蒙藥混其勒-7的蓄積毒性實(shí)驗(yàn)研究

寶樂爾 白梅榮 胡伊力格其 那音臺(tái) 巴達(dá)拉胡 美麗 田香

摘要：目的 本研究在急性毒性實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上對(duì)混其勒-7進(jìn)行蓄積毒性試驗(yàn)，為混其勒-7的安全合理用藥奠定實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法 將昆明種小鼠隨機(jī)分為混其勒-7組和正常對(duì)照組。以4d為1個(gè)階段，首次給藥劑量為0.1LD50，其他階段給藥劑量依次遞增為1.5倍，直至該組動(dòng)物死亡一半為止。記錄各階段動(dòng)物死亡情況并計(jì)算蓄積系數(shù)。同時(shí)計(jì)算臟器指數(shù)和相應(yīng)生化指標(biāo)。結(jié)果 蓄積毒性試驗(yàn)結(jié)果顯示，混其勒-7的蓄積系數(shù)均為K>5，分級(jí)為弱蓄積。與正常對(duì)照組比較，混其勒-7組的肝脾指數(shù)明顯升高，AST和CREP的含量明顯升高，UREAL含量明顯降低，均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05或P<0.01）。結(jié)論 混其勒-7對(duì)肝腎有弱蓄積性毒性。

關(guān)鍵詞：蒙藥;混其勒-7;蓄積毒性;實(shí)驗(yàn)研究

中圖分類號(hào)：R285.5?? 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A?? 文章編號(hào)：1007-2349（2022）02-0080-03

據(jù)《通瓦嘎吉德》記載，高吉拉-7由制馬錢子、訶子、木香、白云香、天竺黃、紅花、沉香等七味藥組成，具有活血、舒氣、止痛的功能，主要用于胸脅、氣急、胸脅刺痛、壞疽等，孕婦禁用[1-2]。該復(fù)方的主要藥味馬錢子是馬錢科植物馬錢（Strychnos nux-Vomica L.）或長(zhǎng)籽馬錢（Strychnos Sted.ex DC.）的干燥成熟的種子，為常用有毒蒙藥之一[3-5]，從而使混其勒-7臨床應(yīng)用受到一定限制。臨床上，當(dāng)藥物反復(fù)多次進(jìn)入機(jī)體后，藥物進(jìn)入機(jī)體的速度或總量超過機(jī)體代謝轉(zhuǎn)化的速度與排出機(jī)體的速度或總量時(shí)，藥物或其代謝產(chǎn)物就可能在機(jī)體內(nèi)逐漸增加并貯留某些部位。這種現(xiàn)象就稱為藥物的蓄積作用，大多數(shù)蓄積作用會(huì)產(chǎn)生蓄積毒性[6]。蒙藥混其勒-7是多次口服的藥物，且含有有毒藥味馬錢子，因此，該藥在臨床應(yīng)用中產(chǎn)生蓄積毒性的可能性很大。本研究以混其勒-7為示例藥物，以昆明種小鼠為研究對(duì)象，進(jìn)行蓄積毒性研究，初步探討混其勒-7毒性強(qiáng)度、中毒劑量、毒性靶器官，為混其勒-7臨床安全合理應(yīng)用提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 昆明種小鼠，SPF級(jí)，雌雄各半，體質(zhì)量（20±2）g，由遼寧長(zhǎng)生生物技術(shù)股份有限公司提供（合格證號(hào)：SCXK（遼）2015-0001）。動(dòng)物飼養(yǎng)于內(nèi)蒙古民族大學(xué)蒙醫(yī)藥學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室（室內(nèi)溫度20℃～25 ℃，濕度40%～60%）。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)藥材 制馬錢子（批號(hào)：20200634）、訶子（批號(hào)：20200801）、木香（批號(hào)：20200615）、白云香（批號(hào)：20171109）、天竺黃（批號(hào)：20170721）、紅花（批號(hào)：20200622）、沉香（批號(hào)：20200641）均由內(nèi)蒙古民族大學(xué)附屬醫(yī)院制劑室提供，由蒙醫(yī)藥學(xué)院包桂花教授鑒定。

1.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑 丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶檢測(cè)試劑盒（ALT，批號(hào) 43546001）、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶檢測(cè)試劑盒（AST，批號(hào)44713101）、尿素/尿素氮檢測(cè)試劑盒（UREAL，批號(hào)48268901）、肌酐檢測(cè)試劑盒（CREP，批號(hào) 47756001）均購自羅氏診斷產(chǎn)品（上海）有限公司。

1.1.4 實(shí)驗(yàn)儀器 CobasC311羅氏全自動(dòng)生化分析儀（日本）;TG16-WS臺(tái)式高速離心機(jī)（長(zhǎng)沙）;YP-5002電子天平;DE-200 g粉碎機(jī)（浙江）;BCH198K冰箱（青島）。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 分組與給藥 40只昆明小鼠（雌雄各半）按體重和性別隨機(jī)分為正常對(duì)照組、混其勒-7組，每組20只。給藥前12 h禁食不禁水。給藥劑量以4 d為1個(gè)階段，第1個(gè)階段每只動(dòng)物每天給藥劑量為0.1 LD50，以后各階段依次遞增1.5倍，直至該組動(dòng)物死亡一半。正常對(duì)照組每日給予與實(shí)驗(yàn)組相同體積的蒸餾水。

1.2.2 觀察指標(biāo)

1.2.2.1 日常狀態(tài)觀察 給藥后每天稱重并詳細(xì)觀察并記錄給藥組小鼠的外部表現(xiàn)（運(yùn)動(dòng)狀態(tài)、毛發(fā)顏色、排泄物的形狀及死亡率等）。實(shí)驗(yàn)最后一天處理小鼠后取五臟后生理鹽水漂洗并用濾紙擦干稱重，計(jì)算各臟器指數(shù)（公式：臟器指數(shù)=臟器重量/體重×100%）。

1.2.2.2 計(jì)算蓄積系數(shù)[6-8] 實(shí)驗(yàn)最后1 d計(jì)算混其勒和混其勒-7的蓄積系數(shù)。（公式：蓄積系數(shù)K=累積劑量/LD50值）。

1.2.2.3 混其勒-7對(duì)蓄積毒性小鼠肝、腎功能的影響 實(shí)驗(yàn)最后一天處理剩余小鼠，采血，3000 r/min離心10 min分離血清，檢測(cè)生化指標(biāo)丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（AST）、尿素（UREAL）、肌酐（CREP）。

1.2.2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 用SPSS 22.0軟件分析數(shù)據(jù)，進(jìn)行組間t檢驗(yàn)。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1 蒙藥混其勒-7小鼠蓄積毒性日常狀態(tài) 實(shí)驗(yàn)頭兩個(gè)階段混其勒-7組的小鼠沒有明顯的癥狀，給藥第三階段開始精神狀態(tài)欠佳、活動(dòng)變少、全身蜷縮，給藥后出現(xiàn)顫抖甚至死亡現(xiàn)象。跟混其勒組基本相似。

2.2 蒙藥混其勒-7蓄積系數(shù)、用藥劑量、給藥時(shí)間及死亡現(xiàn)象 給藥后第三階段開始出現(xiàn)小鼠死亡現(xiàn)象，第五階段死亡小鼠的數(shù)量到達(dá)該組動(dòng)物數(shù)量的一半，此時(shí)小鼠用藥總量為8329.8 mg/kg。蓄積系數(shù)K>5，出現(xiàn)了弱蓄積性。見表1。

2.3 蒙藥混其勒-7蓄積毒性對(duì)小鼠的臟器指數(shù)的影響 與正常對(duì)照組比較，混其勒-7組小鼠的肝脾指數(shù)明顯升高（P<0.05）。由此可見混其勒-7對(duì)小鼠肝脾具有一定程度的影響。見表2。

2.4 蒙藥混其勒-7蓄積毒性對(duì)小鼠的肝腎功能的影響 與正常對(duì)照組比較，混其勒-7組小鼠的血清中AST和CREP含量明顯升高（P<0.05，P<0.01），UREAL含量顯著降低（P<0.05）。由此進(jìn)一步表明混其勒-7對(duì)小鼠肝腎具有一定程度的影響。見表3。

3 結(jié)論

蒙藥混其勒-7蓄積系數(shù)K均大于5，具有弱蓄積毒性。

4 討論

蓄積毒性實(shí)驗(yàn)是每日給藥小于致死劑量的藥物使其染毒，判斷藥物代謝過程中是否有蓄積現(xiàn)象[7-8]。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，蒙藥混其勒-7蓄積系數(shù)K均大于5，出現(xiàn)了弱蓄積毒性。實(shí)驗(yàn)前兩階段小鼠的日常狀態(tài)無明顯變化，第三階段開始小鼠的動(dòng)作變緩慢、蜷縮、毛發(fā)光澤度下降，給藥后出現(xiàn)顫抖、甚至死亡現(xiàn)象。

與正常對(duì)照組比較，蒙藥混其勒-7組的肝腎指數(shù)均明顯升高且血清AST、ALT含量也明顯升高，統(tǒng)計(jì)學(xué)都具有顯著性差異。這可能由于開始階段藥物濃度較低，混其勒-7到達(dá)肝臟后，由肝臟解毒作用被初步解毒，接著藥物濃度增加后肝臟解毒作用逐漸變?nèi)醵霈F(xiàn)中毒現(xiàn)象。蒙藥混其勒-7的UREAL含量明顯下降，CREP含量明顯升高。由此初步判定蒙藥混其勒-7的蓄積毒性的靶向器官是??? 肝和腎臟。該研究為混其勒-7臨床合理應(yīng)用及慢性毒性研究奠定了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

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（收稿日期：2021-08-27）