食品中對(duì)羥基苯甲酸酯類(lèi)的檢測(cè)—高效液相色譜法

摘要：文章采用超聲提取-高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定食品中3種對(duì)羥基苯甲酸酯（對(duì)羥基苯甲酸甲酯、對(duì)羥基苯甲酸乙酯、對(duì)羥基苯甲酸丙酯）含量的方法。對(duì)羥基苯甲酸酯類(lèi)屬于防腐劑，按GB/T5009.31-2003國(guó)家推薦方法檢測(cè)[1]，樣品提取比較繁瑣、費(fèi)時(shí)，且回收效果欠佳。本文利用較為常見(jiàn)的紫外檢測(cè)器通過(guò)優(yōu)化條件，摸索出一個(gè)簡(jiǎn)捷、快速、經(jīng)濟(jì)、靈敏，又能保證一定精度的測(cè)定方法。本方法加標(biāo)回收率在86.08%～112.71%之間，線性系數(shù)R>0.9998，檢出限可達(dá)0.10ug/ml，分析時(shí)間短，完全能夠滿(mǎn)足分析要求，可廣泛應(yīng)用于食品中對(duì)羥基苯甲酸酯類(lèi)檢測(cè)分析。

關(guān)鍵詞：對(duì)羥基苯甲酸酯類(lèi)；高效液相色譜法

中圖分類(lèi)號(hào)：O657.7+2 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào)：1674-0432（2012）-10-0064-2

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器和試劑

1.1.1 儀器 Shimadzu Lc 10vp plus高效液相色譜系統(tǒng)（日本Shimadzu公司），配紫外檢測(cè)器及Lc solution色譜工作站；分析天平：感量0.1mg；氮吹儀：美國(guó)Organomation N-EVAP112型；均質(zhì)機(jī)：IKAR werke T25型均質(zhì)機(jī)；溶劑過(guò)濾裝置；0.45μm和0.22μm過(guò)濾膜和過(guò)濾頭；Milli-Q超純水機(jī)。

1.1.2 試劑 甲醇、乙腈為HPLC級(jí)；乙醇為分析純；水為超純水。

標(biāo)準(zhǔn)品：對(duì)羥基苯甲酸甲酯、對(duì)羥基苯甲酸乙酯、對(duì)羥基苯甲酸丙酯，純度為99.0%，美國(guó)進(jìn)口，購(gòu)于上海安譜。

1.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制[2]

標(biāo)準(zhǔn)貯備液：精密稱(chēng)取三種標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)0.05g，用無(wú)水乙醇溶解并定容于50mL容量瓶中，配制成濃度為1mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)貯備液，貯于4℃冰箱中備用。

標(biāo)準(zhǔn)使用液：用刻度吸管準(zhǔn)確吸取三種標(biāo)準(zhǔn)貯備液，根據(jù)需要用無(wú)水乙醇配制成不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液系列，待用。

1.3 色譜條件

色譜柱：Diamonsil C18，粒度5μm，4.6mm×250mm（ID×L）；檢測(cè)波長(zhǎng)：254nm；流速：1.0mL/min；進(jìn)樣量：20 μL；流動(dòng)相：水-乙腈（體積比為45：55）；柱溫：室溫。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1 樣品準(zhǔn)備和處理 稱(chēng)取樣品5g（精確至0.01g），置于50mL比色管中，加入25mL無(wú)水乙醇，置超聲波水浴中提取10min，取出，4000rpm離心10min，上清液轉(zhuǎn)入容量瓶中，殘留物再用25mL無(wú)水乙醇重復(fù)提取1次，合并上清液，用無(wú)水乙醇定容至50.0mL，靜止，上清液經(jīng)微孔濾膜（4.5μm）過(guò)濾作為試液，供高效液相色譜儀測(cè)定。

1.4.2 樣品分析 在相同色譜條件下，將標(biāo)準(zhǔn)工作液按照濃度由低到高的順序進(jìn)樣測(cè)定，以各組分的峰面積對(duì)其濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。待測(cè)液在于標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)樣相同的條件下進(jìn)樣分析，以保留時(shí)間定性，峰面積外標(biāo)法定量。

2 結(jié)果與討論[3]

2.1 提取溶劑的確定

對(duì)羥基苯甲酸酯類(lèi)難溶于水，易溶于甲醇、乙醇等有機(jī)溶劑。分別選用乙醇、甲醇作為提取溶劑進(jìn)行回收率試驗(yàn)。試驗(yàn)結(jié)果表明，甲醇和乙醇均具有較高的提取效率，無(wú)明顯差異。由于甲醇揮發(fā)后易被呼吸道、胃腸道和皮膚吸收而致中毒，對(duì)長(zhǎng)期接觸的實(shí)驗(yàn)人員具有一定的傷害，而乙醇毒性較小，因此本試驗(yàn)中采用乙醇作為提取溶劑。

2.2 流動(dòng)相的選擇

為選擇最佳的流動(dòng)相，分別用乙腈-水、甲醇-水和甲醇-乙酸銨溶液三種流動(dòng)相體系進(jìn)行了試驗(yàn)。由于此儀器為單泵系統(tǒng)，無(wú)法采用梯度而只能采用等度的流動(dòng)相配比。結(jié)果顯示，使用甲醇-水流動(dòng)相的分離度不是很好；甲醇-乙酸銨溶液分離較好，但由于溶液中含有鹽類(lèi)，用久了會(huì)對(duì)柱子壽命有一定影響；乙腈-水流動(dòng)相體系，分離度較好，且配制簡(jiǎn)單，對(duì)柱子無(wú)不良影響。此外，還考察了不同體積分?jǐn)?shù)的乙腈-水對(duì)各組分分離的影響。結(jié)果顯示，乙醇體積分?jǐn)?shù)為55%時(shí)流動(dòng)相最為適合，分離效果好，色譜峰明顯，而且保留時(shí)間合適。

2.3 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

用紫外檢測(cè)器分別在254、248nm波長(zhǎng)處對(duì)各組分的標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)3種組分在254nm處紫外吸收較強(qiáng)，靈敏度較高，因此本實(shí)驗(yàn)優(yōu)先選擇254nm作為該實(shí)驗(yàn)的檢測(cè)波長(zhǎng)。

2.4 方法的評(píng)價(jià)

對(duì)羥基苯甲酸酯類(lèi)的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液均用乙醇稀釋并定容，三種對(duì)羥基苯甲酸酯類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度系列為0.008mg/L、0.04mg/L、0.4mg/L和4.0mg/L。對(duì)羥基苯甲酸酯類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)品通過(guò)高效液相色譜進(jìn)行分析，檢測(cè)結(jié)果如圖1所示。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在乙腈-水（55：45）為流動(dòng)相條件下，各組分保留時(shí)間合適，而且分離效果較好。圖1為三種對(duì)羥基苯甲酸酯類(lèi)四種標(biāo)準(zhǔn)系列的標(biāo)準(zhǔn)品的高效液相色譜圖。

圖1 三種對(duì)羥基苯甲酸酯類(lèi)四種濃度標(biāo)準(zhǔn)品的高效液相色譜圖

峰1.對(duì)羥基苯甲酸甲酯（尼泊金甲酯）；峰2.對(duì)羥基苯甲酸乙酯（尼泊金乙酯）

峰3.對(duì)羥基苯甲酸丙酯（尼泊金丙酯）

表1為三種對(duì)羥基苯甲酸酯類(lèi)不同濃度進(jìn)樣時(shí)保留時(shí)間的變化及峰面積變化表，保留時(shí)間的RSD%分別為0.260、0.241、0.204。

圖2為三種對(duì)羥基苯甲酸酯類(lèi)濃度為0.008mg/L時(shí)進(jìn)樣時(shí)的出峰狀況。峰形明顯，可以作為判定依據(jù)。

2.5 加標(biāo)回收率

向5份樣品中分別加入不同量的對(duì)羥基苯甲酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)溶液，按本法處理、測(cè)定并計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表2。

2.6 檢出限

本方法檢出限0.10μg/mL。

2.7 優(yōu)點(diǎn)

樣品前處理簡(jiǎn)單，省時(shí)省力；液相分析也無(wú)需使用梯度，等度淋洗即可，對(duì)液相系統(tǒng)沒(méi)有嚴(yán)格要求，一般單位均能承受。

3 結(jié)論

實(shí)驗(yàn)表明，本方法所用乙腈-水流動(dòng)相，對(duì)分析柱的損害較小；樣品加標(biāo)回收率在86.00%～109.50%之間；線性系數(shù)R>0.9998；三種對(duì)羥基苯甲酸酯類(lèi)檢出限均可達(dá)到0.10μg/mL，能夠滿(mǎn)足一般食品等樣品中對(duì)羥基苯甲酸酯類(lèi)殘留量的分析要求。另外本方法具有簡(jiǎn)便快速、準(zhǔn)確靈敏、成本低、可靠性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，應(yīng)用前景廣泛。

通訊作者：修麗華，女，長(zhǎng)春市產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)院正高級(jí)工程師，從事食品檢測(cè)技術(shù)研究和新方法開(kāi)發(fā)工作。