百合胚的組織培養(yǎng)技術(shù)

摘要：百合雜交中胚敗育現(xiàn)象嚴(yán)重，影響新品種培育，可采用胚的組織培養(yǎng)（即胚拯救）技術(shù)。以百合雜交胚作為外植體，通過(guò)初代、繼代及成球培養(yǎng)，完成百合的育種和擴(kuò)繁，經(jīng)過(guò)煉苗及過(guò)渡移栽后，實(shí)現(xiàn)大田移栽，最終可有效的解決此問(wèn)題。

關(guān)鍵詞：百合；胚敗育；組織培養(yǎng)

中圖分類號(hào)：Q949.71+8文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào)：1674-0432（2012）-10-0127-1

百合（Lilium spp）屬于百合科百合屬，多年生鱗莖類球根花卉。我國(guó)百合種質(zhì)資源豐富，許多百合具有相當(dāng)優(yōu)良的性狀，如毛百合可以很好抗鐮刀菌。但到目前為止，我國(guó)百合的育種業(yè)發(fā)展遠(yuǎn)遠(yuǎn)落后于國(guó)外，特別是具有優(yōu)良性狀的野生百合中用于雜交育種的品種相當(dāng)有限。百合雜交育種中存在普遍的胚敗育現(xiàn)象，通過(guò)組織培養(yǎng)技術(shù)進(jìn)行胚拯救可以有效的解決此現(xiàn)象。

1 外植體選取與消毒

選取百合雜交授粉后種子的胚作為外植體。在百合雜交授粉后50～60天，取下膨大的子房，剝出子房中的種子，選取發(fā)育飽滿的種子。并用稀釋50倍的84消毒液將種子浸泡一夜進(jìn)行初步消毒。

初步清洗消毒后的種子需要再次滅菌處理。在無(wú)菌超凈工作臺(tái)上，將浸泡后的種子轉(zhuǎn)移到實(shí)現(xiàn)準(zhǔn)備好的無(wú)菌瓶中，用事先配置好的1%的生汞浸泡種子20分鐘，進(jìn)行進(jìn)一步消毒。

浸泡后，回收用于消毒的生汞，取出種子并轉(zhuǎn)移至新的無(wú)菌瓶中，用事先準(zhǔn)備好的無(wú)菌水清洗三遍后轉(zhuǎn)移至無(wú)菌紙上待用。

2 胚培養(yǎng)階段

將消毒好的種子放在無(wú)菌吸水紙上瀝干水后，用無(wú)菌手術(shù)刀將種子切開，挑出中間細(xì)長(zhǎng)的胚，放在胚培養(yǎng)基上。需注意的是胚要接種在培養(yǎng)基表面，不要沒(méi)入培養(yǎng)基。

以每瓶培養(yǎng)基接種10個(gè)外植體為宜。初代培養(yǎng)進(jìn)行的是萌發(fā)誘導(dǎo)，經(jīng)過(guò)多次試驗(yàn)，初代培養(yǎng)基以MS+蔗糖30g+瓊脂7g+1.5NAA為最佳，pH 5.8-5.9之間，并將室內(nèi)溫度維持在25℃左右。

在12小時(shí)的日光照時(shí)間下，一周左右發(fā)生胚萌動(dòng)，一個(gè)月前后抽葉成球并生根。這時(shí)候可以修剪根葉，并進(jìn)入繼代（增殖）的培養(yǎng)階段了。

3 繼代培養(yǎng)（增殖培養(yǎng)）階段

百合的新球進(jìn)行第一次繼代培養(yǎng)時(shí)繁殖率一般較低，但2～3次之后，繁殖數(shù)可達(dá)到5倍左右。繼代培養(yǎng)的培養(yǎng)基選用MS+1.0BA+1.0NAA，PH維持在5.8～5.9最佳，并繼續(xù)予以每日12小時(shí)的光照時(shí)間。

試管苗經(jīng)30天的培養(yǎng)后，便可以進(jìn)行切割以擴(kuò)大繁殖數(shù)量。當(dāng)其數(shù)量達(dá)到一定值后，即可進(jìn)行下一個(gè)成球培養(yǎng)階段。

4 成球培養(yǎng)階段

當(dāng)繼代苗擴(kuò)繁到需要的數(shù)量之后，即可轉(zhuǎn)移到養(yǎng)球培養(yǎng)基上培養(yǎng)。養(yǎng)球培養(yǎng)的培養(yǎng)基可直接在MS培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上加入蔗糖80g，7天左右可見白色根生成，經(jīng)過(guò)20～30天后再轉(zhuǎn)一次瓶，轉(zhuǎn)瓶4～5次后，即可進(jìn)行煉苗馴化，并準(zhǔn)備移栽。

5 煉苗及過(guò)渡移栽 （馴化）

過(guò)渡移栽是整個(gè)組培中最為關(guān)鍵的一步，如果準(zhǔn)備不充分，整個(gè)組培過(guò)程將前功盡棄，因此移栽前要準(zhǔn)備充分。

用鑷子將幼苗從培養(yǎng)基中取出，用流動(dòng)的清水將根部洗凈并晾干。由于幼苗植株脆弱，在操作過(guò)程中應(yīng)當(dāng)盡量避免對(duì)根系的損傷，以提高栽后成活率。將晾干后的種球和甲基托布津粉劑以及千分之五高錳酸鉀消毒后的草炭充分混合攪拌均勻，用報(bào)紙包裹好后，放入4℃～5℃冷庫(kù)內(nèi)冷藏2個(gè)月。

冷藏后的百合幼苗最好能夠先栽植在溫室大棚內(nèi)進(jìn)行馴化，即將組培苗從無(wú)菌環(huán)境中移植入大田前，逐漸增強(qiáng)對(duì)外界抵抗力的一個(gè)適應(yīng)過(guò)程。

未經(jīng)消毒的苗床土壤很容易污染抵抗力較弱的組培苗，因此需要在煉苗前將土壤用甲醛進(jìn)行醺悶消毒后，再用千分之5的多菌靈將苗床充分澆透滅菌，即可使用。

苗床寬1米左右，床底整平，上鋪10公分的栽培基質(zhì)，基質(zhì)以珍珠巖：蛭石：泥炭=1：1：1為好。按行株距10cm×10cm規(guī)格進(jìn)行種球栽植后，上覆10厘米栽培基質(zhì)即可。

栽入苗床后，幼苗需要充足的水分澆灌，尤其是清潔的水源為佳。有條件的可以在苗床上方搭建小拱棚，以防止水分過(guò)度蒸發(fā)，減少幼苗的死亡率。

移栽當(dāng)天可噴施1/2的MS營(yíng)養(yǎng)液，2周后噴施葉面肥料進(jìn)行營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充，促生新根。在馴化養(yǎng)護(hù)過(guò)程中，需每隔一周噴施一次1000倍液的多菌靈，連續(xù)噴施3～4次以防治病害。

2周后可噴施葉面肥，進(jìn)行營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充，以促進(jìn)新根生長(zhǎng)。移栽初期需特別注意保持苗床和空氣濕度，采取間歇噴霧的方法，保持基質(zhì)濕潤(rùn)，空氣相對(duì)濕度70%以上，溫度維持在15℃～25℃。百合苗栽下約半個(gè)月后長(zhǎng)出新葉，30天左右便可進(jìn)入大田移栽階段。

6 大田移栽

大田移栽應(yīng)選擇溫暖晴朗的天氣，通常在小苗長(zhǎng)至5cm以上時(shí)移栽成活率較高。移栽苗的后期管理工作與百合種球的大田種植一樣操作即可。

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作者簡(jiǎn)介：丁燁，本科，從事花卉生產(chǎn)教學(xué)與研究工作。