金黃活血散對(duì)痛風(fēng)大鼠軟骨降解調(diào)控因子影響的實(shí)驗(yàn)研究

鄭世江 吳明明

山西省中醫(yī)院，山西太原 030012

金黃活血散對(duì)痛風(fēng)大鼠軟骨降解調(diào)控因子影響的實(shí)驗(yàn)研究

鄭世江 吳明明

山西省中醫(yī)院，山西太原 030012

目的 通過金黃活血散對(duì)急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎軟骨降解細(xì)胞因子的調(diào)控，探索外用中藥對(duì)尿酸鹽結(jié)晶造成軟骨損傷保護(hù)作用的機(jī)制和作用。方法 按隨機(jī)對(duì)照法將48只雄性SD大鼠隨機(jī)分為4組：正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、扶他林組（即陽(yáng)性對(duì)照組）、金黃活血散組（即治療組）共4組。造模成功后，各組于造模后第6天即踝關(guān)節(jié)局部給藥物處理。連續(xù)給藥1周后，取血清和軟骨組織檢測(cè)。結(jié)果 MMP-3、TNF-α、IL-1含量測(cè)定：模型組與正常對(duì)照組比較，MMP-3、TNF-α、IL-1含量值明顯升高（P<0.05），扶他林組與金黃活血散組與模型組比較，含量均低于模型組（P<0.05）。結(jié)論 金黃活血散通過對(duì)軟骨降解因子的影響，有助于恢復(fù)關(guān)節(jié)軟骨降解與合成之間的平衡，達(dá)到對(duì)關(guān)節(jié)軟骨的保護(hù)和治療作用。

金黃活血散；痛風(fēng)；軟骨降解；實(shí)驗(yàn)研究

痛風(fēng)屬于一種異質(zhì)性的代謝類疾病，它的病理和臨床表現(xiàn)為高尿酸血癥、關(guān)節(jié)炎、泌尿系結(jié)石、痛風(fēng)結(jié)節(jié)以及痛風(fēng)性腎病。其中痛風(fēng)結(jié)節(jié)屬于痛風(fēng)的特征性病變，是由于血中尿酸鹽結(jié)晶析出、沉淀而造成的一種關(guān)節(jié)局部慢性異物樣反應(yīng)。一般情況下，血尿酸水平超過9.0 mg/dL（535 μmol/L）以上時(shí)，病史在2年以上的患者會(huì)有超過5%的概率出現(xiàn)痛風(fēng)結(jié)節(jié)[1]。老年痛風(fēng)患者因?yàn)榇x障礙，出現(xiàn)痛風(fēng)結(jié)節(jié)的比率較高。研究顯示[2]，具有長(zhǎng)期痛風(fēng)病史，并關(guān)節(jié)周圍出現(xiàn)痛風(fēng)結(jié)節(jié)的患者對(duì)骨關(guān)節(jié)的軟骨和周圍組織的損害比無痛風(fēng)結(jié)節(jié)者要明顯嚴(yán)重。這是因?yàn)橥达L(fēng)結(jié)節(jié)中含有較多的尿酸鹽微結(jié)晶，這些結(jié)晶在病變關(guān)節(jié)周圍引發(fā)非特異性炎癥反應(yīng)，多形核細(xì)胞對(duì)這些結(jié)晶吞噬后，迅速發(fā)生分解和脫顆粒，釋放溶酶體酶，引發(fā)病變關(guān)節(jié)軟骨的降解、骨質(zhì)受到侵蝕性，進(jìn)一步形成缺損、周圍組織紅腫、纖維化以及關(guān)節(jié)的繼發(fā)性變性[3]。金黃活血散在臨床應(yīng)用中取得了顯著的療效，本實(shí)驗(yàn)?zāi)康脑谟谕ㄟ^實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ蛙浌墙到庹{(diào)控因子的影響，明確金黃活血散外敷中藥保護(hù)痛風(fēng)結(jié)節(jié)對(duì)軟骨損傷的機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

健康雄性SD大鼠48只，體重180～220 g，由山西省中醫(yī)院動(dòng)物中心提供。適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，稱重，按體重大小標(biāo)記，查閱隨機(jī)數(shù)字表，分為4組，每組12只，即正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、扶他林組（即陽(yáng)性對(duì)照組）、金黃活血散組（即治療組），定時(shí)定量給顆粒飼料，自由飲水。

1.2 主要試劑及藥品

尿酸鈉晶體為美國(guó)SIGMA-ALDRICH公司產(chǎn)品（214-838-1），購(gòu)于上海國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；IL-1、TNF-α試劑盒（北京北方生物技術(shù)研究所）；酶聯(lián)免疫M(jìn)MP-3試劑盒（北京東亞免疫所）。扶他林軟膏（北京諾華制藥有限公司）。

金黃活血散：姜黃160 g，大黃160 g，黃柏160 g，蒼術(shù)64 g，厚樸 64 g，陳皮 64 g，甘草 64 g，生天南星 64 g，白芷160 g，天花粉 320 g，乳香 160 g，沒藥 160 g，防已 64 g，以上十三味，粉碎成細(xì)粉，過篩，混勻（山西省中醫(yī)院制劑室提供），用時(shí)75%醫(yī)用酒精調(diào)成糊狀。

1.3 動(dòng)物模型建立

通過對(duì)大鼠關(guān)節(jié)注射尿酸鹽結(jié)晶造成局部關(guān)節(jié)的紅腫、炎癥及軟骨的破壞，制成急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎模型，在100 mL 0.9%氯化鈉溶液中溶入2500 mg尿酸鈉晶體顆粒，同時(shí)加溫?cái)嚢璩蓾舛葹?5 mg/mL的尿酸鈉溶液。除正常對(duì)照組外，其余各組均按參照Coderre等的經(jīng)典方法造模[4]，在受試大鼠右后足踝關(guān)節(jié)背側(cè)用6號(hào)注射針從45°方向插入脛骨肌腱內(nèi)側(cè)，針頭抵骨膜，每只大鼠將0.2 mL尿酸鈉溶液注入踝關(guān)節(jié)腔。每天注射1次，連續(xù)5 d，造模成功。

1.4 給藥

造模第6天（即造模成功后第1天）對(duì)各組大鼠右后足踝關(guān)節(jié)局部予以下處理，連續(xù)給藥1周：（1）模型組：模型組給予0.9%氯化鈉溶液外敷2次/日。（2）扶他林組：給予扶他林軟骨外敷2次/日。（3）金黃活血散組：給予金黃活血散外敷2次/日。（4）正常對(duì)照組：正常喂養(yǎng)，不給任何藥物。

1.5 MMP-3，TNF-α，IL-1含量測(cè)定

給藥1周后取大鼠血清及關(guān)節(jié)軟組織標(biāo)本。大鼠血清及關(guān)節(jié)軟組織IL-1、TNF-α、MMP-3含量測(cè)定采用ELISA檢測(cè)法。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理與方法

采用SPSS 17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，符合正態(tài)分布、方差齊性時(shí)，兩組間比較采用獨(dú)立樣本均數(shù)的t檢驗(yàn)，多組間比較采用單因素方差分析，若方差不齊采用秩和檢驗(yàn)。以α=0.05為檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果

模型組與正常對(duì)照組比較，MMP-3值明顯升高（P<0.05），說明此模型關(guān)節(jié)有MMP-3表達(dá)，MMP-3在痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的關(guān)節(jié)發(fā)病中起作用。扶他林組與金黃活血散組與模型組比較，MMP-3含量均低于模型組（P<0.05）。證明二者均有明顯抑制痛風(fēng)關(guān)節(jié)炎局部MMP-3的作用。金黃活血散組與扶他林組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），證明金黃活血散組與扶他林組均有抑制MMP-3的效果，且療效相當(dāng)。

模型組大鼠關(guān)節(jié)軟組織TNF-α含量較正常組明顯升高（P<0.05），血清含量變化無顯著性意義，表明TNF-α在關(guān)節(jié)局部參與痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的病理過程，金黃活血散通過降低關(guān)節(jié)組織TNF-α含量而起到抑制炎癥的作用。

模型組與正常對(duì)照組比較，IL-1表達(dá)水平明顯增高（P<0.05），模型組中IL-1的高表達(dá)，說明其作為炎癥介質(zhì)在滑膜炎癥中起重要作用；金黃活血散組、扶他林組與模型組比較，IL-1表達(dá)的水平均有顯著降低（P<0.05），而金黃活血散組、扶他林組之間相比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。由此可以得出，金黃活血散能抑制MSU誘導(dǎo)的滑膜細(xì)胞IL-1的表達(dá)，作用效果與扶他林相近。見表1。

3 討論

關(guān)節(jié)軟骨屬于透明軟骨，自身沒有淋巴引流，不存在血液供給，幾乎沒有神經(jīng)分布，而軟骨細(xì)胞本身屬于高度分化的組織細(xì)胞，在成熟的關(guān)節(jié)軟骨中，軟骨細(xì)胞本身的裂解能力有限，因此軟骨受到損傷后恢復(fù)能力差[5]。早在1743年Hunter就提出“關(guān)節(jié)軟骨一旦遭到破壞，就不可能得到修復(fù)”的觀點(diǎn)，而受損關(guān)節(jié)軟骨的修復(fù)問題，一直以來都是困擾醫(yī)學(xué)界的難題[6]。正常的關(guān)節(jié)軟骨表面呈現(xiàn)藍(lán)白色，光滑，由軟骨細(xì)胞和軟骨基質(zhì)組成，軟骨細(xì)胞只占1%，軟骨基質(zhì)占99%。軟骨基質(zhì)由蛋白聚糖、膠原纖維和水分構(gòu)成，其中蛋白聚糖較少，占2%～10%，膠原纖維占15%～20%，水分最多，占70%～75%。在膠原纖維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)中散在分布著蛋白聚糖，正常情況下，軟骨細(xì)胞分泌合成的軟骨基質(zhì)降解保持一定平衡，當(dāng)受到外力破壞與炎癥刺激時(shí)，這種平衡被打破，軟骨降解增加而合成減少[7-8]。隨著軟骨修復(fù)理念的建立，各種影響軟骨修復(fù)的因素中，細(xì)胞因子的作用越來越受到人們的關(guān)注。研究發(fā)現(xiàn)，造成軟骨進(jìn)一步破壞的主要原因是降解與合成的失平衡，這種不平衡狀態(tài)受這些調(diào)控細(xì)胞因子的異?；顒?dòng)影響，關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞外基質(zhì)降解代謝活躍最終導(dǎo)致了關(guān)節(jié)的退行性病變。

表1 各組 MMP-3、TNF-α、IL-1 的變化（±s）

表1 各組 MMP-3、TNF-α、IL-1 的變化（±s）

注：與正常組比較，▲P<0.05；與模型組比較，*P<0.05

組別 MMP-3（U/L）TNF-α（pg/mL）IL-1（pg/mL）正常對(duì)照組模型組扶他林組金黃活血散組5.03±1.30 6.25±084▲4.56±0.53*4.28±0.85*20.36±3.25 52.14±8.17▲25.67±5.46*27.39±6.54*32.28±0.13 56.18±8.26▲39.08±6.89*37.42±7.06*

金黃活血散是依據(jù)傳統(tǒng)方劑金黃散改進(jìn)而成的外用散劑，具有清熱解毒、活血化瘀、消腫止痛、散結(jié)通絡(luò)的功效，由于金黃活血散是直接外敷于腫痛的關(guān)節(jié)，對(duì)病變局部的骨和軟組織起到了直接的保護(hù)和治療作用，經(jīng)臨床應(yīng)用有著良好的治療效果。金黃活血散由傳統(tǒng)方劑如意金黃散加味而成。如意金黃散[9]源于明代陳實(shí)功所著《外科正宗》，為《中國(guó)藥典》2010年版一部收載品種，由大黃、姜黃、黃柏、陳皮、蒼術(shù)、厚樸、甘草、生南星、天花粉、白芷等十味中藥配伍組成，具有清熱解毒、消腫止痛之功，用于熱毒瘀滯關(guān)節(jié)、肌膚所致腫痛瘡瘍、丹毒流注，癥見關(guān)節(jié)紅、熱、腫、痛者。綜觀其方，以大黃清熱解毒、化滯行瘀；黃柏清熱燥濕、瀉火解毒；姜黃破血行氣止痛；天南星燥濕化痰、消腫散結(jié)；陳皮理氣化滯；蒼術(shù)、厚樸燥濕化痰消腫；甘草解毒行瘀調(diào)和諸藥[10]。諸藥合用，共起清熱除濕、消腫止痛之功效。金黃活血散是在如意金黃散基礎(chǔ)上加乳香、沒藥、防已而成，乳香、沒藥活血化瘀，防已利水消腫、祛風(fēng)濕而通絡(luò)。諸藥合用共奏清熱解毒、活血化瘀、消腫止痛、散結(jié)通絡(luò)之功[11-13]。

通過對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物MMP-3、TNF-α及IL-1的含量影響，抑制了關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞外基質(zhì)降解，維護(hù)局部關(guān)節(jié)軟骨降解與合成的平衡，對(duì)病變局部的骨和軟組織起到了直接的保護(hù)和治療作用，為臨床進(jìn)一步的研究和應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。

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The experimental research of the effect of golden blood scattered on gout mousce cartilage degradation regulatory factor

ZHENG Shijiang WU Mingming
Traditional Chinese Medicine Hospital of Shanxi Province,Taiyuan 030012,China

ObjectiveTo study the circulation of golden blood scattered to acute gouty arthritis cartilage degradation cytokines,exploring the mechanisms and the function of Chinese medicine for external on the cartilage damage caused by urate crystals.MethodsForty-eight male Sprague-Dawley rats were randomly divided into four groups according to randomized controlled method:normal control group,model control group,voltaren group (that was positive control group),the golden blood circulation scattered group (that was the treatment group),a total of 4 groups.After the modeling,on the sixth day every group were gave drug treatment on local ankle,after one week continuous administration,detection in serum and cartilage tissue.ResultsDetermine the content of MMP-3,TNF-α and IL-1:compared with the normal control group,the content of MMP-3,TNF alpha and IL-1 on the model group increased significantly(P<0.05),the voltaren group and The golden blood circulation scattered group,the content are lower than those of model group (P<0.05).ConclusionThe effect of Golden blood scattered on gout cartilage degradation regulatory factor,the golden scattered through the blood of cartilage degradation factors,contributing to restore the balance between the degradation and synthesis of the articular cartilage,achieving the protective and therapeutic effect of articular cartilage.

Golden blood scattered;Gout;Degradation of cartilage;Experimental research

R-33

A

1674-4721（2013）04（b）-0015-03

山西省中醫(yī)藥研究院課題（編號(hào)：201007）。

鄭世江（1969-），男，醫(yī)學(xué)博士，副主任醫(yī)師。吳明明（1982-），男，醫(yī)學(xué)碩士。

2013-01-28 本文編輯：林利利）