不同濃度血液保存液對(duì)速率法檢測(cè)ALT結(jié)果的影響

田國萍 閆曉紅

（吉林省遼源市紅十字中心血站，吉林 遼源 136200）

不同濃度血液保存液對(duì)速率法檢測(cè)ALT結(jié)果的影響

田國萍 閆曉紅

（吉林省遼源市紅十字中心血站，吉林 遼源 136200）

目的 研究不同濃度血液保存液對(duì)速率法檢測(cè)ALT結(jié)果的影響。方法 對(duì)50例獻(xiàn)血者的血清樣本和血袋導(dǎo)管樣本進(jìn)行檢驗(yàn)，按照隨機(jī)的原則選擇3份ALT異常血樣，用復(fù)方枸櫞酸鈉注射液（血液CPD保存液）進(jìn)行梯度稀釋，每個(gè)濃度檢測(cè)20次，比較分析檢測(cè)結(jié)果。結(jié)果 混入CPD保存液＞1.5%（1∶64）時(shí)檢測(cè)結(jié)果變化有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），混入CPD保存液＜1∶128時(shí)，檢測(cè)結(jié)果無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)論 不同濃度血液保存液對(duì)速率法檢測(cè)ALT結(jié)果有一定的影響，在實(shí)際工作中，需要檢驗(yàn)人員加強(qiáng)責(zé)任心，提高業(yè)務(wù)能力及時(shí)發(fā)現(xiàn)問題，解決異常情況，為臨床提供可靠的診斷依據(jù)。

血液保存液；速率法；影響

丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）主要分布在肝細(xì)胞內(nèi)，當(dāng)肝細(xì)胞收到損害時(shí)，大量ALT進(jìn)入血漿中，使血液內(nèi)ALT活性顯著升高，故ALT常被臨床用于肝膽疾病的診斷[1-2]，ALT的檢測(cè)方法為比色法和速率法，速率法因其簡(jiǎn)單方便，本血液中心在對(duì)獻(xiàn)血員進(jìn)行ALT檢測(cè)時(shí)多采用此方法。本文進(jìn)行了對(duì)比研究，具體內(nèi)容如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

2008年2月至2009年3月來本血液中心無償獻(xiàn)血標(biāo)本50份，采集方法嚴(yán)格按照《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》第3版進(jìn)行，在標(biāo)本采血前排除藥物、飲食、運(yùn)動(dòng)等對(duì)ALT的影響，排除嚴(yán)重脂血、溶血、黃疸患者。

1.2 主要材料與儀器

OLYMPUS AU640全自動(dòng)生化分析儀（日本），MM-1型微量振蕩器（江蘇省姜堰市醫(yī)療器材廠生產(chǎn)）ALT速率法試劑盒（浙江東歐生物工程有限公司，批號(hào)20091102），血液保存液（取自長春泰爾茂醫(yī)用器具有限公司生產(chǎn)的血袋，批號(hào)：20061123X），真空采血管及采血針購自江蘇康健醫(yī)療用品有限公司，所有材料和試劑均有檢定合格標(biāo)識(shí)和報(bào)告，并在有效期內(nèi)使用。

1.3 方法

做好儀器每天的維護(hù)及保養(yǎng)，使儀器處于最佳狀態(tài)，嚴(yán)格按照儀器的操作規(guī)程進(jìn)行操作，從50份血液樣本中隨機(jī)選擇3份ALT異常血樣，用復(fù)方枸櫞酸鈉注射液（血液CPD保存液）進(jìn)行梯度稀釋，每個(gè)濃度檢測(cè)20次，比較分析檢測(cè)結(jié)果。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，采用t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

通過對(duì)3份ALT異常的血液樣本用復(fù)方枸櫞酸鈉注射液（血液CPD保存液）進(jìn)行梯度稀釋后發(fā)現(xiàn)：混入CPD保存液＞1.5%（1∶64）時(shí)檢測(cè)結(jié)果變化有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），混入CPD保存液＜1∶128時(shí)，檢測(cè)結(jié)果無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

3 討 論

血液和其他體液標(biāo)本酶濃度的測(cè)定可以作為醫(yī)師對(duì)疾病診斷的依據(jù)，尤其是丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）作為一種重要的催化酶，存在于肝細(xì)胞中[3-4]，當(dāng)有肝類疾病時(shí)，ALT就會(huì)有相應(yīng)的變化，所以在臨床上測(cè)定ALT的指數(shù)常常作為醫(yī)師對(duì)肝膽疾病診斷的重要依據(jù)，為了防止經(jīng)血傳播病毒性肝炎的發(fā)生，保障用血安全，ALT是GBl8467-2001中規(guī)定對(duì)獻(xiàn)血者必檢的項(xiàng)目之一。

速率法檢測(cè)ALT的基本原理是根據(jù)測(cè)定區(qū)域單位時(shí)間內(nèi)酶作用底物溶液的吸光度變化與酶濃度成比例，ALT酶促反應(yīng)中產(chǎn)生的丙酮酸偶聯(lián)LD催化丙酮酸還原乳酸使NADH變?yōu)镹AD+的指示酶反應(yīng)[5-7]，其廣泛存在于肝臟、心肌、骨骼肌、腎、腦、胰、肺、白細(xì)胞和紅細(xì)胞中，臨床上常用來檢測(cè)對(duì)肝臟、心肌等疾病的檢查，其利用NAD+在340nm處有特異吸光度的特異性連續(xù)監(jiān)測(cè)，NADH被氧化成NAD+的速率（吸光度下降的速率一△A340nn∥△t）其速率與ALT成正比，從而測(cè)得ALT的濃度，當(dāng)樣品中酶的含量特別高時(shí)，高含量的標(biāo)本在反應(yīng)的延遲期內(nèi)已大量消耗基質(zhì)或基質(zhì)耗盡，使反應(yīng)期內(nèi)△A/min很小而產(chǎn)生錯(cuò)誤的結(jié)果，在到達(dá)測(cè)定區(qū)域前底物已經(jīng)耗盡，在到達(dá)測(cè)定區(qū)域時(shí)酶反應(yīng)曲線已成為一條平坦的直線，說明吸光度基本上沒有變化，從而測(cè)定結(jié)果很低甚至為負(fù)值，酶速率法分析時(shí)一定要觀察各標(biāo)本反應(yīng)的起始吸光度，起始吸光度過低或過高和對(duì)提示無反應(yīng)區(qū)間的標(biāo)本應(yīng)稀釋后再重新測(cè)定防止高值漏檢，速率法檢測(cè)ALT一般經(jīng)過4個(gè)步驟，即預(yù)孵育期，遲滯期、線性期和偏離線性期，4個(gè)步驟相輔相成，其檢測(cè)方法省時(shí)、省力、操作簡(jiǎn)單、結(jié)果準(zhǔn)確，在加上近年來全自動(dòng)生化分析儀等精密儀器的運(yùn)用，使其可以一次性處理大批量的標(biāo)本，使其廣泛應(yīng)用于血站系統(tǒng)對(duì)獻(xiàn)血者的初級(jí)篩查。

本文通過分析，匯總各項(xiàng)數(shù)據(jù)后結(jié)果顯示：混入CPD保存液＞1.5%（1∶64）時(shí)檢測(cè)結(jié)果變化有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），混入CPD保存液＜1∶128時(shí)，檢測(cè)結(jié)果無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。說明不同濃度血液保存液對(duì)速率法檢測(cè)ALT結(jié)果有一定的影響，此外血脂和黃疸對(duì)ALT的測(cè)定也有影響。有些患者血清標(biāo)本呈奶油狀，黏稠狀，而血脂中的大量的乳糜微粒對(duì)入射光產(chǎn)生散射，使生化分析儀失靈，無法準(zhǔn)確測(cè)定吸光度的改變，使測(cè)定的結(jié)果出現(xiàn)誤差或者根本無法測(cè)定，黃疸血清膽紅素值超過正常范圍后也影響正常的吸光度值，黃疸標(biāo)本在340nm處有較強(qiáng)的吸光峰，這類的標(biāo)本中高含量的ALT會(huì)導(dǎo)致底物耗盡而在340nm處仍維持較高的吸光度值，應(yīng)稀釋后才能檢測(cè)到最準(zhǔn)確的結(jié)果。綜上所述，ALT檢測(cè)結(jié)果的影響因素較多，為保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性，檢驗(yàn)人員要加強(qiáng)責(zé)任心，嚴(yán)格按照儀器和試劑的說明書進(jìn)行操作，認(rèn)真對(duì)待每個(gè)病人的結(jié)果，善于觀察異常結(jié)果和異常反應(yīng)曲線，及時(shí)解決分析前、分析中和分析后出現(xiàn)的異常情況，多學(xué)習(xí)臨床知識(shí)，加強(qiáng)對(duì)獻(xiàn)血者獻(xiàn)血前的宣傳教育，獻(xiàn)血前獻(xiàn)血者應(yīng)該保證充足的睡眠和充分的營養(yǎng)，檢驗(yàn)時(shí)將檢驗(yàn)與臨床結(jié)合起來，為臨床提供真實(shí)可靠的診斷依據(jù)，確保血液質(zhì)量，避免浪費(fèi)血液資源的現(xiàn)象發(fā)生。

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1671-8194（2013）35-0112-02