢測與惡性腫瘤放射敏感性的初步研究”（0912TCYA008）