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    羚羊角藥理研究概況

    2013-02-01 23:16:20張龍霏胡晶紅張永清
    中國醫(yī)藥導(dǎo)報(bào) 2013年28期
    關(guān)鍵詞:小鼠實(shí)驗(yàn)研究

    張龍霏 胡晶紅 張永清

    山東中醫(yī)藥大學(xué),山東濟(jì)南 250355

    羚羊角始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》,為??苿?dòng)物賽加羚羊Saiga tatarica Linnaeus的角,屬于名貴中藥材,其性寒,味咸,歸肝、心經(jīng),具有平肝熄風(fēng)、清肝明目、散血解毒等功效,主治肝風(fēng)內(nèi)動(dòng)、驚癇抽搐、妊娠子癇、高熱痙厥、癲癇發(fā)狂、頭痛眩暈、目赤翳障、溫毒發(fā)斑、癰腫瘡毒等癥[1]。因賽加羚羊主要分布于中亞地區(qū),在蘇聯(lián)時(shí)期曾得到合理飼養(yǎng)與管理,資源較為豐富,但此合理管理計(jì)劃在蘇聯(lián)解體后被迫崩潰,偷獵和過度捕獵泛濫,致使其數(shù)量銳減到不足原數(shù)量的5%,賽加羚羊已被世界自然保護(hù)聯(lián)盟(IUCN)列入了世界瀕危動(dòng)物紅色名錄[2-3]。在資源不斷減少、供不應(yīng)求的情況下,有關(guān)羚羊角及其代用品的研究報(bào)道日益增多[4-5]。本文僅對羚羊角藥理研究情況進(jìn)行了較為系統(tǒng)的歸納與總結(jié),供參考。

    1 神經(jīng)系統(tǒng)作用

    1.1 鎮(zhèn)靜催眠

    羚羊角散對小鼠自主活動(dòng)有明顯抑制作用,對戊巴比妥鈉催眠有協(xié)同作用,能使小鼠戊巴比妥鈉睡眠潛伏期顯著縮短,睡眠時(shí)間明顯延長,提示羚羊角具有中樞鎮(zhèn)靜與催眠作用[6]。復(fù)方羚羊角膠囊有明顯縮短戊巴比妥鈉(50 mg/kg)小鼠入睡潛伏期和延長睡眠時(shí)間的作用[7]。給小鼠腹腔注射羚羊角醇提取液10 g/kg、水煎劑2 g/kg、水解液80 mg/kg,均能延長硫噴妥鈉的睡眠時(shí)間,小鼠腹腔注射羚羊角注射液80 mg/kg,亦能延長戊巴比妥鈉的睡眠時(shí)間。羚羊清熱液可降低苯丙胺所致興奮小鼠的自主活動(dòng),與對照相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[8]。昆明小鼠提前禁食12 h,口腔給羚羊角口服液40 min后放入自主活動(dòng)測定儀,適應(yīng)后記錄小鼠10 min內(nèi)活動(dòng)次數(shù),發(fā)現(xiàn)羚羊角口服液各組與對照相比小鼠活動(dòng)次數(shù)均減少,并對閾下催眠劑量戊巴比妥鈉有協(xié)同作用,明顯縮短催眠劑量異戊巴比妥鈉引起的小鼠睡眠潛伏期,延長小鼠睡眠時(shí)間[9]。羚羊角、藏羚羊角超細(xì)粉對小鼠也有一定鎮(zhèn)靜作用及協(xié)同戊巴比妥催眠作用[10]。

    1.2 抗驚厥

    給小白鼠腹腔注射4 g/mL羚羊角水煎液,注射戊四氨致驚,結(jié)果腹腔注射羚羊角水煎液組能延緩驚厥發(fā)生時(shí)間[11]。羚羊角口服液800 mg/kg抗戊四氮引起的小鼠驚厥及電驚厥作用明顯[12]。有人以小鼠驚厥潛伏期為指標(biāo),以戊四氮致驚得到小鼠驚厥模型,發(fā)現(xiàn)羚羊角沖劑能明顯延長模型小鼠的驚厥潛伏期,并與空白對照存在顯著差異[13]。各劑量羚羊角口服液對戊四氮所致小鼠驚厥模型的改善作用相似,高劑量羚羊角口服液對由藥理生理多用儀造成的小鼠單次電驚厥有明顯抑制作用[8]。腹腔注射羚羊角水煎液時(shí),也有減少戊四氮所致的小白鼠陣攣性驚厥作用[14]。羚羊角顆粒配合美林的解熱抗驚厥效果也較顯著[15]。

    1.3 鎮(zhèn)痛

    熱板法和扭體法鎮(zhèn)痛試驗(yàn)結(jié)果顯示,羚羊角超細(xì)粉組在給藥2 h時(shí)痛閾值較對照顯著延長,腹腔注射冰醋酸小鼠扭體只數(shù)與次數(shù)較對照顯著減少,同劑量超細(xì)粉組效果優(yōu)于粗粉組[16]。腦內(nèi)5-羥色胺(5-HT)、5-羥吲哚乙酸 (5-HTAA)和血漿內(nèi)前列腺素 E2(PGE2)含量與偏頭痛息息相關(guān),皮下注射利血平造成小鼠偏頭痛模型,分別連續(xù)給藥復(fù)方羚羊角膠囊10 d和15 d,測定小鼠腦內(nèi)勻漿5-HT、5-HIAA和血漿PGE2含量,結(jié)果復(fù)方羚羊角膠囊對偏頭痛模型小鼠有調(diào)節(jié)5-HT過度降低,使5-HTAA含量升高,調(diào)節(jié)血漿PGE2等作用,提示復(fù)方羚羊角膠囊有緩解偏頭痛、減輕疼痛的作用[7]。

    1.4 抗癲癇

    在公認(rèn)的自然形成的遺傳性京都震顫大鼠模型的海馬和皮質(zhì)安插電極,觀察其腦電波變化并研究大腦海馬部位神經(jīng)肽Y的表達(dá)情況,發(fā)現(xiàn)各劑量羚羊角方劑均能明顯抑制震顫大鼠每次電線小發(fā)作平均時(shí)間及15 min內(nèi)癲癇小發(fā)作總持續(xù)時(shí)間,具有明顯抗癲癇小發(fā)作作用,且抗癲癇作用隨給藥量的增加而增強(qiáng),提示羚羊角方劑可成為治療癲癇的手段[17]。

    除上述外,羚羊角還有解痙、修復(fù)受傷聽神經(jīng)細(xì)胞等作用。取體重相仿家兔數(shù)只,用木錘擊斃,立即剖腹取十二指腸及回腸,固定在30℃恒溫臺(tái)式Tyrode液水浴中并通入空氣泡后,加入羚羊角注射液,觀察發(fā)現(xiàn)低濃度藥物對腸管有明顯的緊張性增加及部分收縮振幅同時(shí)增加,而高濃度藥物可使收縮曲線下降,振幅減小等[18]。柴羚通竅膠囊能使多數(shù)患者耳鳴消失,聽力提高,其相關(guān)理論及機(jī)制可能與改善內(nèi)耳傳導(dǎo)和微循環(huán)障礙,修復(fù)受傷的聽神經(jīng)及聽神經(jīng)細(xì)胞,加速聽神經(jīng)細(xì)胞再生,恢復(fù)聽神經(jīng)細(xì)胞功能有關(guān)[19]。采用羚羊配伍他藥加減治療中風(fēng)及其后遺癥收到良好療效[20-21]。

    2 抗炎、解熱與抗病原微生物作用

    2.1 抗炎

    小鼠灌胃給予以羚羊角為主要成分的解熱抗炎沖劑,發(fā)現(xiàn)可顯著抑制二甲苯所致小鼠耳殼腫脹,并且對蛋清所致大鼠足腫脹也有明顯抑制作用[22]。Wistar大鼠以羚羊清肺丸藥粉灌胃后祛除脊柱右背側(cè)毛,皮內(nèi)注射磷酸組織胺,舌靜脈注射依文藍(lán),15 min后斷頭處死,撥開背部皮膚測定皮內(nèi)著色面積,并切碎皮膚浸泡離心,取上清液測定吸光度,結(jié)果服用羚羊清肺丸大鼠皮內(nèi)斑面積及皮內(nèi)藍(lán)斑色素浸出液吸光度均有減小,提示其具有抗炎作用[23]。

    2.2 解熱

    給發(fā)熱家兔分別靜注羚羊角水煎劑和醇提液各2 g/kg,水解液 40 mg/kg,注射液 800 mg/kg,均有明顯的解熱作用[24]。給人工發(fā)熱兔灌服羚羊角煎劑4 g/kg,給藥后2 h體溫下降,6 h后體溫逐漸恢復(fù)正常[25]。以羚羊角超細(xì)粉和粗粉灌胃預(yù)防給藥后,于背部皮下注射2,4-二硝基苯酚引起大鼠高熱模型,超細(xì)粉組在注射1 h后即較對照組顯示出顯著解熱作用,作用時(shí)間持續(xù)達(dá)3 h,且高劑量組大鼠體溫一直保持在正常水平內(nèi);粗粉組在較晚時(shí)間中也表現(xiàn)出良好的解熱作用[26]。給酵母致熱家兔灌服羚羊角煎劑6 g/kg,給藥后1 h即有解熱效果,并持續(xù)4.5 h[27]。應(yīng)用傷寒、副傷寒三聯(lián)疫苗致家兔發(fā)熱,同時(shí)灌服羚羊角煎劑2 g/kg,給藥組家兔體溫明顯比空白對照組低[28]。研究顯示,羚羊角塞的水溶性蛋白質(zhì)成分對家兔具有明顯的解熱作用(P<0.05),能明顯減少酒石酸銻鉀引起的小鼠扭體次數(shù)(P<0.01)和明顯提高小鼠痛閾值(給藥后20、30 min,P<0.01),說明羚羊角塞水溶性蛋白質(zhì)成分具有解熱、鎮(zhèn)驚和鎮(zhèn)痛作用[29]。以羚羊角沖劑和羚羊角粉煎劑分別對由傷寒、副傷寒二聯(lián)菌苗和傷寒、副傷寒甲乙三聯(lián)疫苗作為致熱原引起的家兔發(fā)熱模型進(jìn)行灌胃給藥,前者顯示各給藥劑量組與空白對照組均存在顯著性差異,后者實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)給藥后2~6 h,各實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體溫開始下降并恢復(fù)到正常水平[30-31]。羚羊角水溶液對由耳靜脈注射傷寒Vi多糖菌苗引起的高熱亦有顯著作用[32]。另有研究發(fā)現(xiàn),分別取含羚羊角和不含羚羊角的羚珠散、紫雪散治療因酵母引起的大鼠高熱,結(jié)果含羚羊角的原復(fù)方解熱效果更好[33]。

    2.3 抗病原微生物

    常規(guī)環(huán)杯法檢測復(fù)方羚羊角注射液對金黃色葡萄球菌、白色葡萄球菌、大腸桿菌及枯草桿菌的結(jié)果顯示,復(fù)方羚羊角注射液對4種菌均有明顯抑制作用[34]。以腺病毒 (AdV-1、3型) 感染 Hep-2細(xì)胞達(dá)到100TCID50時(shí),用治療、預(yù)防及管外給藥等方式進(jìn)行抑病毒試驗(yàn),結(jié)果復(fù)方羚羊角注射液在多種給藥方式下與病毒組差異均有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P<0.01),且預(yù)防給藥效果最好[35]。以相同實(shí)驗(yàn)方法比較了羚羊清肺液與丸劑抗病毒作用,發(fā)現(xiàn)兩種制劑同劑量組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[36]。用復(fù)方羚羊角注射液進(jìn)行體外抗病毒活性檢測、抑菌及免疫試驗(yàn)發(fā)現(xiàn),其具有抗病毒、抑菌及促免疫功能[37]。將實(shí)驗(yàn)小鼠在乙醚下淺麻醉,通過滴鼻方式給其感染流感病毒肺炎適應(yīng)株FM15LD50,感染當(dāng)日開始連續(xù)4 d以羚羊角口服液灌胃,處死后以肺重除以體重作為肺指數(shù),結(jié)果羚羊角口服液對流感病毒導(dǎo)致的肺炎有明顯抑制作用[38]。

    3 血液系統(tǒng)作用

    3.1 抗血栓

    以麝香抗栓片給大鼠口服給藥連續(xù)10 d,末次給藥后麻醉,分離左頸總動(dòng)脈,采用電刺激法記錄血栓形成時(shí)間,并測定其對小鼠凝血時(shí)間的影響,結(jié)果麝香抗栓片可明顯延長大鼠血栓形成和凝血時(shí)間。另有實(shí)驗(yàn)證實(shí),麝香抗栓片對實(shí)驗(yàn)性高脂血癥模型小鼠的血清三酰甘油有明顯降低作用,對高密度脂蛋白有明顯升高作用[39]。

    3.2 改變血管通透性

    以羚羊清熱液連續(xù)灌胃給藥小鼠5 d,末次給藥后尾靜脈注射伊文思藍(lán),且腹腔注射醋酸后處死,取腹腔液離心取上清測定光密度值,發(fā)現(xiàn)羚羊清熱液組小鼠腹腔洗液伊文思藍(lán)濃度明顯降低,提示其可明顯抑制醋酸引起的小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性異常升高[40]。

    3.3 對血液流變學(xué)作用

    以復(fù)方羚羊角膠囊連續(xù)灌胃大鼠7 d后,皮下注射腎上腺素(Adr)2次,兩次注射之間將大鼠浸入冰水5 min,造成大鼠急性血瘀模型,處死取動(dòng)脈血,以全自動(dòng)血流變快測儀測血液流變學(xué)各項(xiàng)指標(biāo),發(fā)現(xiàn)復(fù)方羚羊角膠囊有改善急性血瘀模型大鼠血液流變學(xué)的作用[7]。羚蝎膠囊能降低實(shí)驗(yàn)性腦出血大鼠的腦含水量,促進(jìn)血腫吸收,減輕神經(jīng)細(xì)胞損傷等[41]。

    3.4 抗高血壓

    羚羊角50%煎劑2 mL/kg靜注,使麻醉貓血壓下降;切斷兩側(cè)迷走神經(jīng)后,降壓作用有所下降,說明降壓作用可能與中樞神經(jīng)有關(guān)[42]。將SD大鼠麻醉后分離頸動(dòng)脈并插入聚乙烯導(dǎo)管,測定并記錄Ⅰ導(dǎo)聯(lián)心電圖,穩(wěn)定后靜脈注射羚羊角提取液,發(fā)現(xiàn)大鼠血壓明顯下降[6]。

    4 其他藥理作用

    4.1 鎮(zhèn)咳祛痰

    以28%氨水造成小鼠咳嗽并記錄引咳潛伏期,以羚羊清肺丸灌胃給藥后重復(fù)上述實(shí)驗(yàn),結(jié)果羚羊清肺丸組可延長小鼠氨水引咳潛伏期并減少咳嗽次數(shù),在小鼠器官酚紅排泌量實(shí)驗(yàn)中也得到相似結(jié)果[43]。

    4.2 對平滑肌作用

    羚羊角水煎液對動(dòng)物平滑肌也有一定作用,比如對離體家兔十二指腸有興奮作用,對離體豚鼠回腸有興奮作用,且收縮強(qiáng)度與劑量呈正相關(guān),對乙烯雌酚處理的子宮有明顯興奮作用等[44]。另有實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),以羚羊角為主要成分的牛珀至寶丹對由粗制大腸桿菌內(nèi)毒素(LPS)造成的大鼠內(nèi)毒素休克有一定治療作用[45]。

    4.3 增強(qiáng)免疫

    機(jī)體受到大劑量輻射后,在造血障礙的同時(shí)將發(fā)生嚴(yán)重的免疫功能低下,表現(xiàn)為免疫活性細(xì)胞數(shù)量減少,抗體形成抑制或紊亂等,T淋巴細(xì)胞作為體內(nèi)最重要的免疫活性細(xì)胞之一,對輻射相當(dāng)敏感,于是采取X射線治療機(jī)照射小鼠造成小鼠免疫低下模型。照射前3 d給予羚羊角等中藥溶液灌胃,照射后檢測T淋巴細(xì)胞CD4、CD8亞群的變化情況,發(fā)現(xiàn)以羚羊角等為主要成分的養(yǎng)陰抗毒散只對CD4亞群具有保護(hù)作用[46]。取免疫缺陷的BALB/C小鼠,先以復(fù)方羚羊角注射液注射8 d,再用綿羊紅細(xì)胞(SRBC)處理4 d,檢測小鼠脾細(xì)胞中Ea花環(huán)的形成細(xì)胞、淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化、抗體細(xì)胞生成等指標(biāo),顯示有增強(qiáng)Ea花環(huán)形成的作用,并能增強(qiáng)T/B淋巴細(xì)胞的功能。以多克隆刺激劑佛波醇酯(PDB)和離子霉素(lono)刺激活化JurkatE6-1 T淋巴細(xì)胞株,體外模擬銀屑病的關(guān)鍵病理環(huán)節(jié),將羚羊角粉等制備成含藥血清并作用于活化的T淋巴細(xì)胞,以CCK-8比色法等檢測各指標(biāo),發(fā)現(xiàn)含藥血清可顯著降低活化的T淋巴細(xì)胞活性,明顯抑制細(xì)胞表面活化分子CD69的表達(dá),并有效下調(diào)干擾素-1、白介素-2、腫瘤壞死因子-α的分泌[47]。

    5 毒性

    分別以成人口服劑量的400倍和125倍給實(shí)驗(yàn)小鼠灌胃和腹腔注射羚羊角口服液40 g/(kg·d)、5 g/(kg·次),連續(xù)觀察 7 d,發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)小鼠體重普遍增加,毛有光澤,無死亡,認(rèn)為急性毒性甚低[48]。分別將羚羊角塞粉與標(biāo)準(zhǔn)飼料按照9%和0.38%比例混勻制成高、低劑量含藥飼料,選取健康大鼠每日定時(shí)給予含藥飼料連續(xù)14 d,每日觀察動(dòng)物狀態(tài),每周測量體重,給藥14 d時(shí)各組均取一半實(shí)驗(yàn)動(dòng)物處死,取各臟器檢測并做病理切片,剩余動(dòng)物停藥2周后處死重復(fù)上述檢查。結(jié)果發(fā)現(xiàn),各組指標(biāo)之間均沒有顯著性差異,表明羚羊角塞在大鼠長期毒性實(shí)驗(yàn)病理觀察中未見毒性反應(yīng)[49]。

    6 小結(jié)

    羚羊角作為傳統(tǒng)貴重中藥材,藥理作用卓著?,F(xiàn)有研究結(jié)果顯示,羚羊角的藥理作用主要體現(xiàn)在鎮(zhèn)靜催眠、抗驚厥、鎮(zhèn)痛、抗癲癇、抗炎、解熱、抗病原微生物、抗血栓、改變血管通透性、抗高血壓、鎮(zhèn)咳祛痰、增強(qiáng)免疫等方面,在防治多發(fā)病、常見病方面發(fā)揮著重要作用。由于賽加羚羊?qū)儆谖覈患?jí)珍惜保護(hù)動(dòng)物,在國際上也被列入了紅色瀕危名錄,羚羊角藥材來源稀少,近年來尋找其替代品的研究報(bào)道逐漸增多,如藏羚羊角有一定中樞抑制、抗驚厥和鎮(zhèn)痛作用等[6],山羊角也有一定鎮(zhèn)痛和解熱作用[18]等。但基本上所有的研究結(jié)果均顯示,替代品藥理效果弱于羚羊角。因此,研究賽加羚羊的生物學(xué)特性及其人工養(yǎng)殖方法,加快種群擴(kuò)繁,提高羚羊角藥材供應(yīng)量,是滿足藥用需求的根本途徑。

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