杜仲葉中綠原酸提取工藝的優(yōu)化

杜仲（Ｅｃｏｍｍｉａ ｕｌｍｏｉｄｅｓ Ｏｌｉｖ．）為杜仲科（Ｅｕｃｏｍｍｉａｃｅａｅ）杜仲屬的落葉喬木［１］，是中國特有經(jīng)濟(jì)樹種，全國約有杜仲林２８萬ｈｍ２，每年可產(chǎn)葉４００萬ｔ［２，３］。杜仲干燥的樹皮是名貴滋補(bǔ)藥材，具補(bǔ)肝腎、強(qiáng)筋骨、降血壓、安胎等諸多功效。近年來研究表明杜仲葉和杜仲皮具有基本相似的化學(xué)成分和藥理作用［４］，其中綠原酸（圖１）是杜仲葉所含的有效成分之一，具有抗菌消炎、清熱解毒、利膽止血、提高白血球含量、興奮中樞神經(jīng)系統(tǒng)等多種藥理作用［５，６］。本研究采用醇提法和水提法提取杜仲葉中的綠原酸，并設(shè)計(jì)正交試驗(yàn)優(yōu)化提取工藝，以期為杜仲的綜合開發(fā)利用提供參考。

１ 材料與方法

１．１ 材料與儀器

乙醇為分析純，綠原酸對(duì)照品購自Ｓｉｇｍａ公司，杜仲葉分別采集自陜西省略陽縣、四川省南充市、湖北省孝感市、湖南省雙峰縣，８月份采集綠葉后以普通鐵鍋?zhàn)鳛槌村仯粗寥~面失去光澤、葉色暗綠、葉質(zhì)柔軟、手握葉不粘手、失重３０％左右即可。

主要儀器包括Ａｌｐｈａ２型真空冷凍干燥儀（德國Ｃｈｒｉｓｔ公司）、Ｈ６６０２５Ｔ型超聲清洗器（無錫超聲電子設(shè)備廠）、高效液相色譜儀（美國Ｗａｔｅｒｓ公司），Ｒ－２０１旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海申科技術(shù)有限公司），Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ Ｒ２００Ｄ電子天平（賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司）等。

１．２ 試驗(yàn)方法

１．２．１ 醇提法從杜仲葉中提取綠原酸的方法及優(yōu)化 以乙醇溶液為提取溶劑，按一定的料液比加入到杜仲葉中，６０ ℃水浴提取一段時(shí)間，提取液過濾后濾液減壓濃縮，真空干燥，即得綠原酸提取物。

采用Ｌ９（３４）正交試驗(yàn)考察提取劑乙醇溶液的體積分?jǐn)?shù)、料液比（ｍ∶Ｖ，ｇ／ｍＬ，下同）、提取時(shí)間和提取次數(shù)４個(gè)因素對(duì)杜仲葉中綠原酸提取率的影響，優(yōu)化提取工藝。醇提法正交試驗(yàn)因素與水平見表1。

１．２．２ 水提法從杜仲葉中提取綠原酸的方法及優(yōu)化 以水為提取溶劑，在一定溫度下加熱提取一段時(shí)間，提取液過濾，濾液減壓濃縮，真空干燥。

采用Ｌ９（３４）正交試驗(yàn)考察提取溫度、料水質(zhì)量比、提取時(shí)間和提取次數(shù)４個(gè)因素對(duì)綠原酸提取率的影響，優(yōu)化提取工藝［7，8］。水提法正交試驗(yàn)因素與水平見表2。

１．２．３ ＨＰＬＣ法測定提取物中綠原酸的含量 ①提取物待測液的配制。取獲得的杜仲葉中提取物樣品干燥粉末約０．５ ｇ，精確稱定，加５０％的甲醇５０ ｍＬ，稱定質(zhì)量，超聲處理３０ ｍｉｎ，冷卻后稱重，用５０％的甲醇補(bǔ)足至原重，搖勻，過濾，棄去初濾液，精確量取濾液５ ｍＬ，置２５ ｍＬ棕色量瓶中，加５０％的甲醇至刻度，搖勻，待測。②色譜條件。Ｃ１８柱（１０ ｃｍ×５ ｃｍ），十二烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，粒徑３～１０ μｍ，乙腈—０．４％磷酸溶液為流動(dòng)相，紫外檢測器，檢測波長３２７ ｎｍ，進(jìn)樣量１０ μＬ，柱溫２５ ℃，理論塔板數(shù)按綠原酸色譜峰計(jì)大于１ ０００。

綠原酸提取率＝提取物質(zhì)量×提取物中綠原酸的含量／原藥材質(zhì)量×１００％

２ 結(jié)果與分析

２．１ 產(chǎn)地和采集季節(jié)對(duì)杜仲葉綠原酸提取率的影響

４個(gè)產(chǎn)地春季和秋季采集的杜仲葉中綠原酸的提取率見表３。從表３可以看出，以春季采集的杜仲葉為原料，綠原酸提取率明顯高于秋季采集的；４個(gè)產(chǎn)地的杜仲葉中，陜西省略陽縣的綠原酸提取率高于其他產(chǎn)地的，因此后續(xù)試驗(yàn)采用春季采自陜西省略陽縣的杜仲葉作為綠原酸提取的原料。

２．２ 醇提法的優(yōu)化結(jié)果

正交試驗(yàn)優(yōu)化醇提法提取綠原酸工藝的結(jié)果見表４。由極差Ｒ的大小可知，各因素中對(duì)綠原酸提取率影響最大的是乙醇溶液體積分?jǐn)?shù)，其次是提取次數(shù)，料液比對(duì)綠原酸提取率的影響較小，提取時(shí)間的影響最小。最佳試驗(yàn)組合為Ａ３Ｂ３Ｃ３Ｄ２，即以體積分?jǐn)?shù)３０％的乙醇溶液作提取劑、料液比１∶１５、提取時(shí)間２．０ ｈ、提?。泊?。

２．３ 水提法的優(yōu)化結(jié)果

正交試驗(yàn)優(yōu)化水提法提取綠原酸工藝的結(jié)果見表５。由極差Ｒ可知，各因素對(duì)綠原酸提取率的影響由大到小依次為提取次數(shù)、提取溫度、料水質(zhì)量比、提取時(shí)間。最佳試驗(yàn)組合為Ａ２Ｂ３Ｃ２Ｄ２，即提取溫度６０ ℃、料水質(zhì)量比１∶１０、提取時(shí)間１．５ ｈ，提取次數(shù)為２次。

３ 小結(jié)與討論

采用正交試驗(yàn)優(yōu)化杜仲葉中綠原酸的提取工藝，優(yōu)化的醇提法工藝條件為料液比１∶１５（ｍ∶Ｖ，ｇ／ｍＬ）、體積分?jǐn)?shù)３０％的乙醇作溶劑、提取時(shí)間２.0 ｈ、提取次數(shù)２次；優(yōu)化的水提法工藝條件為料水質(zhì)量比１∶１０、提取溫度６０ ℃、提取時(shí)間１.5 ｈ、提取次數(shù)２次。

參考文獻(xiàn)：

［１］ 詹益興．綠色精細(xì)化工——天然產(chǎn)品制造法［Ｍ］．北京：科學(xué)技術(shù)文獻(xiàn)出版社，２００５．

［２］ 劉軍海，裘愛泳．杜仲葉中桃葉珊瑚苷提取工藝研究［Ｊ］．中成藥，２００７，２９（２）：２６６－２６８．

［３］ 孫凌峰． 杜仲樹葉資源的開發(fā)利用［Ｊ］．林業(yè)科技開發(fā)，１９９８（５）：８－９．

［４］ 陳 合，許牡丹． 新型食品原料制備技術(shù)與應(yīng)用［Ｍ］．北京：化學(xué)工業(yè)出版社，２００４．

［５］ 黃春林，朱曉新．中藥藥理與臨床手冊(cè)［Ｍ］．北京：人民衛(wèi)生出版社，２００６．

［６］ 沈丕安．中藥藥理與臨床運(yùn)用［Ｍ］．北京：人民衛(wèi)生出版社，２００６． ２５４－２５５．

［７］ 任露泉．試驗(yàn)優(yōu)化設(shè)計(jì)與分析［Ｍ］．長春：吉林科學(xué)技術(shù)出版社，２００１．

［８］ 洪 偉，吳承禎．試驗(yàn)設(shè)計(jì)與分析——原理·操作·案例［Ｍ］．北京：中國林業(yè)出版社，２００４．摘要：分別以水和乙醇溶液為溶劑從杜仲（Ｅｃｏｍｍｉａ ｕｌｍｏｉｄｅｓ Ｏｌｉｖ．）葉中提取綠原酸，采用高效液相色譜法測定提取物中綠原酸的含量并計(jì)算提取率，設(shè)計(jì)正交試驗(yàn)優(yōu)化提取工藝。結(jié)果表明，優(yōu)化的醇提法工藝條件為料液比１∶１５（ｍ∶Ｖ，ｇ／ｍＬ）、體積分?jǐn)?shù)３０％的乙醇作溶劑、提取時(shí)間２.0 ｈ、提取次數(shù)２次；優(yōu)化的水提法工藝條件為料水質(zhì)量比１∶１０、提取溫度６０ ℃、提取時(shí)間１.5 ｈ、提取次數(shù)２次。

關(guān)鍵詞：杜仲（Ｅｃｏｍｍｉａ ｕｌｍｏｉｄｅｓ Ｏｌｉｖ．）葉；綠原酸；水提法；醇提法；正交設(shè)計(jì)

中圖分類號(hào)：Ｒ２８４．２ 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：Ａ 文章編號(hào)：0439－８114（２０12）17－3830-02

Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ Ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ Ｃｈｌｏｒｏｇｅｎｉｃ Ａｃｉｄ ｆｒｏｍ

Ｅｕｃｏｍｍｉａ ｕｌｍｏｄｉｅｓ Ｌｅａｖｅｓ

ＬＩ Ｙｕ－ｓｈａｎ，ＦＡＮ Ｐｅｎｇ－ｈｕｉ

（Ｘｉ’ａｎ Ｈｕｉｆｅｎｇ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｃｏ．， Ｌｔｄ．， Ｘｉ’ａｎ ７１００７５，Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｕｓｉｎｇ ｗａｔｅｒ ａｎｄ ｅｔｈａｎｏｌ as solvent， ｃｈｌｏｒｏｇｅｎｉｃ ａｃｉｄ ｗａｓ ｅｘｔｒａｃｔｅｄ ｆｒｏｍ Ｅｕｃｏｍｍｉａ ｕｌｍｏｄｉｅｓ ｌｅａｖｅｓ． Ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ｃｈｌｏｒｏｇｅｎｉｃ ａｃｉｄ ｉｎ ｅｘｔｒａｃｔ ｗａｓ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｂｙ ＨＰＬＣ ａｎｄ ｕｓｅｄ ｔｏ ｃａｓｕｌａｔｅ ｔｈｅ ｙｉｅｌｄ ｏｆ ｃｈｌｏｒｏｇｅｎｉｃ ａｃｉｄ． Ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｄｅｓｉｇｎ ｗａｓ ａｄｏｐｔｅｄ ｔｏ optimize ｔｈｅ ｅｔｈａｎｏｌ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｐｒｏｃｅｓｓ. Ｔｈｅ optimized ethanol ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｐｒｏｃｅｓｓ ｗａｓ， ｍａｔｅｒｉａｌ ｔｏ ｌｉｑｕｉｄ ｒａｔｉｏ， １∶１５（ｍ∶Ｖ，ｇ／ｍＬ）， ｆｒａｃｔｉｏｎ ｒａｔｉｏ ｏｆ ｅｔｈａｎｏｌ， ３０％； ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｉｍｅ， ２.0 ｈ； ｅｘｔｒａｃｔ ｔｗｉｃｅ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ ｗａｔｅｒ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ， ｍａｓｓ ｒａｔｉｏ ｏｆ ｍａｔｅｒｉａｌ ｔｏ ｗａｔｅｒ， １∶１０； ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ， ６０ ℃； ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｉｍｅ， １.5 ｈ； ｅｘｔｒａｃｔ ｔｗｉｃｅ．

Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： Ｅｕｃｏｍｍｉａ ｕｌｍｏｄｉｅｓ ｌｅａｖｅｓ； ｃｈｌｏｒｏｇｅｎｉｃ ａｃｉｄ； ｗａｔｅｒ ｅｘｔｒａｃｔ ｍｅｔｈｏｄ； ｅｔｈａｎｏｌ ｅｘｔｒａｃｔ ｍｅｔｈｏｄ； ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｄｅｓｉｇｎ