男性Y染色體amelogenin、DYS456及DYS458缺失1例分析

王偉妮 楊雅冉 任 賀 劉 芳

1.山西醫(yī)科大學(xué)法醫(yī)學(xué)院(太原，030001);2.中國(guó)科學(xué)院北京基因組研究所 ;3.北京人民警察學(xué)院;4.北京市公安局昌平分局刑偵支隊(duì)

男性Y染色體amelogenin、DYS456及DYS458缺失1例分析

王偉妮1楊雅冉2任 賀3劉 芳4

1.山西醫(yī)科大學(xué)法醫(yī)學(xué)院(太原，030001);2.中國(guó)科學(xué)院北京基因組研究所 ;3.北京人民警察學(xué)院;4.北京市公安局昌平分局刑偵支隊(duì)

1 資料

某對(duì)父子在進(jìn)行親子鑒定時(shí)，用Goldeneye 20A(基點(diǎn)認(rèn)知)對(duì)父與子DNA進(jìn)行擴(kuò)增，amelogenin基因座分型結(jié)果如圖1，父與子均只顯示X等位基因，Y等位基因缺失。同時(shí)用 PowerPlex?16 System(Promega)進(jìn)行了驗(yàn)證，結(jié)果一致。為驗(yàn)證受檢者性別，采用AmpF STR Y－filer kit(ABI)對(duì)父與子進(jìn)行了YSTR的檢驗(yàn)，分型結(jié)果如圖2，均顯示 DYS456及DYS458的缺失。根據(jù)NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)提供的Y染色體上的序列信息，避開(kāi)試劑盒中amelogenin Y、DYS456及DYS458引物結(jié)合區(qū)，將原產(chǎn)物片段分別延長(zhǎng)至696bp、743bp和745bp自行設(shè)計(jì)引物(表1)進(jìn)行擴(kuò)增。電泳結(jié)果如圖3所示，正常男性amelogenin、DYS456及DYS458條帶均清晰，而受檢者均無(wú)產(chǎn)物。

圖1 父子的amelogenin基因座檢測(cè)結(jié)果

圖2 父子的DYS456及DYS458基因座檢測(cè)結(jié)果

圖3 amelogenin、DYS456及 DYS458基因座電泳圖

表1 針對(duì)amelogenin Y、DYS456及DYS458設(shè)計(jì)的引物

2 討論

amelogenin是編碼牙釉質(zhì)蛋白的基因，位于X(p22.1 －22.3)和 Y(Yp11.2)的同源染色體中，為單拷貝。其特異PCR引物最早由FSS(英國(guó)法庭科學(xué)服務(wù)部)設(shè)計(jì)，擴(kuò)增X和Y染色體可同時(shí)分別得到106pb和112bp的產(chǎn)物，這樣的片斷差異在法醫(yī)鑒定中常用于性別鑒定［1］。

本例用Goldeneye 20A(基點(diǎn)認(rèn)知)對(duì)父子DNA分型進(jìn)行檢驗(yàn)時(shí)，結(jié)果出現(xiàn)amelogenin Y等位基因的缺失?；?PowerPlex?16 System中 amelogenin基因的擴(kuò)增產(chǎn)物片段與Goldeneye 20A(基點(diǎn)認(rèn)知)的序列有兩個(gè)堿基的差異，使用PowerPlex?16 System進(jìn)行了驗(yàn)證，分型結(jié)果與Goldeneye 20A(基點(diǎn)認(rèn)知)一致，仍見(jiàn)amelogenin Y等位基因的缺失。為驗(yàn)證父子性別而進(jìn)行Y－STR擴(kuò)增，結(jié)果DYS456及DYS458基因座的等位基因缺失。DNA檢驗(yàn)中，等位基因丟失有多種原因，如DNA嚴(yán)重降解、抑制物的存在或低拷貝模板、引物區(qū)點(diǎn)突變等均可導(dǎo)致等位基因缺失。本案檢材良好，電泳熒光峰高(RFU值)大于500且重復(fù)擴(kuò)增結(jié)果一致，因此認(rèn)為本實(shí)驗(yàn)結(jié)果中等位基因的缺失不是模板質(zhì)量的原因。且為排除引物區(qū)點(diǎn)突變，避開(kāi)試劑盒中amelogenin Y、DYS456及DYS458引物結(jié)合區(qū)而自行設(shè)計(jì)引物，擴(kuò)增結(jié)果顯示仍出現(xiàn)缺失。因此推斷是Y染色體的部分缺失導(dǎo)致擴(kuò)增失敗。

Chang等［3］曾報(bào)道18個(gè)缺失 amelogenin的男性均出現(xiàn)DYS458的缺失，并且認(rèn)為amelogenin與DYS458相隔1.13 Mb通常會(huì)出現(xiàn)同時(shí)缺失，本文驗(yàn)證了此結(jié)論。但Jobling等［4］報(bào)道來(lái)自12個(gè)不同國(guó)家的45名amelogenin缺失的男性中，有4名沒(méi)有出現(xiàn)DYS458的缺失。因本案兩位受檢男性確認(rèn)為父子關(guān)系，顯然amelogenin、DYS456及DYS458的缺失沒(méi)有影響其生殖功能。Turrina等［2］也報(bào)道過(guò)相同案例，認(rèn)為amelogenin與 DYS458缺失是不影響生育的，且在父子之間表現(xiàn)出垂直遺傳。張清健等［5］曾報(bào)道影響男性生育的原因通常是Y染色體長(zhǎng)臂的變異，而短臂對(duì)生育影響較小。

綜上所述，法庭科學(xué)應(yīng)用amelogenin基因判斷性別時(shí)應(yīng)謹(jǐn)慎，在實(shí)際辦案中若發(fā)現(xiàn)amelogenin對(duì)性別的判定結(jié)果與其線索或證據(jù)不符時(shí)，應(yīng)考慮是否有Y等位基因丟失的可能，需結(jié)合其他方法(如SRY［6］、Y－STR)加以核實(shí)。Y染色體為男性所特有，在司法鑒定中具有優(yōu)勢(shì)，尤其是在父系相關(guān)鑒定及性侵犯案件中具有明顯優(yōu)勢(shì)?；谏贁?shù)男性可能會(huì)出現(xiàn)Y染色體的部分缺失，為了提高法醫(yī)應(yīng)用的信息量，建議在現(xiàn)有的Y－STR基礎(chǔ)上增加新的基因座。

1 Sullivan KM，Mannucci A，Kimpton CP，et al.A rapid and quantitative DNA sex test:fluorescence－based PCR analysis of XY homologous gene amelogenin［J］.Biotechniques ，1993，15(4):636 －638.

2 Turrina S，F(xiàn)ilippini G，Voglino G，et al.Two additional reports of deletion on the short arm of the Y chromosome［J］.Forensic Sci Int Genet.，2011，5(3):242 －246.

3 Chang YM，Perumal R，Keat PY，et al.A distinct Y －STR haplotype for amelogenin negative males characterized by a large Yp11.2(DYS458 － MSY1 － AMEL － Y)deletion［J］.Forensic Sci Int，2007，166(2－3):115－120.

4 Jobling MA，Lo IC，Turner DJ，et al.Structural variation on the short arm of the human Y chromosome:recurrent multigene deletions encompassing amelogenin Y［J］.Hum Mol Genet，2007，16(3):307－316.

5 張清健，鄭立新，田佩玲，等.人類(lèi)男性Y染色體變異對(duì)男性生育力影響的臨床分析［J］.中國(guó)計(jì)劃生育學(xué)雜志，2006，14(5):289－292.

6 Kastelic V，Budowle B，Drobnic K.Validation of SRY marker for forensic casework analysis［J］.J Forensic Sci，2009，54(3):551 －555.

2011－12－22

2012－03－01

［責(zé)任編輯:裴開(kāi)顏］