抵抗素對(duì)NAFLD肝纖維化的影響及可能的體內(nèi)外機(jī)制

楊云鵬, 管小琴, 祁明美, 朱良榮

(重慶醫(yī)科大學(xué) 病理教研室, 分子醫(yī)學(xué)與腫瘤研究中心, 重慶 400016)

抵抗素對(duì)NAFLD肝纖維化的影響及可能的體內(nèi)外機(jī)制

楊云鵬, 管小琴*, 祁明美, 朱良榮

(重慶醫(yī)科大學(xué) 病理教研室, 分子醫(yī)學(xué)與腫瘤研究中心, 重慶 400016)

應(yīng)用高脂飲食飼養(yǎng)Wistar大鼠建立非酒精性脂肪肝?。╪on-alcoholic fatty liver disease，NAFLD）肝纖維化體內(nèi)模型, 選用重組抵抗素作用于肝星狀細(xì)胞(hepatic stellate cell-t6, HSC-T6)建立體外模型。觀察肝組織纖維化的情況；檢測(cè)體內(nèi)體外Ⅲ型前膠原(PCⅢ)、透明質(zhì)酸(HA)、Ⅳ型膠原(CIV)、層黏蛋白(LN)水平；檢測(cè)肝組織抵抗素mRNA和蛋白的表達(dá)水平；檢測(cè)HSC-T6中轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β-1(TGF-β1) mRNA及腫瘤壞死因子α(TNF-α)mRNA表達(dá)水平。結(jié)果顯示, 隨著高脂喂養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng), 大鼠肝組織抵抗表達(dá)逐漸增加且纖維化程度逐漸加重; 隨著抵抗素濃度的增加, HSC-T6上清中纖維化指標(biāo)升高, 細(xì)胞中TGF-β1 mRNA及TNF-α mRNA表達(dá)增加。與對(duì)照組比較, 各指標(biāo)差異均有顯著性(P<0.05或0.01)。上述結(jié)果顯示抵抗素通過(guò)TNF-α、TGF-β1誘導(dǎo)NAFLD肝纖維的發(fā)生和發(fā)展。

抵抗素; 非酒精性脂肪肝; 纖維化; 腫瘤壞死因子α

2002 年，美國(guó)肝臟病學(xué)會(huì)非酒精性脂肪性肝炎專(zhuān)題研討會(huì)認(rèn)為NAFLD (non-alcoholic fatty liver disease)是代謝綜合征在肝臟的表現(xiàn) (Neuschwander-Tetri & Caldwell, 2003), 其病理過(guò)程包括單純性脂肪肝、脂肪性肝炎(NASH)和肝硬化, 后期可發(fā)展為肝細(xì)胞癌和失代償性肝病(Adams et al, 2005)。以肝纖維化為主要特征的NASH是NAFLD進(jìn)展的重要中間階段, 也是隱源性肝硬化的重要病因。在此階段經(jīng)積極治療病情可穩(wěn)定或在一定程度上好轉(zhuǎn), 但當(dāng)繼續(xù)發(fā)展即可導(dǎo)致不可逆轉(zhuǎn)的肝硬化，甚至肝癌(Castera, 2008)。肝纖維化是肝臟對(duì)多種病因慢性刺激所致?lián)p傷后的修復(fù)反應(yīng), 其特征是以Ⅰ型膠原為主的細(xì)胞外基質(zhì)(EMC)的過(guò)度沉積。HSC(hepatic stellate cell)是產(chǎn)生EMC的主要細(xì)胞, HSC的活化是纖維生成的關(guān)鍵。抵抗素為新近發(fā)現(xiàn)的細(xì)胞因子,有研究認(rèn)為抵抗素與炎癥密切相關(guān)(Lee et al,2009)。目前, 抵抗素與NAFLD發(fā)生和發(fā)展關(guān)系尚存在許多爭(zhēng)議, 其是否可通過(guò)炎癥機(jī)制參與肝纖維化進(jìn)展研究甚少。

本實(shí)驗(yàn)通過(guò)高脂喂養(yǎng)大鼠模擬 NAFLD模型,觀察抵抗素與肝纖維化關(guān)系，并通過(guò)體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn),應(yīng)用抵抗素作用于與肝纖維化密切相關(guān)的 HSC-T6(hepatic stellate cell-t6), 探討抵抗素與炎癥及肝纖維化的關(guān)系及作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

清潔級(jí)健康雄性 Wistar大鼠 24只, 體重為（200±20）g (由重慶醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供)。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)于重慶醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心?；A(chǔ)飼料適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，隨機(jī)分為對(duì)照組(9只)和模型組(15只), 分籠飼養(yǎng)。對(duì)照組給予基礎(chǔ)飼料, 模型組給予改良高脂飼料(Wang & Guan, 2007)。根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)觀察于 15周出現(xiàn)較理想的纖維化趨勢(shì), 本實(shí)驗(yàn)分別于15、18、21周末處理對(duì)照組(各3只)和模型組(各 5 只)。

1.2 培養(yǎng)細(xì)胞

HSC-T6由重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院消化研究室惠贈(zèng)。用含10%胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基培養(yǎng) HSC-T6細(xì)胞, 細(xì)胞長(zhǎng)滿培養(yǎng)瓶 75%后傳代,待貼壁后分4組：A組(1640培養(yǎng)液); B、C和D組分別于 1640培養(yǎng)液中加入不同濃度抵抗素25 μg/ L、50 μg/ L 和 100 μg/ L, 各組細(xì)胞分別培養(yǎng)72 h后, 進(jìn)行各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)指標(biāo)的檢測(cè)。

1.3 主要試劑

PRMI-1640、胰酶購(gòu)自中國(guó)重慶百杰生物有限公司; 胎牛血清購(gòu)自中國(guó)杭州四季青生物公司; 重組抵抗素購(gòu)自中國(guó)重慶博培生物技術(shù)有限公司; 總RNA提取試劑BioZol購(gòu)自中國(guó)重慶升博科技有限公司; reverse transcription-PCR (RT-PCR)試劑盒購(gòu)自中國(guó)成都天泰生物技術(shù)有限公司; 蛋白提取試劑盒購(gòu)自中國(guó)江蘇碧云天生物技術(shù)研究所; 抵抗素抗體購(gòu)自中國(guó)重慶百杰生物有限公司代理; β-actin、辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的IgG購(gòu)自中國(guó)北京博奧森生物技術(shù)有限公司。

1.4 標(biāo)本采集

處理前大鼠禁食12 h, 用3.5%的水合氯醛腹腔麻醉(1 mL/100 g體重), 眼球取血并分離血清,－80 ℃冰箱保存。剖腹取肝臟組織, 取相同部位肝組織(1 cm×1 cm×0.3 cm)浸泡入10%中性甲醛溶液固定, 備常規(guī)石蠟包埋切片VG染色作光鏡標(biāo)本; 另取相同部位肝組織(～0.3 cm×0.3 cm×0.3 cm, 數(shù)枚)。戊二醛固定制備電鏡標(biāo)本。其他操作由重慶醫(yī)科大學(xué)電鏡室完成。其余的肝組織置于液氮罐中凍存。

1.5 動(dòng)物血清、體外細(xì)胞上清纖維化指標(biāo)檢測(cè)

酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)試劑盒檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)組血清、體外細(xì)胞上清中Ⅲ型前膠原(PCⅢ)、透明質(zhì)酸(HA)、Ⅳ型膠原(CⅣ)、層黏蛋白(LN)水平, 按照試劑盒說(shuō)明書(shū)操作。

1.6 RT-PCR法檢測(cè)大鼠肝組織中抵抗素、HSC-T6的TGFβ-1 mRNA及TNF-a mRNA表達(dá)水平

按 TRIzol試劑說(shuō)明書(shū)提取肝組織和細(xì)胞總RNA。分光光度計(jì)于260 nm波長(zhǎng)測(cè)RNA含量。取2 g總RNA為模板, 按照RT-PCR試劑盒說(shuō)明進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA。各引物序列見(jiàn)表1。

表1 本研究中的RT-PCR引物序列Tab. 1 RT-PCR primers sequence in the study

內(nèi)參β-actin 1基因擴(kuò)增條件為：94 ℃ , 3 min;94 ℃ , 30 s, 56 ℃ , 30 s, 72 ℃ , 1 min,共30個(gè)循環(huán);72 ℃, 5 min。抵抗素基因擴(kuò)增條件為：94 ℃, 3 min;94 ℃ , 30 s, 54 ℃ , 30 s, 72 ℃ , 1 min,共30個(gè)循環(huán);72 ℃ , 5 min。β-actin 2 基因和TGFβ-1基因擴(kuò)增條件為：94 ℃ , 3 min; 94℃ , 30 s, 58 ℃ , 30 s, 72 ℃, 1 min, 共30個(gè)循環(huán); 72 ℃ , 5 min。TNF-α基因擴(kuò)增條件為：94 ℃, 3 min; 94℃ , 30 s, 55 ℃ , 30 s, 72 ℃,1 min, 共 30個(gè)循環(huán); 72 ℃ , 5 min。擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)1.5%瓊脂糖凝膠電泳(電壓 100 V, 20 min), 用Quantity One軟件成像及定量分析, 以各目的基因與內(nèi)參基因光密度的比值示其相對(duì)含量。

1.7 Western blotting法檢測(cè)大鼠肝組織中抵抗素

蛋白水平的表達(dá)

提取肝組織蛋白, 并采用Bradford法進(jìn)行蛋白定量。取50 μg蛋白進(jìn)行十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis SDS-PAGE)電泳, 轉(zhuǎn)膜, 用脫脂奶粉稀釋抵抗素一抗, 4 ℃孵育過(guò)夜, 室溫下孵育相應(yīng)二抗60 min, 發(fā)光, 應(yīng)用Quantity One軟件成像及定量分析, 以各目的基因與內(nèi)參基因光密度的比值示其相對(duì)含量。

1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示, 采用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析, 組間比較用t-檢驗(yàn),P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 肝組織病理學(xué)改變

較正常對(duì)照組, 15～18周NAFLD模型組大鼠可見(jiàn)肝組織纖維組織增生, 21周NAFLD模型組大鼠肝組織纖維明顯增生致匯管區(qū)擴(kuò)大并局部形成纖維條索 (圖 1A)。電鏡觀察見(jiàn)肝細(xì)胞胞漿中見(jiàn)較多脂質(zhì)空泡。狄氏間隙內(nèi)膠原原纖維增生, HSC(hepatic stellate cell)胞漿內(nèi)脂質(zhì)空泡明顯減少，甚至消失(圖 1B)。

2.2 血清纖維化指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果

與對(duì)照組比較, PCⅢ、HA、CIV、LN均隨著高脂喂養(yǎng)大鼠時(shí)間的延長(zhǎng)而逐步升高, 并且在 21

圖1 21周模型組肝組織纖維化VG染色(×400)(A)和肝星狀細(xì)胞電鏡(×8 000)(B)Fig. 1 VG staining of liver fibrosis (×400)(A) and electron microscopy of hepatic stellate cells (×8 000)(B)for the 21 weeks model group

周時(shí)各指標(biāo)升高最為顯著。各時(shí)相模型組與對(duì)應(yīng)對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05或P<0.01)(表 2)。

表2 大鼠血清纖維化譜的變化和肝組織抵抗素基因和蛋白表達(dá)Tab. 2 Spectrum of changes in serum fibrosis and liver tissue resistin gene and protein expression

2.3 大鼠肝組織中抵抗素基因和蛋白的表達(dá)

與對(duì)照組比較, 各時(shí)相模型組大鼠肝組織中抵抗素基因轉(zhuǎn)錄水平逐漸升高, 且以 21周升高最為明顯, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。(圖 2A 和表2)大鼠肝組織中抵抗素蛋白表達(dá)趨勢(shì)與抵抗素基因轉(zhuǎn)錄水平趨勢(shì)相一致(圖2B和表2)

2.4 體外細(xì)胞上清纖維化指標(biāo)檢測(cè)

隨著重組抵抗素濃度的增加, 纖維化譜各指標(biāo)逐漸增加。與對(duì)照組比較, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05) (表 3)。

2.5 細(xì)胞 TGFβ-1 mRNA 及 TNF-α mRNA 轉(zhuǎn)錄水平

RT-PCR擴(kuò)增產(chǎn)物電泳結(jié)果顯示：與A組比較,隨著加入抵抗素濃度的增加, TGFβ-1及 TNF-α mRNA表達(dá)水平升高, 且以D組表達(dá)水平最高, 差異具有顯著性(P<0.05)(圖3和表3)。

圖2 各組抵抗素的mRNA表達(dá)的RT-PCR(A)和蛋白表達(dá)(B)的檢測(cè)結(jié)果Fig. 2 Results of mRNA expression by RT-PCR (A) and protein expression (B) for each group of resistin

表3 細(xì)胞上清纖維化指標(biāo)變化及細(xì)胞TGFβ-1mRNA、TNF-α mRNA基因轉(zhuǎn)錄水平Tab. 3 Cell supernatant fibrosis indexes and gene transcription level of TGFβ-1 mRNA, TNF-α mRNA

圖3 TGFβ-1(A)和 TNF-α(B)各組 mRNA 表達(dá)的RT-PCR檢測(cè)結(jié)果Fig. 3 mRNA expression by RT-PCR for each group of TGFβ-1(A) and TNF-α(B)

3 討 論

HSC又稱Ito細(xì)胞、維生素A儲(chǔ)存細(xì)胞、竇周細(xì)胞等, 在生理狀態(tài)下 HSC位于肝索與肝竇壁之間的狄氏間隙內(nèi)。HSC分布廣泛, 形態(tài)不規(guī)則, 常伸出樹(shù)狀突起, 包繞5～6個(gè)肝細(xì)胞, 因此得名為肝星狀細(xì)胞。在肝纖維化形成初期, HSC即被激活轉(zhuǎn)化為myofibroblast, 產(chǎn)生多種ECM組分, 是形成肝纖維化主要的細(xì)胞(Wells, 2008)。

抵抗素是新近發(fā)現(xiàn)的脂肪因子, Szalowska et al(2009)發(fā)現(xiàn)抵抗素不僅表達(dá)于脂肪組織, 在肝臟中也表達(dá), 且表達(dá)量高于脂肪組織。其與 NAFLD纖維化的關(guān)系尚存在爭(zhēng)議, 其作用機(jī)制研究甚少。

本課題通過(guò)高脂飲食喂養(yǎng)大鼠建立NAFLD模型, 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示, 從血清學(xué)上分析：與對(duì)照組比較, PCⅢ、HA、CIV、LN均隨著高脂喂養(yǎng)大鼠時(shí)間的延長(zhǎng)而逐步升高, 并且在 21周時(shí)各指標(biāo)升高最為顯著。各時(shí)相模型組與對(duì)應(yīng)對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05或P<0.01, 表 2)。從組織學(xué)上觀察：較正常對(duì)照組, 15～18周NAFLD模型組大鼠可見(jiàn)肝組織纖維組織增生, 21周NAFLD模型組大鼠肝組織纖維明顯增生致匯管區(qū)擴(kuò)大并局部形成纖維條索(圖1A)。電鏡觀察見(jiàn)肝細(xì)胞狄氏間隙內(nèi)有大量膠原原纖維形成，還可見(jiàn) HSC(圖 1B)。HSC又是形成肝纖維化的主要細(xì)胞。這表明, 隨著高脂喂養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng), 血清學(xué)及組織學(xué)均顯示纖維化程度逐漸加重。同時(shí), 本實(shí)驗(yàn)對(duì)抵抗素的研究結(jié)果顯示：與對(duì)照組比較, 各時(shí)相模型組大鼠肝組織中抵抗素基因轉(zhuǎn)錄水平逐漸升高, 且以 21周升高最為明顯, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(圖2A和表2)。大鼠肝組織中抵抗素蛋白表達(dá)趨勢(shì)與抵抗素基因轉(zhuǎn)錄水平趨勢(shì)相一致(圖2B和表2)。

這表明, 隨著高脂喂養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng), 大鼠肝臟內(nèi)的抵抗素濃度越來(lái)越高。提示抵抗素與肝纖維化密切相關(guān)。

抵抗素與肝纖維化之間的關(guān)系是怎樣的；是通過(guò)什么機(jī)制來(lái)誘導(dǎo)肝纖維化的呢，為此，我們做了體外實(shí)驗(yàn)予以研究。

我們選用不同濃度重組抵抗素直接作用于HSC-T6 ,能夠排除其他因素對(duì)機(jī)體影響, 使抵抗素作為獨(dú)立因素作用于 HSC-T6, 探討抵抗素對(duì)肝纖維化的可能作用機(jī)制。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示, 隨著重組抵抗素濃度的增加, 纖維化譜 PCⅢ、HA、CIV、LN逐漸增加。與對(duì)照組比較, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05) (表3)。這表明隨著重組抵抗素濃度的增加,肝纖維化程度加重。RT-PCR擴(kuò)增產(chǎn)物電泳結(jié)果顯示：與 A組比較, 隨著加入抵抗素濃度的增加,TGFβ-1 mRNA及TNF-α mRNA表達(dá)水平升高, 且以 D組表達(dá)水平最高, 差異具有顯著性(圖 3和表3)。由此推測(cè)抵抗素可能通過(guò)TGFβ-1和TNF-α 誘導(dǎo)NAFLD肝纖維化發(fā)生發(fā)展。

有研究發(fā)現(xiàn)肝硬化者的血清抵抗素水平較健康者明顯升高，且與肝臟炎癥和纖維化程度呈正相關(guān)(Kakizaki et al, 2008; Pagano et al, 2006)。 Fu et al(2006)將重組人抵抗素加入到人和鼠的巨噬細(xì)胞,導(dǎo)致促炎因子TNF-α的分泌升高, 提示抵抗素具有促炎作用。TNF-α等炎癥細(xì)胞因子通過(guò)正反饋調(diào)節(jié)激發(fā)抵抗素的生成, 即抵抗素與 TNF-α相互協(xié)同,促發(fā)炎癥瀑布反應(yīng)。TNF-α是最早發(fā)現(xiàn)的介導(dǎo)肝細(xì)胞損傷的脂肪因子, 在局部脂肪組織中的表達(dá)與肥胖程度成正相關(guān)(Fantuzzi, 2005)。肝臟是TNF-α重要的靶器官。Kitamura et al (2002)證實(shí)TNF-α是通過(guò)與受體的結(jié)合發(fā)揮生物學(xué)作用。已知TNF-α的受體是由不同基因編碼的相對(duì)分子量為 5.5×104的TNF受體(TNF-Rp55)和相對(duì)分子質(zhì)量為7.5×104的TNF受體(TNF-Rp75)。TNF-Rp55表達(dá)于近乎所有的體細(xì)胞中, 但 TNF-Rp75則主要表達(dá)于粒細(xì)胞和上皮細(xì)胞。Tomita et al (2006)研究發(fā)現(xiàn), 在 MCD(methionine and choline deficient)喂養(yǎng)鼠中, Kuppfer細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞中血管細(xì)胞黏附分子——1(VCAM-1)和VCAM -2的表達(dá)上調(diào)可導(dǎo)致TNF-α從kuppfer細(xì)胞釋放增加, 表明TNF-Rp55是TNF-α在多種類(lèi)型細(xì)胞中的主要信號(hào)受體。通過(guò)研究TNF-α/TNF-Rp55信號(hào)在肝纖維化過(guò)程中的病理生理作用, 認(rèn)為T(mén)NF- Rp55介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑可調(diào)節(jié) kuppfer細(xì)胞的活化, 并最終促進(jìn)肝纖維化的進(jìn)展, 而對(duì)TNF- Rp55受體的封閉作用可改善肝纖維化。TNF-α參與肝纖維化的可能機(jī)制有：1) 增加肝臟內(nèi)的脂質(zhì)合成; 2) 增加激素敏感性脂肪酶活性來(lái)促進(jìn)脂肪動(dòng)員, γ抑制脂蛋白脂肪酶的活性使脂肪組織貯存脂肪酸減少; 3) 血漿中的游離脂肪酸升高,而FFA的升高又可以通過(guò)溶酶體途徑使TNF-α的表達(dá)增加, 形成惡性循環(huán), 從而引起線粒體結(jié)構(gòu)和功能異常、氧化應(yīng)激、脂肪酸β氧化超載, 最終導(dǎo)致脂肪在肝臟中沉積; 4) 活化細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶ERK和JNK通路, 促進(jìn)HSC產(chǎn)生ECM; 5) 可刺激HSC表達(dá)基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑 (TIMP -1), 減少ECM的降解。

Tian et al (2003)研究還發(fā)現(xiàn), TNF-α還能間接誘導(dǎo)其他促纖維化因子的作用, 如IL-1和IL-6等。這些因子, 一方面促進(jìn)局部炎癥反應(yīng), 使肝組織不斷受損；另一方面促進(jìn)成纖維細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞的增殖和分化, 維持肝組織損傷與修復(fù)循環(huán), 結(jié)果使更多的間質(zhì)細(xì)胞參與并產(chǎn)生大量 ECM, 從而導(dǎo)致肝纖維化的發(fā)生和發(fā)展。

TGFβ-1是肝纖維化形成過(guò)程中的重要始動(dòng)因子, 是目前已知最強(qiáng)的促肝纖維化細(xì)胞因子,TGFβ-1對(duì)HSC的活化是肝纖維化發(fā)病機(jī)制的中心環(huán)節(jié)(Gressner & Weiskirechen, 2006)。TGFβ-1 通過(guò)TGFβ/Smad信號(hào)傳導(dǎo)通路促進(jìn) HSC激活, 轉(zhuǎn)化為myofibroblast, 誘導(dǎo)活化的HSC收縮, 在HSC活化早期刺激ECM的合成與沉積, 造成惡性循環(huán), 促使肝纖維化發(fā)生發(fā)展(Thenappan et al, 2010)。

綜上所述, 抵抗素通過(guò)TNF-α參與的炎癥機(jī)制以及 TGFβ-1對(duì)肝纖維化的作用誘導(dǎo)NAFLD纖維化的發(fā)生與發(fā)展。抑制肝臟慢性炎癥或者阻止抵抗素促炎機(jī)制, 有可能成為抑制 NAFLD肝纖維化發(fā)生發(fā)展的治療新思路。

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Effects of resistin on hepatic fibrosis: Possible mechanisms in non-alcoholic fatty liver disease inin vitroandin vivo

YANG Yun-Peng, GUAN Xiao-Qin*, QI Ming-Mei, ZHU Liang-Rong
(Department of Pathology,Chongqing Medical University,Molecular Medicine and Cancer Research Center of Chongqing Medical University,Chongqing400016,China）

To investigate the effects and possible mechanisms of resistin on hepatic fibrosis in non-alcoholic fatty liver disease, this review used anin vivomodel utilizing Wistar rats with a high fat diet. Recombinant resistin was selected to play role in hepatic stellate cells in the HSC-T6 cell line. We observed the degrees of hepatic fi brosis,measured the levels of Liver fibrosis spectrum and detected expression levels of resistin mRNA and protein in liver tissue as well as the expression levels of TGFβ-1 and TNF-α mRNA in HSC-T6. The results showed that expression of resistin in rat liver tissue and the degree of hepatic fibrosis increased over time with a high fat diet. Along with the increased concentration of resistin and levels of fibrosis index, TGFβ-1and TNF-α also increased in HSC-T6 cells. Compared with the control group, significant differences were found between each group, suggesting resistin by proinflammatory cytokine TNF-α and TGF-β1 induced the occurrence and development of NAFLD in hepatic fibrosis.

Resistin; NAFLD; Hepatic fibrosis; TNF-α

R589.2；R575.5

A

0254-5853-(2012)04-0367-06

10.3724/SP.J.1141.2012.04367

2012-03-05；接受日期：2012-06-05

重慶市教委科學(xué)技術(shù)研究資助項(xiàng)目(KJ090327)

?通信作者(Corresponding author)，E-mail: guanxiaoqin2003@yahoo.com.cn

男, 碩士研究生。主要研究方向?yàn)楦闻K病理。Email:929494606@qq.com