MicroRNA在子宮內(nèi)膜癌發(fā)生、發(fā)展及臨床診治中的研究

王淑芳 馮玉珍 霍新龍

1.河北醫(yī)科大學(xué)第三醫(yī)院婦產(chǎn)科，河北石家莊 050051；2.河北省秦皇島市第一醫(yī)院腫瘤科，河北秦皇島 066000

microRNA（miRNA）是一類大小為22～25個(gè)核苷酸的單鏈非編碼RNA，其通過(guò)與miRNA 完全或不完全的互補(bǔ)使靶mRNA 降解或抑制其翻譯[1]。miRNA 廣泛存在于真核生物體內(nèi)，并在進(jìn)化中保守，參與動(dòng)植物生長(zhǎng)發(fā)育、細(xì)胞分化、細(xì)胞增殖與凋亡、激素分泌等各種過(guò)程，并廣泛參與腫瘤的發(fā)病機(jī)制[2]。本文綜述其在子宮內(nèi)膜癌發(fā)生、發(fā)展及臨床診治中的研究進(jìn)展。

1 miRNA的合成與功能

miRNA是一種內(nèi)源性的非編碼小分子RNA，可對(duì)基因進(jìn)行轉(zhuǎn)錄后水平的調(diào)節(jié)，其表達(dá)具有組織特異性。micro RNA 最早由Lee等[3]在1993年研究秀麗新小桿線蟲（Caenorhabditis elegans）基因組構(gòu)成時(shí)發(fā)現(xiàn)。7年后，Reinhart等[4]在線蟲中發(fā)現(xiàn)了let-7，并引起了學(xué)術(shù)界對(duì)miRNA研究的關(guān)注。據(jù)估計(jì)，人類miRNA的數(shù)量在千余個(gè)至數(shù)萬(wàn)個(gè)[5]，在生物體的發(fā)生、生長(zhǎng)、發(fā)育和分化等方面都起著重要的作用。動(dòng)物體內(nèi)miRNA 主要通過(guò)與靶基因3′端非翻譯區(qū)（3′-UTR）不完全配對(duì)，抑制靶基因mRNA 翻譯，參與細(xì)胞發(fā)育、增殖、分化、凋亡、代謝等生物學(xué)過(guò)程，與腫瘤的發(fā)生密切關(guān)系。生物信息學(xué)預(yù)測(cè)，生物體包含約總編碼蛋白基因的1%～5%，人類編碼蛋白基因的三分之一受miRNA的調(diào)節(jié)，而每一個(gè)miRNA 有幾百個(gè)目的基因，同樣一個(gè)目的基因可受數(shù)個(gè)miRNA的調(diào)節(jié)，這表明miRNA是基因調(diào)節(jié)中最大的調(diào)節(jié)家族之一。由于miRNA的作用調(diào)節(jié)機(jī)制比較復(fù)雜，目前只能闡述其部分機(jī)制。miRNA的生物合成主要包括4個(gè)階段[6-8]：①初級(jí)miRNA（primary miRNA，pri-miRNA）生成：在細(xì)胞核內(nèi)，通過(guò)RNA 聚合酶Ⅱ的作用，轉(zhuǎn)錄出長(zhǎng)達(dá)幾百到上千核苷酸的miRNA 初級(jí)產(chǎn)物；②miRNA 前體（precursor miRNA，pre-miRNA）生成：primiRNAs 在RNaseⅢ內(nèi)切酶Drosha的作用下與雙鏈RNA結(jié)合蛋白DGCR8 形成復(fù)合體識(shí)別、剪切形成具有頸環(huán)結(jié)構(gòu)的pre-miRNAs， 長(zhǎng)60～70 nt。然后 pre-miRNAs 由 Exportin-5 轉(zhuǎn)運(yùn)至胞漿中；③成熟miRNA 生成： 胞漿中的pre-miRNAs 經(jīng)由Dicer、TRBP 及PACT 形成的復(fù)合物處理為雙鏈miRNA，進(jìn)一步解鏈后一條為成熟miRNA，另一條被降解；④成熟miRNA 參與形成RNA 誘導(dǎo)的沉默復(fù)合物（RNA-induced silengcing complex，RISC），結(jié)合至 mRNA 上發(fā)揮其功能。

miRNAs 具有非常廣泛的基因調(diào)控功能，其可以調(diào)控細(xì)胞增殖、分化和凋亡，不同的miRNAs對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)具有不同的調(diào)控作用，相同的miRNAs對(duì)不同細(xì)胞株的調(diào)控作用亦不同[9]。有研究表明，miRNAs 可調(diào)控?cái)?shù)千個(gè)基因的表達(dá)，且約90%的基因受miRNAs 調(diào)控[10]。目前已公認(rèn)miRNA 和細(xì)胞癌變有著密切聯(lián)系，已發(fā)現(xiàn)miRNA 與肺癌、結(jié)直腸腫瘤、伯基特淋巴瘤和慢性淋巴細(xì)胞白血病等多種腫瘤有關(guān)[11]。

2 miRNA 與子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生

研究證明miRNA 與多種腫瘤的發(fā)生存在著密切關(guān)系，在多種癌細(xì)胞中有許多miRNA表達(dá)的上調(diào)或下調(diào)。miRNA 既可作為抑癌基因下調(diào)原癌基因的活性，也可作為癌基因下調(diào)抑癌基因的活性。目前miRNA 芯片技術(shù)已逐步應(yīng)用于腫瘤研究中。Boren等[12]在37例子宮內(nèi)膜癌、20例正常子宮內(nèi)膜、4例復(fù)雜型非典型子宮內(nèi)膜增生的新鮮冰凍標(biāo)本中，篩查了335個(gè)人的miRNAs，并對(duì)22份子宮內(nèi)膜癌和9份正常子宮內(nèi)膜組織標(biāo)本進(jìn)行了22 000個(gè)mRNA 基因篩查。結(jié)果發(fā)現(xiàn)13個(gè)miRNAs和90個(gè)mRNA 與子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生有關(guān)，其中在子宮內(nèi)膜癌中表達(dá)升高的miRNA 包括 miR-185、miR-106a、miR-181a、miR-210、miR-423、miR-103、miR-107 等。有26個(gè)差異表達(dá)的mRNA 是Sangar 數(shù)據(jù)庫(kù)中預(yù)測(cè)的miRNAs 靶基因。證實(shí)miRNA廣泛參與子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病機(jī)制，并且以顯性或隱性的癌基因形式促進(jìn)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展。

在許多實(shí)體腫瘤中miR-21均被證實(shí)其過(guò)度表達(dá)。Torres等[13]分析了20例子宮內(nèi)膜癌組織和10例正常子宮內(nèi)膜組織中miR-21的表達(dá)水平，結(jié)果顯示子宮內(nèi)膜癌組織中的miR-21的濃度比正常子宮內(nèi)膜組織高2.312倍，證明miR-21的過(guò)表達(dá)可能促進(jìn)子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生。Karaayvaz等[14]用實(shí)時(shí)定量PCR對(duì)48對(duì)正常子宮內(nèi)膜組織和子宮內(nèi)膜癌組織中的miR-200c 和miR-205表達(dá)水平進(jìn)行測(cè)定，并用免疫組化對(duì)其靶蛋白PTEN的表達(dá)量進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果發(fā)現(xiàn)miR-200c 和miR-205 在子宮內(nèi)膜癌組織中均過(guò)度表達(dá)（P＜0.01），且PTEN的表達(dá)量與miR-205的水平呈負(fù)相關(guān)，并證明miR-205的表達(dá)水平與患者的存活率顯著相關(guān)，其低水平的患者往往有更高的生存率。因此得出結(jié)論，miR-205 不僅可以作為子宮內(nèi)膜癌診斷的一個(gè)有效標(biāo)志物，而且能預(yù)測(cè)子宮內(nèi)膜癌患者的臨床預(yù)后。Jiang等[15]發(fā)現(xiàn)MiR-125b 在Ⅱ型子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞中過(guò)度表達(dá)，而抑癌基因TP53INP1的表達(dá)下調(diào)，其證明MiR-125b很有可能通過(guò)抑制TP53INP1的表達(dá)而促進(jìn)子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生發(fā)展。Dong等[16]用（qRT）-PCR 和 Western blot等方法研究發(fā)現(xiàn)BMI-1 基因能夠促進(jìn)子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生與侵襲，而miR-194通過(guò)恢復(fù)鈣黏蛋白E的表達(dá)，減少波形蛋白表達(dá)，抑制BMI-1 基因的表達(dá)，控制子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生與轉(zhuǎn)移。這些發(fā)現(xiàn)表明miR-194可能在控制子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生及轉(zhuǎn)移中發(fā)揮了重要作用，為子宮內(nèi)膜癌的基因治療提供新的靶標(biāo)。

2.1 miRNA 與子宮內(nèi)膜癌的分型

Ratner等[17]利用miRNA 芯片技術(shù)對(duì)95例子宮內(nèi)膜I型（子宮內(nèi)膜樣腺癌）和Ⅱ型（子宮乳頭狀漿液性腺癌）癌癥、癌肉瘤和正常子宮內(nèi)膜樣本的miRNA表達(dá)譜進(jìn)行了對(duì)比分析，所用的芯片含有384個(gè)miRNA，結(jié)果提示8個(gè)miRNA 在I型子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)低于Ⅱ型，分別為miR-19a、miR-19b、miR-30e-5p、miR-101、miR-452、miR-15a、miR-29c、miR-382。而其中一些 miRNA 已被證實(shí)對(duì)癌癥的血液及淋巴轉(zhuǎn)移有一定的促進(jìn)作用[18]，這將為子宮內(nèi)膜癌的基因分型及判斷預(yù)后提供新的方法。

2.2 miRNA 與子宮內(nèi)膜癌耐藥

Wu等[19]研究發(fā)現(xiàn) miR-200b、miR-200c 和 miR-429（microRNA-200 家族）在子宮內(nèi)膜癌中過(guò)度表達(dá)，而且其與順鉑治療的耐藥性有關(guān)。AP-2α為腫瘤抑制基因，通過(guò)對(duì)不同基因的調(diào)節(jié)作用，參與細(xì)胞增殖和凋亡。高水平表達(dá)的miRNA-200 家族抑制AP-2α蛋白的表達(dá)，而沉默miRNA-200 家族后AP-2α蛋白的表達(dá)則顯著增強(qiáng)。實(shí)驗(yàn)證明增強(qiáng)AP-2α蛋白的表達(dá)能夠增加腫瘤對(duì)順鉑化療的敏感性[20]。SNPs 作為miRNA-200 家族與AP-2α 蛋白的連接橋梁，是人類基因組最常見(jiàn)的遺傳變異，其與腫瘤細(xì)胞的化學(xué)敏感性密切相關(guān)，很有可能成為一個(gè)判斷順鉑治療子宮內(nèi)膜癌預(yù)后的標(biāo)志。

3 展望

miRNA的發(fā)現(xiàn)，是RNA 研究領(lǐng)域的重要突破，為人們提供了一種全新的視角來(lái)認(rèn)識(shí)生物基因和基因表達(dá)調(diào)節(jié)的本質(zhì)。雖然越來(lái)越多的miRNA 被發(fā)現(xiàn)參與細(xì)胞周期、細(xì)胞增殖、分化、遷徙等一系列的細(xì)胞生命活動(dòng)，但對(duì)子宮內(nèi)膜癌中miRNA的研究尚不是很多，能給出直接證據(jù)證明miRNA的靶點(diǎn)及其功能、作用機(jī)制的miRNA 則更少。子宮內(nèi)膜癌中miRNA的篩選及其靶點(diǎn)的鑒定將提高人們對(duì)子宮內(nèi)膜癌進(jìn)行診斷和預(yù)后的水平，對(duì)它們進(jìn)行研究將會(huì)很有前途，目前已成為研究熱點(diǎn)，以miRNA 為靶點(diǎn)或者以miRNA 為手段進(jìn)行研究將會(huì)為子宮內(nèi)膜癌的診斷及治療提供新的見(jiàn)解和思路。

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