Wn t-1蛋白在宮頸鱗癌及癌前病變中的表達(dá)及意義

孫錦川 鄭曙民

山西醫(yī)科大學(xué)山西省腫瘤醫(yī)院婦一科，山西太原 030001

Wn t-1蛋白在宮頸鱗癌及癌前病變中的表達(dá)及意義

孫錦川 鄭曙民▲

山西醫(yī)科大學(xué)山西省腫瘤醫(yī)院婦一科，山西太原 030001

目的 探討Wnt-1蛋白在子宮肌瘤組織，宮頸病變組織（上皮內(nèi)瘤變和宮頸鱗癌）中的表達(dá)及意義。方法取同期因子宮肌瘤行子宮全切的患者30例，宮頸上皮內(nèi)瘤變患者（CIN）63例，宮頸鱗癌患者51例，術(shù)前均未接受放化療，或其他治療。用免疫組化SABC法對Wnt-1蛋白在正常宮頸組織、宮頸上皮內(nèi)瘤變（CIN）組織和宮頸鱗癌組織中的表達(dá)水平進(jìn)行檢測。結(jié)果宮頸病變組Wnt-1表達(dá)明顯高于子宮肌瘤組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.001）；Wnt-1表達(dá)高度病變組高于低度病變組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.048），宮頸鱗癌組高于低度病變組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.001）；宮頸鱗癌組高于高度病變組（P=0.039）。結(jié)論 Wnt信號通路的主要成員Wnt-1蛋白的過高表達(dá)與宮頸病變的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)。

宮頸上皮內(nèi)瘤變；宮頸癌；Wnt經(jīng)典信號通路；Wnt-1蛋白；免疫組化法

宮頸癌是危害女性生命健康的惡性腫瘤之一，在導(dǎo)致婦女死亡的惡性腫瘤中居排第2位，僅位于乳腺癌之后[1]。近幾年來，全世界宮頸癌的發(fā)病率呈現(xiàn)明顯上升及低齡化趨勢。Wnt蛋白在Wnt信號通路中起到重要作用，通過與細(xì)胞膜上的受體結(jié)合，從而使胞內(nèi)信號傳導(dǎo)分子活化，進(jìn)而調(diào)節(jié)靶基因的表達(dá)，參與經(jīng)典Wnt信號通路的蛋白質(zhì)主要有Wntl、Wnt3a和Wnt8。采用免疫組化SABC法，檢測Wnt-1蛋白在宮頸病變組（宮頸上皮內(nèi)瘤變、宮頸鱗癌組織）和正常宮頸組織（子宮肌瘤）中的表達(dá)，進(jìn)而探討Wnt蛋白在宮頸病變進(jìn)展中的作用。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源

取2011年8月～2012年10月山西省腫瘤醫(yī)院病理科婦科手術(shù)切除的子宮頸鱗癌組織蠟塊51例、宮頸上皮內(nèi)瘤變組織63例（低度病變組28例，高度病變組35例），隨機(jī)選取正常子宮頸組織蠟塊（同期因子宮肌瘤而非子宮頸病變行子宮全切術(shù)）30例作為對照，年齡為25～72歲，平均（36.5±7.5）歲。所有患者均未經(jīng)放化療，術(shù)后均經(jīng)病理證實(shí)。各組一般情況差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1.2 主要試劑

兔抗人Wnt-1多克隆抗體購為北京博奧森生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品，二抗鼠抗兔即用型SABC試劑盒為武漢博士德生物工程有限公司產(chǎn)品。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

切片常規(guī)脫蠟，水化，PBS洗兩次各5分鐘，配置3%H2O2，抗原修復(fù)，PBS洗5 min。滴加正常山羊血清封閉液，甩去多余液體，滴加一抗（Wnt-11∶150）4℃過夜，37℃復(fù)溫，PBS洗 3次，每次2 min，滴加生物素化二抗，PBS洗2 min×3次，滴加試劑SABC，PBS洗5 min×4次，DAB顯色，蘇木素復(fù)染，鹽酸酒精分化，脫水、透明，封片，PBS代替一抗做陰性對照。

1.4 陽性結(jié)果判定

經(jīng)免疫組化分析，Wnt-1蛋白主要定位于細(xì)胞質(zhì)，陽性染色以細(xì)胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色顆粒為標(biāo)準(zhǔn)。分級標(biāo)準(zhǔn)，陽性細(xì)胞數(shù)≤2%：0分；2%～20%：1分；21%～50%：2分；≥50%：3分。著色程度，無著色：0分；淡黃色：1分；棕黃色為2分。最后得分為陽性細(xì)胞數(shù)以及著色程度相加值，陰性（-）：≤1.9 分；弱陽性（+）：2.0～2.9 分；陽性（++）：3.0～3.9 分；強(qiáng)陽性（+++）：≥4 分。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)采用SPSS 16.0軟件包檢驗(yàn)。Wnt-1蛋白表達(dá)數(shù)據(jù)為等級資料，差異比較采用秩和檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

各組Wnt-1表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=58.610，P<0.001）。進(jìn)一步做兩兩比較：低度病變組、高度病變組、宮頸鱗狀癌組Wnt-1表達(dá)明顯高于正常組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.001）；高度病變組高于低度病變組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.048），宮頸癌組高于低度病變組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.001）；宮頸癌組高于高度病變組（P=0.039）。見表1。

表1 3組Wnt-1表達(dá)情況比較[n（%）]

3 討論

已有文獻(xiàn)報(bào)道，經(jīng)典的Wnt信號通路的激活與一系列腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。Wnt信號通路是一個(gè)復(fù)雜的蛋白質(zhì)網(wǎng)絡(luò)，正常情況下對胚胎發(fā)育和成人部分組織的形成及功能起著重要作用，例如在細(xì)胞的增殖、分化和遷移起到一定的調(diào)節(jié)作用。目前已知的主要有19種Wnt蛋白，其中激活經(jīng)典通路的有Wnt1，Wnt3a和Wnt8。Wnt1該基因編碼370個(gè)氨基酸序列，它的異常表達(dá)與人類某些系統(tǒng)腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。本研究發(fā)現(xiàn)，Wnt-1蛋白在子宮肌瘤組織中的表達(dá)水平明顯低于其在高度病變組織和宮頸鱗癌組織中的表達(dá)，趙蘇云等[2]證明子宮肌瘤細(xì)胞中存在Wnt信號通路，而正常子宮肌層組中不存在，說明Wnt信號通路與子宮肌瘤的發(fā)生密切相關(guān)；Dimitrova IK等[3]也證明，Wnt-1蛋白在子宮肌瘤中低表達(dá)并與細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移有關(guān)。在宮頸病變的發(fā)生、發(fā)展過程中，Wnt/β-catenin信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑即經(jīng)典的Wnt信號途徑起重要作用，正常宮頸組織中，βcatenin蛋白在上皮細(xì)胞膜表達(dá)，而在宮頸上皮內(nèi)瘤變細(xì)胞或癌細(xì)胞中β-catenin蛋白則在細(xì)胞漿或細(xì)胞核表達(dá)，正常情況下，胞質(zhì)中β-catenin蛋白的Ser45被酪蛋白激酶I磷酸化，之后與Axin-APC-GSK-3β形成降解復(fù)合物，βcatenin蛋白繼而被GSK-3β磷酸化，后結(jié)合泛素化蛋白被泛素化[4-5]。研究發(fā)現(xiàn)60%的低度病變可以自然消退，而5%～10%的能夠發(fā)展為高度病變，只有低于1%的患者最后發(fā)展為宮頸癌[5]，持續(xù)感染高危型HPV容易導(dǎo)致宮頸病變，是目前已經(jīng)明確的導(dǎo)致宮頸癌發(fā)生的一個(gè)重要的生物學(xué)因素，但卻不是導(dǎo)致宮頸癌發(fā)生的完全條件。Uren 2005年發(fā)表于《Cancer Research》的文章中提到，人乳頭瘤病毒（HPV）誘導(dǎo)的永生化人角質(zhì)化細(xì)胞被SV40 small-t（smt）抗原轉(zhuǎn)化，轉(zhuǎn)化后的細(xì)胞胞質(zhì)中β-catenin蛋白高水平的表達(dá)，而胞質(zhì)中β-catenin蛋白的積累，可以激活Wnt信號途徑，因此認(rèn)為HPV感染陽性的正常宮頸細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)镠PV永生化角質(zhì)細(xì)胞需要第二次激活，即經(jīng)典的Wnt信號通路的激活[6]。Theodore Rampias等[7]2010年在《Molecular Cancer Research》中也有報(bào)道，HPV病毒的E6、E7基因的表達(dá)激活經(jīng)典的Wnt信號通路，因此高危型HPV感染本身足以致癌。

大量文獻(xiàn)表明經(jīng)典的Wnt信號途徑異常在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起重要作用，尤其是對于結(jié)腸癌的研究報(bào)道較多，近年來對Wnt-1蛋白在胃癌中也有相關(guān)報(bào)道，韓向春等[8]報(bào)道，在經(jīng)典Wnt信號通路中，Wnt1在胃癌中高表達(dá)，與正常組織相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。但對于該信號通路各個(gè)分子在引起子宮腫瘤的過程中所起作用的研究并不多見，通過對其作用的研究，進(jìn)一步明確其相關(guān)機(jī)制，未來可將它作為治療宮頸癌的重要靶點(diǎn)，通過對該途徑的干預(yù)調(diào)控從而達(dá)到治療腫瘤的目的。這可以成為未來的一個(gè)研究熱點(diǎn)。本研究30例子宮肌瘤組織中，Wnt-1蛋白陽性率較低，而在宮頸低度病變組織、宮頸高度病變組織、宮頸鱗癌組織中，其陽性率則逐漸增加。由于樣本的不足，本實(shí)驗(yàn)無法探討Wnt-1蛋白在宮頸腺癌組織中是否也有此表達(dá)傾向。

[1]Parkin D M，Bray F，F(xiàn)erlay J，etal.Estimating the world cancer burden：Globocan 2000[J].Int J Cancer，2001，94（2）：153-156.

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[4]Price MA.CKI：there’S more than one：casein kinase I family members in Wnt and Hedgehog signaling[J].Genes Dev，2006，20（4）：399-410.

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[7]Theodore Rampias，Eleni Boutati，et al.Activation of Wnt Signaling Pathway by Human Papillomavirus E6 and E7 Oncogenes in HPV16-Positive Oropharyngeal Squamous Carcinoma Cells[J].Molecular Cancer Research，2010，8（3）：433-443.

[8] 韓向春，康金旺，鄭力強(qiáng)，等.Wnt1、β-catenin、APC 和 cyclin D1蛋白在胃癌中的表達(dá)[J].腫瘤防治研究，2011，38（2）：163-166.

The expression and mean of Wnt-1 in cervical carcinoma and precancerous lesion

SUN Jinchuan ZHENG Shuming▲
Department of Gynaecology,the Shanxi Cancer Hospital of Shanxi Medical University,Taiyuan 030001,China

ObjectiveTo investigate the expression of Wnt-1 in patients with fibroid and cervical lesion (cervical intraepithelial neoplasia and cervical carcinoma).MethodsFibroid tissue were selected from 30 fibroid patients who underwent hysterectomy from our department in the same period and Cervical intraepithelial neoplasia(CIN)were chose from 63 patients while cervical squanlous cell carcinoma(SCC)were picked from 51 cases of patients,none of them

any treatment such as preoperative radiothe-rapy or chemotherapy.To detect Wnt-1 by immunohistochemistry(SABC)in fibroid tissue,cervical intraepithelial neoplasia and cervical squamlous cell carcinoma.ResultsThe expression positive rate of Wnt-1 protein in cervical lesion tissues were significantly higher than that in fibroid tissues,and the differences were statistically significant(P<0.001).HSIL group were higher than the low-grade lesions,the difference was statistically significant(P=0.048);squamous cell carcinoma of the cervix were higher than low-grade lesions group,the difference was statistically significant(P<0.001);cervical squamous cell carcinoma group were higher than HSIL group (P=0.039).ConclusionWnt-1 protein,the main members of the Wnt signaling pathway,play an important role when it is over expression in the cervical lesion progress.

Cervical intraepithelial neoplasia(CIN);Cervical squanlous cell carcinoma;Wnt signal path;Wnt-1;Immunohistochemist

R737.3

A

1674-4721（2013）04（b）-0042-02

孫錦川（1989-），學(xué)歷：碩士；研究方向：婦科腫瘤方向?！?/p>

2013-02-01 本文編輯：魏玉坡）