IFN-γ\\IL- 32 \\IL-1β在原因不明習(xí)慣性流產(chǎn)中的臨床意義

[摘要] 目的 探討干擾素-γ、白介素-32和白細(xì)胞介素-1β在原因不明習(xí)慣性流產(chǎn)中的表達(dá)及臨床意義。 方法 ELISA法檢測(cè)URSA組、正常妊娠組和健康對(duì)照組血清中IFN-γ、IL-32和IL-1β的濃度，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 結(jié)果 URSA組IFN-γ、IL-32和IL-1β的血清濃度水平顯著高于健康對(duì)照組和正常妊娠組（Ｐ ＜ ０．０１）；正常妊娠組較健康對(duì)照組的IFN-γ、IL-32和IL-1β血清濃度水平均顯著下降（Ｐ均＜０．０１）。 結(jié)論 IFN-γ、IL-1β、IL-32反饋環(huán)可能參與了URSA的發(fā)生，對(duì)其血清濃度的檢測(cè)可作為監(jiān)測(cè)URSA病人治療效果和再次妊娠結(jié)局的指標(biāo)。

[關(guān)鍵詞] URSA；干擾素-γ；白介素-32；白細(xì)胞介素-1β

[中圖分類號(hào)] R741.21[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B[文章編號(hào)] 1673-9701（2012）10-0082-02

Clinical significance of IFN-γ、IL-32、IL-1β in unexplained recurrent spontaneous abortion

SUN Congcong LIANG Yujie CHEN Qian ZHU Dan ZHU Yanle ZHENG Keqiong YAN Luoyuan

Department of Gynaecology and Obstetrics，the Affiliated Yueqing Hospital of Wenzhou Medical College，Yueqing 325600， China

[Abstract] Objective To explore the expression and the clinical significance of IFN-γ，IL-32 and IL-1β in Unexplained recurrent spontaneous abortion. Methods In method of ELISA to detect the serum level of IFN-γ， IL-32 and IL-1β in healthy control group， URSA group， pathological pregnancy group. Results The serum level of IFN-γ，IL-32 and IL-1β in URSA group are significantly increased as compared with healthy control group and pathological pregnancy group(P ＜0.01). The serum level of IFN-γ、IL-32 and IL-1β are significantly lower in pathological pregnancy group than in the healthy control group (P ＜ 0.05). Conclusion The IFN-γ，IL-32，IL-1βfeedback loop maybe involved in Unexplained recurrent spontaneous abortion.

[Key words] Unexplained recurrent spontaneous abortion (URSA); IFN-γ; IL-32; IL-1β

原因不明復(fù)發(fā)性流產(chǎn)（uｎｅｘplained recurrent spontaneous abortion， URSA）是指與同一性伴侶連續(xù)發(fā)生3次或3次以上自然流產(chǎn)，且不存在染色體、解剖、內(nèi)分泌和自身免疫功能異常以及生殖道感染等病因。生殖免疫學(xué)觀點(diǎn)認(rèn)為，正常妊娠的維持有賴于妊娠婦女對(duì)胚胎半同種抗原的免疫耐受，一旦這種母胎免疫耐受被打破，將導(dǎo)致流產(chǎn)的發(fā)生。正常妊娠過程中，Th1/Th2型細(xì)胞因子保持一定的平衡，其中Th2型細(xì)胞因子占優(yōu)勢(shì)[1]，母體內(nèi)IFN-γ-IL-32-IL-1β正反饋環(huán)路應(yīng)受到抑制，可確保母嬰免疫耐受。一旦此正反饋環(huán)失去控制，無限放大Th1模式，最終可能導(dǎo)致URSA的發(fā)生[2]。本研究通過檢測(cè)IFN-γ、IL-32和IL-1β在原因不明習(xí)慣性流產(chǎn)中的血清濃度水平，以探討IFN-γ、IL-32、IL-1β反饋環(huán)在原因不明習(xí)慣性流產(chǎn)中的作用。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象

URSA組60例，均為本院婦產(chǎn)科門診患者，所有病例均經(jīng)過詳細(xì)詢問病史及體格檢查，同時(shí)具備以下條件：①連續(xù)發(fā)生 3 次或 3 次以上原發(fā)性早期自然流產(chǎn)（３~６次），最后一次發(fā)生在 1 年以內(nèi)；②夫婦雙方染色體檢查正常；③女方生殖道檢查無解剖學(xué)畸形；④生殖內(nèi)分泌激素水平測(cè)定及診斷性刮宮檢查排除內(nèi)分泌因素；⑤對(duì)宮頸分泌物進(jìn)行PCR 檢查排除生殖系統(tǒng)感染；⑥抗磷脂抗體等自身免疫性抗體檢查結(jié)果顯示陰性；⑦未進(jìn)行過主動(dòng)免疫治療；⑧男方精液行常規(guī)檢查結(jié)果顯示正常。正常妊娠組30例，為同期妊娠 12周以內(nèi)的正常妊娠女性，年齡 21～30歲，平均（25.40±2.95）歲，無自然流產(chǎn)史、無死胎死產(chǎn)史，無合并感染及自身免疫性疾病。本次妊娠期間無陰道流血及下腹疼痛等先兆流產(chǎn)的癥狀和體征；B 超顯示胚胎發(fā)育正常。正常非孕婦女組（對(duì)照組）22例，為同期健康已正常生育婦女，既往無不良孕產(chǎn)史，有一胎及以上正常足月分娩史，年齡25 ~ 35歲，平均（２９．１２±２．３２）歲。對(duì)三組對(duì)象的一般資料進(jìn)行比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＞ 0.05）。

1.2 血清IL-32、IFN-γ和IL-1β測(cè)定方法

三組對(duì)象均空腹采集外周靜脈自凝血5 mL，血液凝固后3 000 r/min離心5 min，分離血清置Eppendorf管中，-20℃凍存?zhèn)錅y(cè)。采用ELISA法檢測(cè)血清中IFN-γ、IL-32、IL-1β的水平。IL-1β ELISA試劑盒由北京博奧森生物技術(shù)有限公司提供，產(chǎn)品貨號(hào)H1025；IFN-γ ELISA試劑盒由上海亨代勞商貿(mào)有限公司提供，產(chǎn)品貨號(hào)Y10033A；IL-32 ELISA試劑盒由上海亞培生物科技有限公司提供，產(chǎn)品編號(hào)E1802h。嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

所有數(shù)據(jù)采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，各組間不同指標(biāo)間差異采用單因素方差分析，兩兩比較，方差齊時(shí)采用LSD法，不齊時(shí)采用Dunnett's T3法。

2 結(jié)果

將三組研究對(duì)象血清IFN-γ、IL-32、IL-1β的濃度進(jìn)行比較可以看出：①IFN-γ濃度：URSA組血清水平比正常妊娠組和對(duì)照組均顯著提高，正常妊娠組比對(duì)照組顯著下降；②IL-32：URSA組血清水平比正常妊娠組和對(duì)照組亦均顯著提高，正常妊娠組比對(duì)照組顯著下降；③IL-1β：URSA組血清水平比正常妊娠組和對(duì)照組亦均顯著提高，正常妊娠組比對(duì)照組顯著下降。

3 討論

在生理妊娠過程中，母體和胚胎間免疫雙向調(diào)節(jié)維持在一個(gè)動(dòng)態(tài)平衡水平是妊娠成功的關(guān)鍵。懷孕期間母體內(nèi)存在著復(fù)雜的免疫調(diào)節(jié)機(jī)制，主要表現(xiàn)為免疫耐受或免疫抑制增強(qiáng)，而免疫排斥減弱，一旦這種平衡狀態(tài)被打破，就會(huì)導(dǎo)致病理性妊娠，甚至發(fā)生流產(chǎn)[3]。

正常妊娠表現(xiàn)為一種特殊的Th2現(xiàn)象，Th1處于抑制狀態(tài)，各種 Th1型的細(xì)胞因子表達(dá)水平降低甚至消失，Thl/Th2 間的平衡始終保持在最有利于維持妊娠的向 Th2 型細(xì)胞因子的偏移。Th1 細(xì)胞主要分泌 IL-2、IFN-γ 和 TNF-β 等，參與細(xì)胞免疫、遲發(fā)型超敏反應(yīng)和急性移植排斥反應(yīng)，具有抗胞內(nèi)病原體感染、抗病毒、抗腫瘤及妊娠中免疫排斥作用；而 Th2 細(xì)胞分泌 IL-4、IL-5、IL-6 和 IL-10 等，主要功能是介導(dǎo)體液免疫，刺激 B 細(xì)胞增殖并產(chǎn)生抗體，對(duì)同種移植產(chǎn)生免疫耐受。因此當(dāng)Th1型細(xì)胞因子過度表達(dá)時(shí)，將導(dǎo)致反復(fù)自然流產(chǎn)（URSA）的發(fā)生[4-6]。IFN-γ是由Thl細(xì)胞所分泌的特征性細(xì)胞因子，能激活T細(xì)胞和吞噬細(xì)胞，而被激活的T細(xì)胞和吞噬細(xì)胞能夠轉(zhuǎn)錄合成IL-32； IL-32通過活化NF-κB和p38 MAPK途徑刺激T細(xì)胞和吞噬細(xì)胞釋放IL-1β；IL-1β又可以正反饋?zhàn)饔糜赥細(xì)胞和吞噬細(xì)胞等，使之表達(dá)的IFN-γ受體明顯增多，引發(fā)更多的IFN-γ活化[7]，形成了IFN-γ-IL-32-IL-1β正反饋環(huán)路，以T細(xì)胞和吞噬細(xì)胞為中心，不斷放大Th1炎癥免疫模式。

從本實(shí)驗(yàn)的研究結(jié)果可以看出IFN-γ、IL-32和IL-1β三種細(xì)胞因子在三組實(shí)驗(yàn)對(duì)象血清中的濃度變化表現(xiàn)出一致性。通過本結(jié)果我們可以作如下分析和推斷：①反復(fù)發(fā)生自然流產(chǎn)的患者IFN-γ、IL-32、IL-1β的血清濃度明顯升高，反映出IFN-γ-IL-32-IL-1β正反饋環(huán)路失去控制，IFN-γ受體越來越多，呈現(xiàn)出過度活化狀態(tài)。IFN-γ是 Th1細(xì)胞因子，促進(jìn) Th1 細(xì)胞并抑制 Th2 型細(xì)胞的分化及分泌功能，降低 IL-4、IL-10的活性。這樣，不明原因自然流產(chǎn)患者體內(nèi)Thl/Th2的平衡狀態(tài)被打破，從而導(dǎo)致了流產(chǎn)的發(fā)生。②正常妊娠組IFN-γ濃度比對(duì)照組顯著下降，表明Th1處于抑制狀態(tài)，使Thl/Th2 間的平衡始終保持在最有利于維持妊娠的 Th2 型細(xì)胞因子偏移。至此我們認(rèn)為以T淋巴細(xì)胞亞群為中心，IFN-γ-IL-32-IL-1β正反饋環(huán)路失去控制，導(dǎo)致了Th1 細(xì)胞的過度表達(dá)，同時(shí)也可能抑制了Th2 型細(xì)胞的分化及分泌功能（有待進(jìn)一步的研究證實(shí)），也就是說IFN-γ-IL-32-IL-1β正反饋環(huán)路失去控制是打破Thl/Th2的平衡狀態(tài)的因素之一，從而引起了URSA疾病的發(fā)生。③在正常妊娠組IL-32和IL-1β的血清濃度比正常對(duì)照組顯著下降。可能是因?yàn)?IL-32主要由 IFN-γ誘導(dǎo)產(chǎn)生且IL-32 mRNA在免疫組織中的表達(dá)高于其它組織中的表達(dá)[8]。而IL-1β濃度的下降可能與IL-32濃度的下降有關(guān)，因?yàn)镮L-32能通過活化NF-κB和p38 MAPK途徑刺激T細(xì)胞和吞噬細(xì)胞釋放IL-1β[7]。但是IL-32和IL-1β除了在IFN-γ-IL-32-IL-1β正反饋環(huán)路中對(duì)Thl/Th2平衡起作用，其血清濃度的變化對(duì)生理性妊娠過程是否存在影響尚有待進(jìn)一步的研究得出結(jié)論。通過本試驗(yàn)我們可以得出結(jié)論——對(duì)IFN-γ、IL-32、IL-1β血清濃度的檢測(cè)不僅可作為監(jiān)測(cè)URSA患者治療效果和再次妊娠結(jié)局的指標(biāo)，也為進(jìn)一步研究URSA的治療方法和發(fā)病機(jī)制提供了新思路。而這些指標(biāo)參與URSA發(fā)生的具體機(jī)制還有待更加深入地研究。

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（收稿日期：2011-12-09）