硝普鈉和磺胺嘧啶銀聯(lián)合應(yīng)用對(duì)大鼠深I(lǐng)I度燒傷創(chuàng)面愈合的影響

[摘要]目的：研究硝普鈉、磺胺嘧啶銀及二者合用對(duì)深Ⅱ度燒傷皮膚創(chuàng)面愈合的影響。方法：100只Wistar大鼠背部深Ⅱ度燒傷創(chuàng)面，隨機(jī)分成0.9%氯化鈉注射液組、1%磺胺嘧啶銀霜組、1mmol/L硝普鈉組和1%磺胺嘧啶銀霜+1mmol/L硝普鈉組。每組25只大鼠。動(dòng)態(tài)觀察燒傷后不同時(shí)間點(diǎn)創(chuàng)面細(xì)胞增殖周期、羥脯氨酸含量及創(chuàng)面組織愈合情況，計(jì)算創(chuàng)面愈合率。結(jié)果：傷后隨時(shí)間推移磺胺嘧啶銀霜+硝普鈉組創(chuàng)面愈合率高于其他三組；傷后第10天，磺胺嘧啶銀霜+硝普鈉組創(chuàng)面羥脯氨酸含量、細(xì)胞S期百分比達(dá)到峰值，明顯高于0.9%氯化鈉注射液（P<0.01），磺胺嘧啶銀霜組、硝普鈉組之間比較無顯著差異 （P>0.05）。結(jié)論： 磺胺嘧啶銀霜和硝普鈉合用可有效促進(jìn)大鼠深Ⅱ度燒傷創(chuàng)面愈合。

[關(guān)鍵詞]燒傷；創(chuàng)面愈合；磺胺嘧啶銀霜；硝普鈉

[中圖分類號(hào)]R644 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A [文章編號(hào)]1008-6455（2013）01-0059-03

Effect of sodium nitroprusside combined with silver sulfadiazine on deep Ⅱ degree burn wound healing in rats

LI Dong-jun，ZHAO Hong-liang，LI Ming，SUN Rui-peng，ZHENG Wen-li，ZHAO Lian-kui

（Department of Burns and Plastic Surgery，The first Hospital of Shijiazhuang，Shijiazhuang 050011，Hebei，China）

Abstract Objective To study the influence of sodium nitroprusside combined with silver sulfadiazine on deep Ⅱ degree burns on the rats skin wound healing. Methods 100 Wistar rats with deep second-degree burn wounds on the backs were divided into four groups，the saline group，1% sulfadiazine Cream group，1mmol / L sodium nitroprusside group and 1% sulfadiazine Cream +1 mmol /L sodium nitroprusside group.Each group has 25 rats.At different time，cell cycle， hydroxyproline content and healing，wound healing rate calculation of burn wounds tissue were observed. Results Burn wounds treated with Sulfadiazine Cream + SNP，the wounds healing were faster than the other groups. After 10d，sulfadiazine Cream + SNP group wound hydroxyproline content，the percentage of cells in S-phase peak was significantly higher than saline group（P<0.01）.Between sulfadiazine Cream group，and sodium nitroprusside group was no significant difference （P>0.05）. Conclusion Sulfadiazine combined with sodium nitroprusside can effectively promote deep Ⅱ degree burn wounds in rats healing.

Key words：burn wound healing；sodium nitroprusside；silver sulfadiazine

燒傷創(chuàng)面是一種伴有壞死的組織缺損性損傷，其愈合過程有獨(dú)特的規(guī)律。及時(shí)清除壞死組織、及早封閉創(chuàng)面是治療深度燒傷的基本原則。深Ⅱ度燒傷創(chuàng)面可通過殘留的上皮組織上皮化而自行愈合。一般采用保守療法，療程長(zhǎng)，愈合后瘢痕嚴(yán)重，特別是大面積深Ⅱ度燒傷在脫痂過程中易發(fā)生嚴(yán)重感染，甚至危及生命。因此深Ⅱ度燒傷創(chuàng)面的處理一直是臨床棘手的問題。以往的研究證實(shí)硝普鈉對(duì)燒傷創(chuàng)面具有促進(jìn)愈合、抗炎作用[1]，但硝普鈉與臨床常用藥磺胺嘧啶銀聯(lián)用是否對(duì)深I(lǐng)I度燒傷創(chuàng)面具有更好的療效，目前少見報(bào)道。本文通過建立大鼠背部深I(lǐng)I度燒傷模型，創(chuàng)面給予硝普鈉（Sodium Nitroferricyanide，SNP）、磺胺嘧啶銀（Sulfadiazinmu Argenteum，SD-Ag）濕敷，觀察外源性一氧化氮（nitric oxide，NO）在燒傷愈合過程中對(duì)創(chuàng)面愈合的影響，探討其機(jī)制，為臨床上應(yīng)用硝普鈉促進(jìn)創(chuàng)面愈合提供理論依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料：清潔級(jí)健康雄性Wistar大鼠100只，體重（200±20）g，由河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。注射用硝普鈉（北京雙鶴現(xiàn)代醫(yī)藥技術(shù)有限責(zé)任公司）、1%磺胺嘧啶銀霜（廣東恒健制藥有限公司）、羥脯氨酸測(cè)試盒（南京建成生物工程研究所）、流式細(xì)胞儀（美國(guó)BD公司）、765MC型分光光度儀（上海光學(xué)儀器廠）。

1.2 方法

1.2.1 制作背部深Ⅱ度燒傷模型后[2]，腹腔注射乳酸鈉林格輸液5ml進(jìn)行復(fù)蘇。

1.2.2. 實(shí)驗(yàn)分組將大鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為0.9%氯化鈉注射液組、1%SD-Ag霜組、1mmol/LSNP組和1%SD-Ag霜+1mmol/LSNP組。每組25只分別給予0.9%氯化鈉注射液、1%SD-Ag霜、1mmol/LSNP和1%SD-Ag霜+1mmol/LSNP治療。用已配好的藥液浸透紗布外敷傷口，再加蓋無菌紗布包扎，1次/天換藥。換藥至傷后21天。換藥時(shí)先以0.05%醋酸洗必泰清洗創(chuàng)面，盡可能清除創(chuàng)面壞死組織。燒傷動(dòng)物分別在傷后3、7、10、14、21天在無菌條件下進(jìn)行創(chuàng)面活檢取材，每個(gè)時(shí)相點(diǎn)每組各取5個(gè)創(chuàng)面，活檢取材用于羥脯氨酸含量和細(xì)胞周期測(cè)定，同時(shí)對(duì)創(chuàng)面愈合時(shí)間、愈合率進(jìn)行觀察比較。

1.3 觀察指標(biāo)

1.3.1創(chuàng)面觀察：創(chuàng)面大體觀察：換藥時(shí)觀察創(chuàng)面有無水腫、滲出，分泌物的多少，創(chuàng)周有無紅腫等。創(chuàng)面愈合時(shí)間：傷后3天開始，每天觀察各組大鼠燒傷創(chuàng)面愈合情況，創(chuàng)面被上皮完全覆蓋時(shí)即為創(chuàng)面愈合時(shí)間。創(chuàng)面愈合率：傷后7天、10天、14天、21天按照Nagelschmidt法觀察創(chuàng)面愈合情況。按公式計(jì)算創(chuàng)面愈合率：創(chuàng)面愈合率=（原始創(chuàng)面面積-未愈合面積）/原始創(chuàng)面面積×100%

1.3.2 創(chuàng)面羥脯氨酸含量測(cè)定 取適量創(chuàng)面肉芽組織，充分水解后調(diào)pH值至6.0～6.8，按照羥脯氨酸測(cè)定試劑盒說明書操作并計(jì)算羥脯氨酸含量[2]。

1.3.3 創(chuàng)面細(xì)胞周期測(cè)定采用流式細(xì)胞檢測(cè)方法檢測(cè)S期生長(zhǎng)細(xì)胞所占比例[3]。

1.3.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析由采用spss12.0進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)量資料數(shù)據(jù)以x±s表示，多因素方差分析；率的比較行χ2分析。

2 結(jié)果

2.1. 創(chuàng)面觀察 傷后1～2天0.9%氯化鈉注射液組大鼠創(chuàng)面比SD-Ag霜組、SNP組及SD-Ag霜+SNP組水腫嚴(yán)重，滲出液多，創(chuàng)面周圍紅腫最為明顯，其中SD-Ag霜+SNP組組反應(yīng)輕微。傷后3天，后三組燒傷創(chuàng)面均形成干痂，痂下無異常分泌物，無其他不良反應(yīng)。

2.2 創(chuàng)面愈合時(shí)間 0.9%氯化鈉注射液組為（21.46±0.83）天，愈合時(shí)間最長(zhǎng)；SD-Ag霜組為（15.00±0.54）天、SNP組為（14.00±0.88）天，而SD-Ag霜+SNP組為（12.00±0.78）天。后三組與0.9%氯化鈉注射液組比較差異顯著（P<0.01）。SD-Ag霜+SNP組分別與SD-Ag霜組、SNP組比較，差異有顯著性（P<0.01）。

2.3. 創(chuàng)面愈合率從傷后7～21天SD-Ag霜+SNP組創(chuàng)面愈合率高于0.9%氯化鈉注射液組、SD-Ag霜組、SNP組，0.9%氯化鈉注射液組與SD-Ag霜組、SNP組、SD-Ag霜+SNP組比較差異均有非常顯著性意義（F=32.76，P<0.0001），兩兩比較除SD-Ag霜組與SNP組兩者比較無顯著性差異外，余兩兩比較有非常顯著意義（P<0.01）。愈合率隨時(shí)間推移，明顯升高（F=134.8，P<0.0001）。見圖1。

2.4. 羥脯氨酸含量正常大鼠皮膚OHP含量為：15.8±3.2。傷后第3、7、10、14、21天四組創(chuàng)面羥脯氨酸含量從傷后第3天到第14天進(jìn)行性增加，傷后第21天，四組創(chuàng)面OHP含量漸下降，下降幅度不盡相同。統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，從傷后7～14天 SD-Ag霜+SNP組創(chuàng)面羥脯氨酸含量均顯著高于0.9%氯化鈉注射液組、SD-Ag霜組、SNP組 （F=3.519，P<0.01）。SD-Ag霜+SNP組在第14天羥脯氨酸含量下降明顯，0.9%氯化鈉注射液組下降幅度顯著低于三處理組（P<0.05）。SD-Ag霜+SNP組峰值在10天。21天 0.9%氯化鈉注射液組OHP含量下降幅度低于其他三組。見圖2。

2.5 創(chuàng)面組織細(xì)胞周期的變化經(jīng)測(cè)定正常皮膚細(xì)胞周期S期細(xì)胞百分比：（29.12±1.32）%。創(chuàng)面組織S期細(xì)胞百分比：傷后第3天，SD-Ag霜組、SNP組和SD-Ag霜+SNP組S期細(xì)胞百分比高于0.9%氯化鈉注射液組（P<0.05）；傷后第10天，SD-Ag霜+SNP組S期細(xì)胞百分比達(dá)到最高值，顯著高于0.9%氯化鈉注射液（P<0.01）；傷后第14天，0.9%氯化鈉注射液組S期細(xì)胞百分比達(dá)到最高值，高于該時(shí)間點(diǎn)SD-Ag霜、SNP組的S期細(xì)胞百分比（P<0.05），但是其峰值低于SD-Ag霜+SNP組的峰值；傷后第21天，四組S期細(xì)胞百分比均下降，與正常細(xì)胞的S期細(xì)胞百分比沒有明顯差異，但0.9%氯化鈉注射液組細(xì)胞S期百分比仍高于其余三組（P<0.05），見圖3。

3 討論

一氧化氮（nitric oxide， NO）作為一種信號(hào)分子，在體內(nèi)具有廣泛的生物學(xué)作用；近年來研究發(fā)現(xiàn)，在創(chuàng)傷及創(chuàng)面愈合過程中NO起著重要作用，當(dāng)NO合成受到抑制時(shí)，傷口延遲愈合；而減少過度纖維化組織中NO的合成，可以預(yù)防瘢痕的形成。SNP在液相中能自發(fā)地釋放NO，是一種應(yīng)用較早的NO供體。低濃度的SNP可促進(jìn)創(chuàng)傷早期成纖維細(xì)胞的增殖及膠原的合成速度，從而加快創(chuàng)面修復(fù)[3]。SD-Ag于上世紀(jì)六十年末開始應(yīng)用于燒傷創(chuàng)面治療，是目前國(guó)內(nèi)外應(yīng)用最為廣泛的燒傷外用藥，它保持了磺胺嘧啶和硝酸銀二者的抗菌作用，局部應(yīng)用除有一過性疼痛外，其它副作用較少，用于燒傷暴露療法，能預(yù)防和控制創(chuàng)面感染，同時(shí)有收斂作用，促進(jìn)創(chuàng)面干燥、結(jié)痂[5]。SNP、SD-Ag二者聯(lián)用是否對(duì)深I(lǐng)I度燒傷創(chuàng)面具有更好的療效，目前少見報(bào)道。

創(chuàng)面愈合的基本過程包括炎癥反應(yīng)、細(xì)胞增殖和細(xì)胞外基質(zhì)重建，任何影響這些過程的因素都可能影響創(chuàng)面愈合。創(chuàng)面愈合的主要表現(xiàn)為膠原的沉積和修復(fù)， OHP是膠原的主要成份，它在膠原中占有恒定比例，因此可以通過測(cè)定OHP含量確定膠原含量，是創(chuàng)面愈合的主要指標(biāo)之一。本實(shí)驗(yàn)OHP檢測(cè)結(jié)果表明，SD-Ag霜聯(lián)合SNP應(yīng)用，OHP含量升高快，且達(dá)到峰值時(shí)間較早，說明SD-Ag霜+SNP組創(chuàng)面愈合較其余三組早，應(yīng)用SNP能明顯促進(jìn)燒傷創(chuàng)面膠原合成及成纖維細(xì)胞增殖。已往的研究中證實(shí)，延遲愈合的糖尿病傷口中 NO減少，如應(yīng)用 NO 供體可以使傷口中NO 含量接近正常水平，改善了糖尿病人的傷口愈合狀況[6-7]。另一方面，如在傷口表面或體內(nèi)應(yīng)用競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑抑制NOS合成NO，則可以降低膠原沉積并減弱愈合強(qiáng)度，使各種創(chuàng)傷模型的延遲愈合[8-9]。

此外，燒傷創(chuàng)面修復(fù)是以皮膚細(xì)胞不斷增殖活化為基礎(chǔ)，當(dāng)細(xì)胞增殖分裂時(shí)， G0/G期靜止的細(xì)胞不斷進(jìn)入DNA合成期S期，S期細(xì)胞比例明顯增加，這提示細(xì)胞增殖活躍。應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)S期細(xì)胞比例可以反映燒傷創(chuàng)面細(xì)胞增殖的強(qiáng)弱。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明SD-Ag霜+SNP組細(xì)胞S期百分比的峰值出現(xiàn)較0.9%氯化鈉注射液組早且高于0.9%氯化鈉注射液組峰值，說明SD-Ag霜+SNP組細(xì)胞增殖活躍；而且創(chuàng)面觀察發(fā)現(xiàn)SD-Ag霜+SNP組結(jié)痂較0.9%氯化鈉注射液組早，創(chuàng)面愈合天數(shù)短。實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示： SD-Ag霜+SNP聯(lián)合應(yīng)用可能是通過促進(jìn)膠原合成及細(xì)胞增殖，進(jìn)而促進(jìn)深Ⅱ度燒傷創(chuàng)面的愈合。

綜上所述，對(duì)于深Ⅱ度燒傷，本實(shí)驗(yàn)雖然證實(shí)SD-Ag霜SNP聯(lián)合增加膠原蛋白的合成，加速上皮修復(fù)，促進(jìn)了燒傷創(chuàng)面的愈合，為臨床醫(yī)師治療深Ⅱ度燒傷提供更多選擇，但其詳細(xì)機(jī)制有待進(jìn)一步深入研究。

[參考文獻(xiàn)]

[1]張培培，仇樹林.NO在創(chuàng)傷愈合過程中的作用[J].中國(guó)美容醫(yī)學(xué)，2005，14（6）：765-767.

[2]陳新龍，余明星，陳文山，等.燒傷創(chuàng)面成纖維細(xì)胞周期、羥脯氨酸和膠原比例動(dòng)態(tài)變化[J].中華外科雜志，2000，3（2）：148-150.

[3]宋平根，李素文.流式細(xì)胞術(shù)的原理和應(yīng)用[M].北京：北京師范大學(xué)出版社，1992： 140-159.

[4]Isenberg JS， Ridnour LA， Espey M G， et al. Nitric oxide in wound-healing[J]. Microsurgery， 2005，25（5）：442-451.

[5]Miller AC， Rashid RM， Falzon L，et al. Silver sulfadiazine for the treatment of partial-thickness burns and venous stasis ulcers[J].J Am Acad Dermatol， 2012 66（5）：159-165.

[6]Witte MB， Thornton FJ， Tantry U， et al. L-A rginine supple-mentation enhances diabetic wound healing：involvement of the nitric oxide synthase and arginase pathways [J].Metabolism，2002，51（10）：1269-1273.

[7]Shi HP， Most D， Efron DT， et al.Supplemental L-arginine enhances wound healing in diabetic rats[J]. Wound Repair Regen，2003，11（3）：198-203.

[8]劉霞，高峰，谷振勇，創(chuàng)傷愈合的分子機(jī)制研究進(jìn)展[J].醫(yī)學(xué)綜述，2005，11（3）：199-202.

[9]Zhu H， Wei X， Bian K， et al. Effects of nitric oxide on skin burn wound healing[J].J Burn Care Res，2008，29（5）：804-814.