EB病毒抗體診斷方法研究進(jìn)展

吳尚文

廣西壯族自治區(qū)防城港市中醫(yī)醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣西防城港 538021

EB病毒（Epstein-Barr virus，EBV）是一種能普遍感染人類且與多種惡性腫瘤發(fā)病有密切關(guān)系的DNA病毒。由于人類容易感染EB病毒，EB病毒感染導(dǎo)致的相關(guān)疾病，特別是惡性腫瘤的發(fā)病越來越受到研究人員的關(guān)注。自外國醫(yī)學(xué)研究人員Old LJ等[1]報(bào)告使用免疫擴(kuò)散實(shí)驗(yàn)確認(rèn)EB病毒和鼻咽癌的血清學(xué)有關(guān)以來，后來諸多研究均發(fā)現(xiàn)抗EB病毒殼抗原的免疫球蛋白對鼻咽癌診斷有特異性。近年來，隨著檢驗(yàn)技術(shù)的發(fā)展和在臨床上的大量應(yīng)用，國內(nèi)外學(xué)者對鼻咽癌患者血清EB病毒抗體診斷方法作了大量研究。

1 血清EB病毒抗體診斷方法研究進(jìn)展

1.1 EB病毒不同檢測方法

長期的臨床研究發(fā)現(xiàn)EB病毒感染人體后，被病毒感染的人體細(xì)胞具有EB病毒的基因組，并產(chǎn)生相應(yīng)的各種抗原，已確定的被病毒感染細(xì)胞可合成抗原有：①核抗原（EB virus asso-ciated nuclear antigen，EBNA）； ②膜抗原（membrane antigen of Epstien-Barr virus，MA）；③早期抗原（early intracellular antigen，EA）；④衣殼抗原（EB virus cap sid antigen，VCA）；⑤淋巴細(xì)胞識別膜抗原（LYDMA）。 由于抗原產(chǎn)生后機(jī)體會出現(xiàn)相應(yīng)的抗體，通過血清EB病毒抗體的檢測可為臨床診斷提供依據(jù)，目前有大量報(bào)道顯示測定單個EB病毒抗原的抗體相比聯(lián)合測定多個抗體對鼻咽癌的診斷的特異性及靈敏度偏低，不能為臨床診斷提供準(zhǔn)確的數(shù)據(jù)，為提高檢驗(yàn)的準(zhǔn)確性，現(xiàn)多采用多個抗體聯(lián)合檢測及聯(lián)合分析的方法。

近年來，隨著檢驗(yàn)技術(shù)的發(fā)展及對鼻咽癌認(rèn)識的提高，檢測EB病毒以輔助診斷鼻咽癌的方法越來越多，如免疫熒光和免疫酶法、酶中和分析、免疫印跡、免疫斑點(diǎn)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn) （ELISA）和聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（Polymerase Chain Reaction，PCR）等，其中建立使用的 ELISA及PCR檢測EB病毒最受重視，ELISA相比其他檢測方法在鼻咽癌檢測、篩查方面特異性和敏感度均較高，操作更加簡單、快捷，且能自動化運(yùn)行、檢驗(yàn)結(jié)果易判斷。因此，此方法能有效提高工作效率，又能保證檢驗(yàn)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確度。

1.2 EB病毒不同抗體的檢測及臨床價值

對于鼻咽癌，EB病毒不同抗體其特異性與靈敏度存在差異。賈寧人等[2]對EBV感染后產(chǎn)生的急性反應(yīng)蛋白衣殼抗原蛋白（VCA）的血清抗體進(jìn)行了檢測，觀察表明抗VCA-IgA抗體在鼻咽癌組的陽性率高達(dá)69.2%，抗鼻咽癌組VCA-IgM表現(xiàn)為低陽性率，僅有7.7%。陳云等[3]用ELISA法定量檢測血清標(biāo)本中EBV特異性VCA-IgA和EA-IgA抗體水平，研究顯示，聯(lián)合檢測EBV特異性VCA-IgA和EA-IgA診斷鼻咽癌，其陽性預(yù)測值達(dá)到99%，但陰性預(yù)測值只有43%。李筱莉等[4]收集300例鼻咽癌患者血清、鼻咽良性疾病91例及可能與EB病毒感染有關(guān)的其他癌癥患者100例，用ELISA法檢測血清VCA-IgA、EA-D-IgG和EA-D-IgA 3種抗體發(fā)現(xiàn)，聯(lián)合檢測VCA-IgA和EA-DIgG有互補(bǔ)作用，二者平行聯(lián)合檢測可提高鼻咽癌血清學(xué)診斷及篩查的敏感性，序列聯(lián)合檢測可提高鼻咽癌血清學(xué)篩查的特異性。郭麗萍等[5]聯(lián)合檢測EB病毒VCA-IgA和Rta-IgG抗體用于篩查鼻咽癌高危人群，研究表明從序列測定獲得的雙項(xiàng)陽性血清中篩查到的鼻咽癌比率高于單項(xiàng)VCA-IgA陽性血清。梁惠陶等[6]采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測健康人群EB病毒IgA抗體，檢查得出IgA抗體陽性率隨著年齡的增長而增多。

臨床還報(bào)道，采用比較新的檢驗(yàn)技術(shù)如用重組的EB病毒抗原對鼻咽癌進(jìn)行血清學(xué)診斷，這些重組抗原有DNA聚合酶、胸苷激酶、核苷酸還原酶及復(fù)制激活劑Zta等。實(shí)驗(yàn)室采用ELISA檢測EBNA1-IgA、EBNA1-IgG和Zta-IgG進(jìn)行鼻咽癌篩查的文獻(xiàn)報(bào)道比較多，然而，各臨床文獻(xiàn)報(bào)道的檢測分析結(jié)果存在一定差異。胡維維等[7]對EBNA1-IgA、EBNA1-IgG、Zta-IgA、Zta-IgG、VCA-p18-IgA 和 VCA-p18-IgG 6種酶聯(lián)免疫吸附檢測在血清學(xué)診斷鼻咽癌中的應(yīng)用，探討哪種ELISA組合更為有效，研究表明臨床血清學(xué)診斷鼻咽癌，首選Zta-IgG或EBNA1-IgA；同時檢測兩種ELISA，宜采用Zta-IgG、EBNA1-IgA或Zta-IgG、EBNA1-IgG；三種ELISA同時檢測，可以提高特異度。因此推薦Zta-IgG、EBNA1-IgA、EBNA1-IgG 或 Zta-IgG、EBNA1-IgG、Zta-IgA3項(xiàng)。易冰等[8]研究用ELISA法檢測血清中的EBNA1-IgA、EBNA1-IgG、VCA-p18-IgA、VCA-p18-IgG、Zta-IgA 和Zta-IgG等6種抗體水平，比較不同抗體組合時中山籍貫和外省籍貫兩類人群樣本的抗EB病毒抗體譜的差別，結(jié)果顯示中山原住居民感染的EB病毒常常處于激活狀態(tài)，而外省籍貫的中山臨時市民感染的EB病毒處于潛伏期時表達(dá)的EBNA1水平更高。程偉民等[9]采用ELISA檢測血清中EBNA 1/IgA、EBNA 1/IgG和Zta/IgG，結(jié)果顯示 EBNA 1/IgA、EBNA 1/IgG和Zta/IgG的敏感度分別為85%、83%和79%；三者組合的敏感度最高，為92%；EBNA 1/IgA、EBNA 1/IgG和zta/IgG的特異度分別為86%、86%和80%；三者組合的特異度最高，為93%。EBNA 1/IgA、EBNA 1/IgG和zta/IgG的聯(lián)合應(yīng)用可以評估人群患鼻咽癌的危險度。易翔等[10]用免疫印跡法檢測鼻咽癌病人血清中抗EB病毒Zta-IgG抗體，結(jié)果顯示鼻咽癌組血清Zta-IgG陽性率為91.7%，對照組中10.7%Zta-IgG陽性，兩組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0.001）。免疫印跡法檢測鼻咽癌患者血清中Zta-IgG抗體有較高的敏感性和特異性，可以作為鼻咽癌患者診斷篩選的指標(biāo)。沈亞華等[11]對在中山市人民醫(yī)院進(jìn)行健康體檢的12 991名成人用ELISA法同時檢測血清中的EBNA1-I-gA、EBNA1-IgG、Zta-IgG三種抗體水平，結(jié)果顯示鼻咽癌檢出率分別為76.98/100000，7.698/100000和0/10，低危人群鼻咽癌檢出率最低。

ZE-BRA蛋白是調(diào)節(jié)EBV從潛伏狀態(tài)進(jìn)入復(fù)制狀態(tài)的關(guān)鍵。NPC細(xì)胞中ZE-BRA蛋白表達(dá)提示EBV處于活躍的復(fù)制狀態(tài)。鄭裕明等[12]在應(yīng)用ELISA法檢測鼻咽癌新發(fā)病例、鼻咽癌治療后復(fù)診病例、EB病毒VCA/IgA抗體陽性及陰性正常人群中的ZE-BRA/IgG抗體，研究結(jié)果顯示，鼻咽癌新發(fā)病例ZE-BRA/IgG的陽性率為92.7%，顯著高于其他各組 （P＜0.001），結(jié)果提示ELISA法檢測ZEBRA/IgG診斷鼻咽癌的特異性較常規(guī)免疫酶法檢測明顯提高；同時亦發(fā)現(xiàn)，VCA/IgA抗體陰性人群中，有2%的個體呈現(xiàn)ZE-BRA/IgG抗體陽性，這是否是其體內(nèi)EB病毒抗原表達(dá)形式的差異所致，值得進(jìn)一步研究。有研究者還采用ELISA方法檢測早期基因BRLF1基因編碼的Rta蛋白。Chang Y等[13]用ELISA法檢測血清中的Rta蛋白，發(fā)現(xiàn)異位的Rta蛋白能夠誘導(dǎo)LMP1在上皮細(xì)胞和淋巴細(xì)胞中表達(dá)。朱文良等[14]應(yīng)用Rta蛋白作為抗原，用ELISA法檢測血清中的Rta蛋白抗體IgG，靈敏度達(dá)82.12%，特異度為91.78%，結(jié)果表明Rta-IgG具有比較高的靈敏度和特異度，可以用于鼻咽癌的臨床檢測和篩查。蔡永林等[15]用ELISA檢測Rta/IgG、EBNA1/IgA抗體，提示EB病毒Rta/IgG抗體表達(dá)與鼻咽癌分期無關(guān)。

2 EB病毒基因診斷研究進(jìn)展

鼻咽癌患者血清中EB病毒DNA分子水平與腫瘤的分期和臨床進(jìn)展有明顯相關(guān)性，深入的研究發(fā)現(xiàn)鼻咽癌患者血漿存在著游離于細(xì)胞外的大量的EBV-DNA，并發(fā)現(xiàn)EBV-DNA隨著腫瘤消長的變化而變化，故認(rèn)為血漿EBVDNA是腫瘤EB病毒裂解釋放到血漿中去。Leung SF等[16]在比較鼻咽癌患者血漿EBV-DNA和VCA-IgA檢出敏感性研究中發(fā)現(xiàn)，EBV-DNA檢出敏感性為95%，研究結(jié)果提示鼻咽癌患者血清EBV-DNA的敏感性和特異性均高于VCA-IgA，可用于作為診斷鼻咽癌的重要指標(biāo)，與李杰[17]報(bào)道相似。張力等[18]采用熒光定量PCR的方法檢測鼻咽癌患者放射治療后血漿EB病毒（EBV）DNA水平，結(jié)果表明，在10例復(fù)發(fā)或有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的患者中，6例患者血漿中可檢測到高水平的EBV-DNA，而在臨床緩解組的15例患者中，僅1例患者的血漿中檢測到低濃度的EBV-DNA，并且他們在隨后的隨訪中又發(fā)現(xiàn)，疾病復(fù)發(fā)的患者在出現(xiàn)明顯的臨床癥狀的6個月前就已有血漿EBVDNA水平的升高。祝曉芬等[19]應(yīng)用Real-time PCR方法檢測EB病毒DNA含量，100例初治鼻咽癌患者、106例放療后及40例健康對照者，結(jié)果顯示血漿中游離EB病毒DNA在初診鼻咽癌者、放療后轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)鼻咽癌者三組檢出的陽性率分別為90.7%、96.5%和100.0%，而健康者的陽性率僅為7.5%，持續(xù)臨床緩解者10%陽性；血漿EB病毒DNA定量檢測對初診鼻咽癌患者的診斷敏感性為97.0%，特異性為92.0%；另有3例持續(xù)臨床緩解而血漿EB病毒DNA水平升高的鼻咽癌患者，在隨后的6個月隨訪中，最終出現(xiàn)腫瘤復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移，說明血漿EBV-DNA定量檢測是篩選NPC患者的敏感有效方法。Twu CW等[20]對114例鼻咽癌患者血清EBVDNA進(jìn)行檢測分析，發(fā)現(xiàn)治療前高水平的EBV-DNA比低水平者在4年總生存率和無復(fù)發(fā)生存率上的差異明顯。廖莉婭等[21]分別采用實(shí)時熒光定量PCR法和酶聯(lián)免疫吸附法檢測34例NPC患者和30例健康體檢者的EBV-DNA和EBVCA-IgA，34例鼻咽癌患者EBV-DNA陽性率為58.82%，EBVCA-IgA陽性率為44.12%，兩者同時陽性為32.35%；30例健康體檢者EBV-DNA陽性率為10%，EBVCA-IgA陽性率為3.33%，兩者同時陽性為3.33%。結(jié)果提示患者血液白細(xì)胞EBV-DNA作為EB病毒的一種抗原物質(zhì)，比EBVCA-IgA更能反映EBV在患者體內(nèi)的實(shí)際情況，更適合在臨床實(shí)驗(yàn)室使用。

3 總結(jié)

通過對EB病毒與鼻咽癌的相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道的復(fù)習(xí)可以看出，通過實(shí)驗(yàn)室檢查血清EB病毒抗體對于鼻咽癌患者的篩選、診斷、療效判斷和復(fù)發(fā)監(jiān)測均具有重要的指導(dǎo)意義。在鼻咽癌診斷方面，目前，實(shí)驗(yàn)室檢查以聯(lián)合檢測早期抗原抗體和衣殼抗原抗體的方法應(yīng)用最廣；臨床上報(bào)道的其他抗體檢測，如ZE-BRA-IgG抗體也在實(shí)驗(yàn)室檢測中逐步進(jìn)行研究使用。聯(lián)合各種對鼻咽癌的診斷、篩選有高敏感和高特異性的抗體指標(biāo)進(jìn)行輔助檢查，將為臨床診斷與治療提供科學(xué)的依據(jù)。

[1]Old LJ，Boyse EA，Oettgen HF，et al.Precipitating Antibody in Human Serum to an Antigen Present in Cultured Burk itt's Lymphoma Cells[J].Proc Natl Acad Sci USA， 1966，56：1699-1704.

[2]賈寧人，曹華，陳亞軍，等.血清抗EB病毒抗體檢測及其臨床應(yīng)用評價[J].臨床檢驗(yàn)雜志，2009，27（2）：139.

[3]陳云，劉根焰，姚堃，等.定量檢測EB病毒VCA-IgA和EA-IgA抗體對EB病毒相關(guān)鼻咽癌的診斷意義[J].南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2009，29（12）：1638-1640.

[4]李筱莉，陳燕，葉倩，等.EB病毒抗體聯(lián)合檢測在鼻咽癌血清學(xué)診斷和篩查中的應(yīng)用評價[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2011，8（2）：104-142.

[5]郭麗萍，崔英，梁新強(qiáng)，等.EB病毒抗體聯(lián)合檢測在篩查鼻咽癌高危人群中的應(yīng)用價值[J].中國醫(yī)藥指南，2012，10（10）：26-27.

[6]梁惠陶，葉子怡，陳林，等.廣州健康體檢人員EB病毒感染狀況調(diào)查分析[J].臨床醫(yī)學(xué)工程，2010，17（6）：131-132.

[7]胡維維，宗永生，李鳳萍，等.六種抗EB病毒抗體檢測在鼻咽癌血清學(xué)診斷中的比較[J].中國腫瘤臨床，2006，33（14）：795-798.

[8]易冰，顧耀亮，宗永生，等.鼻咽癌高發(fā)區(qū)健康成人六項(xiàng)EB病毒抗體檢測結(jié)果的分析[J].癌癥，2009，28（8）：822-826.

[9]程偉民，陳國雄，陳鴻，等.以血清EB病毒抗體譜評估患鼻咽癌危險度的研究[J].中華腫瘤雜志，2011，24（6）：561-563.

[10]易翔，吳英鷹，謝瑩，等.鼻咽癌病人血清抗重組EB病毒Zta抗原IgG 抗體檢測[J].廣西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2007，24（3）：365-367.

[11]沈亞華，季明芳.鼻咽癌高發(fā)區(qū)12991名健康成人鼻咽癌風(fēng)險評估結(jié)果分析[J].實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志，2011，27（5）：882-883.

[12]鄭裕明，湯敏中，李軍，等.EB病毒ZEBRA/IgG抗體檢測在鼻咽癌血清學(xué)診斷中的應(yīng)用[J].華夏醫(yī)學(xué)，2006，19（6）：1092-1093.

[13]Chang Y,Lee HH,Chang SS，et al.Induction of Epstein-Barr virus Latent Membrane Protein 1 by a Lytic Transativator Rta[J].Journal Of Virology，2004，78（23）：13028-13036.

[14]朱文良，梁新強(qiáng)，章陽，等.EB病毒Rta蛋白抗體IgG在鼻咽癌診斷中的應(yīng)用[J].中國癌癥防治雜志，2009，1（3）：211-213.

[15]蔡永林，鄭裕明，成積儒，等.EB病毒Rta/IgG、EBNA1/IgA、VCA/IgA及EA/IgA抗體與鼻咽癌分期的關(guān)系[J].南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2010，30（3）：509-511.

[16]Leung SF，Tam JS，Chan AT，et al.Improved accuracy of detection of nasopharyngeal carcinoma by combined application of circulating Epstein-Barr virus DNA and anti-Epstein-Barr viral capsid antigen IgA antibody[J].Clin Chemistry， 2004，50（2）：2339-2345.

[17]李杰.血漿EBV—DNA檢測對鼻咽癌的診斷價值的探討[J].醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)與臨床，2011，22（1）：20-22.

[18]張力，李蘇，趙充，等.鼻咽癌患者血漿EB病毒DNA水平與腫瘤復(fù)發(fā)的關(guān)系[J].臨床腫瘤學(xué)雜志，2004，9（2）：122-125.

[19]祝曉芬，杜寶文，黃小明，等.血漿EB病毒DNA含量定量檢測對鼻咽癌的診斷和預(yù)后評價[J].中國中西醫(yī)結(jié)合·耳鼻咽喉雜志，2006，14（2）：73-75.

[20]Twu CW，Wang WY，Liang WM，et al.Comparison of the prognostic in pact of serum anti-EBV antibody and plasma EBV DNA assays in nasopharyngeal carcinoma[J].Int J Radiat Oncol Biol Phys，2006，9：15.

[21]廖莉婭，孔梅，劉春季.鼻咽癌患者白細(xì)胞EBV-DNA和血漿VCAIgA 的檢測比較研究[J].中國醫(yī)學(xué)創(chuàng)新，2010，7（32）：145-146.