多重PCR靶向二代測(cè)序?qū)δX腫瘤術(shù)后顱內(nèi)感染病人的陽(yáng)性率

鐘前碩 張小敏 莫偉

關(guān)鍵詞：多重PCR靶向二代測(cè)序;腦腫瘤術(shù)后;顱內(nèi)感染;陽(yáng)性率

【中圖分類號(hào)】R651.1 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A 【文章編號(hào)】1673-9026（2022）08--01

顱內(nèi)感染是腦腫瘤術(shù)后的常見(jiàn)并發(fā)癥，其臨床癥狀并不典型，通過(guò)傳統(tǒng)細(xì)菌培養(yǎng)所需的檢測(cè)周期長(zhǎng)，待確診時(shí)多已錯(cuò)過(guò)最佳治療時(shí)期。隨著分子診斷技術(shù)的不斷提升，多重聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）靶向二代測(cè)序以其快速、便捷、檢測(cè)范圍廣等優(yōu)勢(shì)被大量應(yīng)用于重癥感染等疾病的早期診療和用藥指導(dǎo)中[1-2]。基于此，本院選取60例腦腫瘤術(shù)后顱內(nèi)感染患者進(jìn)行研究，分析多重PCR靶向二代測(cè)序檢測(cè)腦腫瘤術(shù)后顱內(nèi)感染病人的陽(yáng)性率，為腦腫瘤術(shù)后了顱內(nèi)感染的早期診斷及用藥指導(dǎo)提供更多數(shù)據(jù)參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2021年1月至2021年12月于本院行腦腫瘤手術(shù)治療后顱內(nèi)感染患者60例作為研究對(duì)象。納入標(biāo)準(zhǔn)：①病原學(xué)檢測(cè)結(jié)果符合顱內(nèi)感染的診斷標(biāo)準(zhǔn)[3]，且均為細(xì)菌感染;②均因腦腫瘤行顱腦手術(shù)治療;③患者及家屬知情且同意參與研究。排除標(biāo)準(zhǔn)：①其他因素所致的顱內(nèi)感染;②合并其他全身感染性疾病;③近期服用抗菌類藥物;④合并免疫功能障礙。其中男性37例，女性23例;平均年齡（49.32±5.77）歲。

1.2 檢測(cè)方法

所有患者均行多重PCR靶向二代測(cè)序及常規(guī)細(xì)菌培養(yǎng)。常規(guī)細(xì)菌培養(yǎng)：應(yīng)用無(wú)菌技術(shù)取患者腦脊液3ml進(jìn)行細(xì)菌涂片染色、病原菌培養(yǎng)及鑒定。多重PCR靶向二代測(cè)序：取患者腦脊液3ml，提取核酸并應(yīng)用QIAseq ultralow Input Library Kit構(gòu)建文庫(kù)，應(yīng)用IlluminaMiniSeq/NextSeq測(cè)序平臺(tái)進(jìn)行測(cè)序。

1.3 觀察指標(biāo)

①不同檢測(cè)方式檢測(cè)時(shí)間：比較多重PCR靶向二代測(cè)序及常規(guī)細(xì)菌培養(yǎng)的檢測(cè)時(shí)間。②多重PCR靶向二代測(cè)序檢測(cè)陽(yáng)性率及對(duì)病原體檢測(cè)的準(zhǔn)確性：以細(xì)菌培養(yǎng)的結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，分析多重PCR靶向二代測(cè)序檢測(cè)陽(yáng)性率及對(duì)病原體檢測(cè)的準(zhǔn)確性。真陽(yáng)性：檢出致病菌，且與臨床癥狀和細(xì)菌培養(yǎng)結(jié)果相符;可疑陽(yáng)性：檢出致病菌且與臨床癥狀相符，但與細(xì)菌培養(yǎng)結(jié)果不符;假陽(yáng)性：檢出致病菌，但與臨床癥狀和細(xì)菌培養(yǎng)結(jié)果不符;假陰性：未檢出致病菌，但細(xì)菌培養(yǎng)陽(yáng)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS21.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料用（x±s）表示，用t檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同檢測(cè)方式檢測(cè)時(shí)間比較

多重PCR靶向二代測(cè)序平均檢測(cè)時(shí)間為（5.74±0.79）d，短于常規(guī)細(xì)菌培養(yǎng)的（1.65±0.54）d（t=33.107，P<0.05）。

2.2 多重PCR靶向二代測(cè)序檢測(cè)陽(yáng)性率及對(duì)病原體檢測(cè)的準(zhǔn)確性

所有患者中，多重PCR靶向二代測(cè)序檢測(cè)的感染陽(yáng)性率為98.33%（59/60），其中金黃色葡萄球菌14例（23.33%），糞腸球菌例12例（20.00%），大腸埃希菌5例（8.33%），綠膿假單胞菌4例（6.67%），肺炎克雷伯桿菌8例（13.33%），鮑曼不動(dòng)桿菌16例（26.67%）。以細(xì)菌培養(yǎng)結(jié)果及臨床癥狀為參照，多重PCR靶向二代測(cè)序?qū)Σ≡w檢測(cè)的真陽(yáng)性率為88.33%，可疑陽(yáng)性率為10.00%，假陰性率為1.67%，見(jiàn)表1。

3 討論

隨著醫(yī)療技術(shù)的不斷發(fā)展，多數(shù)顱腦腫瘤患者經(jīng)手術(shù)治療后可極大程度延長(zhǎng)患者生存期，改善相關(guān)癥狀以提升其生活質(zhì)量。但因癌腫患者自身抵抗力低下，且后續(xù)放化療及免疫抑制劑的應(yīng)用會(huì)進(jìn)一步降低機(jī)體免疫功能，導(dǎo)致術(shù)后顱內(nèi)感染的發(fā)病率顯著提升。顱內(nèi)感染可導(dǎo)致患者顱內(nèi)壓升高，嚴(yán)重者可并發(fā)腦疝，需盡早控制以降低致殘、致死率，但其疾病表現(xiàn)多缺乏特異性，且常規(guī)細(xì)菌培養(yǎng)所需的檢測(cè)時(shí)間較長(zhǎng)，待臨床確診后多已錯(cuò)過(guò)最佳治療時(shí)期。

多重PCR靶向二代測(cè)序是近年來(lái)分子診斷技術(shù)的重點(diǎn)研究方向，主要通過(guò)提取臨床樣本核酸進(jìn)行多重PCR建庫(kù)后進(jìn)行高通量測(cè)序，再通過(guò)與病源數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)和生信分析一次性完成對(duì)多種病原體的檢測(cè)，在急危重癥感染的分析診斷中均有一定的應(yīng)用價(jià)值。此次研究中，多重PCR靶向二代測(cè)序?qū)︼B腦腫瘤術(shù)后顱內(nèi)感染的檢測(cè)陽(yáng)性率高達(dá)98.33%，對(duì)病原菌類型檢測(cè)的準(zhǔn)確性也較高，且檢測(cè)所用時(shí)間明顯短于常規(guī)細(xì)菌培養(yǎng)，說(shuō)明多重PCR靶向二代測(cè)序?qū)︼B腦腫瘤術(shù)后顱內(nèi)感染患者的檢測(cè)陽(yáng)性率高，且能極大程度的縮短檢測(cè)時(shí)間。傳統(tǒng)細(xì)菌培養(yǎng)的流程較為復(fù)雜，完成菌群培養(yǎng)鑒別至少需要3～5d，且其檢測(cè)結(jié)果易受到用藥因素的影響，而多重PCR靶向二代測(cè)序直接通過(guò)對(duì)核酸的提取進(jìn)行建庫(kù)、測(cè)序和分析，省去冗長(zhǎng)的細(xì)菌培養(yǎng)過(guò)程，且多重PCR靶向二代測(cè)序可在同一反應(yīng)管內(nèi)對(duì)多種病原菌進(jìn)行同時(shí)檢測(cè)，極大程度的縮短了檢測(cè)時(shí)間，對(duì)腦腫瘤術(shù)后顱內(nèi)感染的的早期診斷有較高的應(yīng)用價(jià)值[4-6]。但目前多重PCR靶向二代測(cè)序技術(shù)無(wú)法評(píng)估病原菌的耐藥情況，因而對(duì)抗菌藥物的應(yīng)用仍需結(jié)合細(xì)菌培養(yǎng)結(jié)果進(jìn)行選擇。

綜上所述，多重PCR靶向二代測(cè)序?qū)︼B腦腫瘤術(shù)后顱內(nèi)感染檢測(cè)的陽(yáng)性率較高，且檢測(cè)時(shí)間較傳統(tǒng)細(xì)菌培養(yǎng)更短，對(duì)術(shù)后顱內(nèi)感染的早期診斷有較高的參考意義。

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湛江市科技計(jì)劃項(xiàng)目，項(xiàng)目名稱：多重PCR靶向二代測(cè)序?qū)δX腫瘤術(shù)后顱內(nèi)感染病人的陽(yáng)性率

項(xiàng)目編號(hào)：210520094540467