熟地黃多糖提取技術(shù)及藥理作用研究進(jìn)展

張副興 裘生梁 祝雨田 浙江中醫(yī)藥大學(xué) 杭州 310053

陳培豐 浙江省中醫(yī)院腫瘤科

地黃始見于《神農(nóng)本草經(jīng)》，為玄參科植物地黃Rehmannia glutinosa Libosch的新鮮或干燥塊根，臨床分鮮地黃、生地黃、熟地黃三種。熟地黃具有補(bǔ)血滋陰、填精益髓之功效，治療血虛、肝腎陰虛諸癥。熟地黃多糖是熟地黃的主要作用成分，作為一類重要的天然大分子化合物，具有增強(qiáng)免疫、抗氧化、抗突變等多種作用，對此國內(nèi)學(xué)者進(jìn)行了深入的研究，現(xiàn)就熟地黃多糖的研究進(jìn)展綜述如下。

1 提取技術(shù)

1.1 水提醇沉法 崔瑛等[1]用正交實(shí)驗(yàn)法，以加水量、提取時(shí)間、提取次數(shù)作為三個(gè)因素，以干膏收率和多糖含量為指標(biāo)，采用單因素實(shí)驗(yàn)，篩選醇沉濃度和氯化鈣脫蛋白最佳濃度。結(jié)果發(fā)現(xiàn)各因素對多糖含量和收膏率綜合評分并沒有顯著性影響，醇沉濃度以80%最優(yōu)，氯化鈣脫蛋白最佳濃度為7%。熟地黃粗多糖最佳提取工藝為加8倍量水，提取2次，每次4h。

1.2 超聲波提取法 林春燕等[2]探討熟地黃的水溶性多糖超聲提取的最佳工藝條件，采用正交設(shè)計(jì)優(yōu)化，以多糖得率和多糖含量為指標(biāo)，考察料液比、提取時(shí)間、提取溫度、提取次數(shù)及其交互作用對多糖提取的影響。以葡萄糖做標(biāo)準(zhǔn)曲線，測定水溶性熟地黃多糖含量。得出熟地黃的水溶性多糖最佳提取工藝條件為:以蒸餾水為提取溶劑，提取時(shí)間60min，料液比為1：30，提取溫度為60℃，提取3次。該法工藝簡單，提取效率高，適合提取熟地黃中水溶性多糖。

1.3 超聲波提取法與加熱提取法比較 陳傳福等[3]研究在不同的實(shí)驗(yàn)條件下，對超聲波和加熱提取法進(jìn)行比較，結(jié)果表明前者有較高的提取效率。在超聲波作用下，熟地黃粉碎的粒度為40目，最佳提取條件為：料液比=1g:56mL，提取溫度64.5℃，提取時(shí)間3.1min。實(shí)驗(yàn)重復(fù)性較好。

1.4 微波提取法 陳韓英等[4]采用微波法提取、硫酸-苯酚法測定熟地黃中多糖的含量，測得熟地黃多糖含量為9.27%，稱微波法提取熟地黃中的多糖，時(shí)間短，提取率高。

2 藥理作用

2.1 增強(qiáng)機(jī)體造血 黃霞等[5]觀察熟地黃水煎劑（RGD）、熟地黃多糖（RGP）、熟地黃非多糖（RGNP）對小鼠外周血象的影響，發(fā)現(xiàn)熟地黃多糖為其補(bǔ)血作用有效部位。進(jìn)一步觀察熟地黃多糖對模型小鼠外周血象、骨髓造血干細(xì)胞、骨髓有核細(xì)胞的影響。發(fā)現(xiàn)熟地黃多糖對不同血虛模型小鼠外周血象、骨髓有核細(xì)胞下降均有拮抗作用，對小鼠造血干細(xì)胞具有促進(jìn)增殖、分化作用[6]。

苗明三等[7]以放血與環(huán)磷酰胺并用所致血虛模型大鼠為研究對象，探討懷熟地黃多糖補(bǔ)血作用機(jī)制，發(fā)現(xiàn)懷熟地黃多糖可顯著提高此血虛模型大鼠的血象，提高模型大鼠血白介素-2（IL-2）、白介素-6（IL-6）、促紅細(xì)胞生成素（EPO）的水平。

2.2 增強(qiáng)機(jī)體的免疫力 黃霞等[8]用熟地黃多糖灌服小鼠，可促進(jìn)小鼠血清溶血素的生成，明顯增強(qiáng)小鼠2，4-二硝基氯苯（DNCB）誘導(dǎo)的遲發(fā)型超敏反應(yīng)，提高小鼠巨噬細(xì)胞吞噬指數(shù)，而對吞噬系數(shù)無明顯影響，說明熟地黃多糖具有提高小鼠免疫功能的作用。

李發(fā)勝等[9]分別用綿羊紅細(xì)胞（SRBC）和卵清蛋白為抗原注射小鼠后，將熟地黃多糖分為3個(gè)劑量灌服小鼠7天加強(qiáng)免疫，結(jié)果顯示中劑量實(shí)驗(yàn)組小鼠SRBC抗體水平、卵清蛋白抗體、IL-2激發(fā)水平顯著高于對照組，顯示熟地黃多糖對小鼠機(jī)體免疫有增強(qiáng)作用。

2.3 抗氧化作用 苗明三等[10]應(yīng)用D-半乳糖復(fù)制小鼠衰老模型，觀察（懷）熟地黃多糖的抗氧化作用，結(jié)果發(fā)現(xiàn)（懷）熟地黃多糖能顯著提高該模型小鼠血超氧化物歧化酶（SOD）、過氧化氫酶（CAT）及谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-PX）活力，降低血漿、腦勻漿及肝勻漿過氧化脂（LPO）水平，顯示熟地黃多糖有較好的抗氧化作用。

2.4 抗突變作用 梁穎等[11]采用小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核試驗(yàn)、骨髓細(xì)胞染色體畸變試驗(yàn)、骨髓細(xì)胞姐妹染色單體交換試驗(yàn)方法評價(jià)熟地黃多糖的抗突變作用，結(jié)果發(fā)現(xiàn)熟地黃多糖對環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)的小鼠微核率、染色體畸變率、姐妹染色單體交換率具有抑制作用，說明熟地黃多糖具有抗突變活性，并推測熟地黃多糖可以通過抵抗誘變劑對染色體造成的損傷，達(dá)到對機(jī)體遺傳物質(zhì)的保護(hù)作用，避免突變發(fā)生，最終起到抗腫瘤作用。

2.5 中樞抑制作用 崔豪等[12]在研究熟地黃及其多糖的中樞抑制作用時(shí)，發(fā)現(xiàn)熟地黃煎液、熟地黃多糖均能抑制小鼠的自發(fā)活動(dòng)；縮短閾下劑量戊巴比妥鈉誘導(dǎo)的小鼠睡眠潛伏期，延長睡眠時(shí)間；延緩異煙肼所致驚厥的發(fā)作潛伏期，減少動(dòng)物死亡數(shù)。說明熟地黃煎液、熟地黃多糖對中樞神經(jīng)系統(tǒng)具有抑制作用。

2.6 逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥 沈朋等[13]研究四物合劑逆轉(zhuǎn)人紅白血病細(xì)胞株K562/ADM多藥耐藥作用的藥效活性組分時(shí)，發(fā)現(xiàn)熟地黃粗多糖對K562/ADM的耐藥性有明顯的逆轉(zhuǎn)作用，其逆轉(zhuǎn)倍數(shù)與對照組（無逆轉(zhuǎn)劑）相比有顯著差異，并且與主要活性部位的逆轉(zhuǎn)作用無明顯差異。說明熟地黃粗多糖能逆轉(zhuǎn)K562/ADM細(xì)胞的多藥耐藥性，是四物合劑逆轉(zhuǎn)K562/ADM多藥耐藥性的主要活性組分之一。

3 臨床研究

趙小娟等[14]用小劑量環(huán)孢素A及熟地黃多糖口服液聯(lián)合康力龍治療慢性再生障礙性貧血，發(fā)現(xiàn)治療組療效好于對照組，并有顯著性差異，治療中未發(fā)現(xiàn)熟地黃多糖有任何毒副作用。

許穎富等[15]觀察熟地黃多糖口服液對化療藥物致外周血象的影響，將48例患者隨機(jī)分為熟地黃多糖口服液治療組及對照組，分別在化療期14天內(nèi)每周查血象一次，結(jié)果顯示RGP可對抗臨床化療時(shí)白細(xì)胞下降，對骨髓有明顯保護(hù)作用。

劉超等[16]應(yīng)用熟地黃多糖口服液治療中晚期食道癌化療損傷30例，并與貞芪扶正沖劑治療15例比較，對外周血象的保護(hù)作用治療組優(yōu)于對照組。提示熟地黃多糖口服液對中晚期食道癌化療損傷具有一定的防護(hù)作用，對骨髓造血系統(tǒng)有明顯保護(hù)作用。

4 問題與展望

綜上所述，熟地黃多糖的提取技術(shù)逐漸完善。經(jīng)研究，其功能較多，能夠治療多種疾病，應(yīng)用前景十分廣闊。但現(xiàn)有研究對熟地黃多糖的提取與純化工藝、藥理活性與毒性、活性成分、分子結(jié)構(gòu)等研究尚不夠深入。如能進(jìn)一步深入研究，解決以上諸多問題，一定有更開闊的開發(fā)和應(yīng)用前景，帶來更好的經(jīng)濟(jì)和社會(huì)效益。

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