禽流感（H5N1亞型）滅活疫苗不同劑量免疫對(duì)海蘭褐蛋雞抗體效價(jià)的影響

魏 軍，孫容非，王建明

（甘肅省莊浪縣畜牧獸醫(yī)局，744600）

為探討政府采購(gòu)專(zhuān)用疫苗—禽流感滅活疫苗免疫劑量對(duì)效價(jià)的影響，為科學(xué)防疫提供依據(jù)，2012年秋結(jié)合秋季強(qiáng)制免疫工作，筆者在莊浪縣域內(nèi)選取了2個(gè)規(guī)模場(chǎng)和2個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)的健康海蘭褐蛋雞作為試驗(yàn)動(dòng)物，進(jìn)行了重組禽流感病毒滅活疫苗(H5N1亞型.Re～5株)不同免疫劑量的免疫效價(jià)對(duì)比試驗(yàn)，現(xiàn)將試驗(yàn)情況總結(jié)如下。

1 試驗(yàn)材料

1.1 疫苗 系政府采購(gòu)動(dòng)物常規(guī)防疫禽流感專(zhuān)用疫苗——重組禽流感病毒滅活疫苗(H5N1亞型.Re～5株)，生產(chǎn)廠家：乾元浩生物有限公司鄭州生物藥廠，批號(hào)：2012008，規(guī)格：250ml/瓶，生產(chǎn)日期：20120629，2～8℃避光保存，無(wú)凍結(jié)。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物 田建民雞場(chǎng)、康鑫蛋雞有限公司、南坪鄉(xiāng)、朱店鎮(zhèn)各選5周齡未免疫禽流感疫苗的健康海蘭褐蛋雞100羽。

1.3 試驗(yàn)試劑 禽流感H5亞型血凝抑制抗原（蘭州獸研所生產(chǎn)，批號(hào)：20120510），陰性血清（蘭州獸研所生產(chǎn)，批號(hào)：20120406），陽(yáng)性血清（蘭州獸研所生產(chǎn)，批號(hào)：20120406）。阿氏液、1%紅細(xì)胞懸液、PBS液等均按照《GB/T18936-2003高致病性禽流感診斷技術(shù)》規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)配制。

1.4 采血器械 5ml一次性針管400余支，真空采血管400個(gè)，酒精棉球若干。

1.5 注射器 使用上海市萬(wàn)佳動(dòng)物保健器械有限公司生產(chǎn)的獸醫(yī)用可調(diào)連續(xù)注射器，在使用前進(jìn)行嚴(yán)格消毒。

1.6 試驗(yàn)器械 無(wú)菌離心管、一次性96孔微量反應(yīng)板、微量移液器、吸頭、量筒、燒杯、加液槽、振蕩器等。

2 試驗(yàn)方法

選取2個(gè)養(yǎng)殖場(chǎng)和2個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)的5周齡以上健康海蘭褐蛋雞為試驗(yàn)動(dòng)物，每個(gè)場(chǎng)及鄉(xiāng)鎮(zhèn)的雞均分為1～4組，每個(gè)組100羽雞，各場(chǎng)及鄉(xiāng)鎮(zhèn)的試驗(yàn)雞均分別進(jìn)行同群飼養(yǎng)。各場(chǎng)的免疫劑量1～4組均分別為0.3mL／羽、0.4mL／羽、0.5mL／羽和0.8mL／羽。疫苗注射后不改變飼養(yǎng)環(huán)境，經(jīng)21d后采血，根據(jù)《GB/T18936-2003高致病性禽流感診斷技術(shù)》規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)要求進(jìn)行抗體效價(jià)檢測(cè)。

根據(jù)《GB/T18936-2003高致病性禽流感診斷技術(shù)》規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn),以完全抑制4單位抗原的血清最高稀釋倍數(shù)作為HI滴度，只有陰性對(duì)照孔血清滴度不大于2log2，陽(yáng)性對(duì)照孔血清滴度誤差不超過(guò)1個(gè)滴度，試驗(yàn)有效。HI效價(jià)≤3 log2(1：8)判定為HI試驗(yàn)陰性；HI效價(jià)=4log2(1：16)判為可疑，需重復(fù)試驗(yàn)；HI效價(jià)5log2，(1：32)判為HI試驗(yàn)陽(yáng)性。免疫群體其抗體效價(jià)陽(yáng)性率在70%以上的判群體免疫抗體效價(jià)合格。

3 試驗(yàn)結(jié)果

田建民雞場(chǎng)1～4試驗(yàn)組免疫雞抗體效價(jià)陽(yáng)性率分別為16%、55%、80%、90%；康鑫蛋雞有限公司1～4試驗(yàn)組免疫雞抗體效價(jià)陽(yáng)性率分別15%、54%、78%、88%；鄉(xiāng)鎮(zhèn)農(nóng)戶散養(yǎng)戶1～4試驗(yàn)組免疫雞的抗體效價(jià)陽(yáng)性率分別為南坪鄉(xiāng)12%、51%、82%、91%和朱店鎮(zhèn)11%、52%、83%、92%。根據(jù)試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)要求,免疫群體其抗體效價(jià)陽(yáng)性率在70%以上的判群體免疫抗體效價(jià)合格。本次試驗(yàn)中免疫劑量為0.5mL／羽和0.8ml/羽的試驗(yàn)組均達(dá)到免疫合格要求，其余2組均未達(dá)標(biāo)。

4 分析討論

4.1 本試驗(yàn)所選擇的試驗(yàn)動(dòng)物為各養(yǎng)殖場(chǎng)的同群雞，各場(chǎng)在免疫前后都分別進(jìn)行同群飼養(yǎng)。這樣就使同一養(yǎng)殖場(chǎng)雞的飼養(yǎng)水平、飼養(yǎng)環(huán)境均相同，僅免疫劑量不同，結(jié)果免疫抗體效價(jià)合格率差異較大，高的達(dá)到92%，而低的僅11%，這說(shuō)明疫苗免疫劑量對(duì)同群試驗(yàn)雞免疫抗體效價(jià)的產(chǎn)生影響最大。

4.2 本試驗(yàn)中，劑量為0.5ml／羽的試驗(yàn)組抗體效價(jià)陽(yáng)性率平均為80.75%，最低78%，完全達(dá)到試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)中群體免疫陽(yáng)性率達(dá)70%以上的免疫合格要求，而疫苗使用說(shuō)明中的參考劑量要求也是5周齡以上的注射O.5mL／羽。以上充分表明，只要嚴(yán)格按照使用說(shuō)明的劑量進(jìn)行免疫，就能達(dá)到免疫效果的要求，劑量過(guò)小產(chǎn)生的抗體效價(jià)陽(yáng)性率不能達(dá)標(biāo)，過(guò)大又造成不必要的浪費(fèi)。

4.3 因注射禽流感疫苗時(shí)使用的是連續(xù)注射器，就要求對(duì)注射器嚴(yán)格清洗和消毒，特別是注射器注射劑量要嚴(yán)格根據(jù)雞的大小適時(shí)調(diào)校準(zhǔn)確，以保證免疫效果。

4.4 試驗(yàn)中，0.8ml/羽試驗(yàn)組免疫效價(jià)相對(duì)較高，合格率均達(dá)70%以上，達(dá)到了免疫合格標(biāo)準(zhǔn)。但是否與免疫抑制臨界值有關(guān)，有待進(jìn)一步探討。

[1]劉秀娟，高莉莉，高娟.產(chǎn)蛋雞免疫失敗的原因及對(duì)策[J].中國(guó)畜牧獸醫(yī)文摘,2012,6:13-14.

[2]王健，劉華芳.談?wù)勆唐反半u的免疫[J].農(nóng)業(yè)技術(shù)與裝備,2011,7:16-17.