高效液相色譜法測(cè)定養(yǎng)陰清肺丸中芍藥苷的含量

范桂強(qiáng) 柳俊萍 頡維民 董軍杰

(河北省衡水市食品藥品檢驗(yàn)所化學(xué)室，河北衡水 053000)

高效液相色譜法測(cè)定養(yǎng)陰清肺丸中芍藥苷的含量

范桂強(qiáng) 柳俊萍1頡維民1董軍杰△

(河北省衡水市食品藥品檢驗(yàn)所化學(xué)室，河北衡水 053000)

色譜法，高壓液相;芍藥甙;分析;丸劑

養(yǎng)陰清肺丸是由生地黃、玄參、麥門(mén)冬、白芍藥、川貝母、牡丹皮、薄荷、甘草8味藥組成的中藥復(fù)方制劑，具有養(yǎng)陰潤(rùn)燥、清肺利咽的功能。主要用于陰虛肺燥，咽喉干痛，干咳少痰或痰中帶血。白芍藥斂陰泄熱，牡丹皮涼血消腫，是該方劑的主要成分之一?，F(xiàn)行藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中無(wú)白芍藥、牡丹皮中芍藥苷的含量測(cè)定方法，為了進(jìn)一步控制產(chǎn)品質(zhì)量，提高藥品標(biāo)準(zhǔn)，本研究采用高效液相色譜(HPLC)法測(cè)定養(yǎng)陰清肺丸中的主要成分芍藥苷的含量，結(jié)果如下。

1 材料與方法

1.1 儀器與制劑 高效液相色譜儀:Waters e2695高效液相色譜儀，檢測(cè)器:Waters 2489紫外檢測(cè)器;色譜工作站:Empower。養(yǎng)陰清肺丸為從市面購(gòu)得，北京同仁堂股份有限公司同仁堂制藥廠生產(chǎn)(國(guó)藥準(zhǔn)字Z11020179，批號(hào):0013657、0013659、0013660);芍藥苷對(duì)照品(批號(hào):2011 －07－36—2010－03－05，中國(guó)藥品生物制品檢定所);乙腈為色譜純;乙醇為分析純;水為純化水。

1.2 方法

1.2.1 色譜條件 Waters色譜柱(SymmetryC18，3.9 mm×150 mm，5 μm);流動(dòng)相:乙腈 － 0.1% 磷酸溶液(14∶86);流速:1.0 mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng):230 nm;柱溫:30℃;進(jìn)樣量:10 μL;理論板數(shù):按芍藥苷峰計(jì)應(yīng)不低于3 000;芍藥苷峰與其前后相鄰峰的分離度均＞1.5。

1.2.2 試驗(yàn)溶液的制備

1.2.2.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取芍藥苷對(duì)照品0.010 46 g，置100 mL容量瓶中，加稀乙醇使溶解，并稀釋至刻度，搖勻;精密吸取5 mL，置25 mL量瓶中，加稀乙醇稀釋至刻度，搖勻，制成每1 mL中含20 μg的溶液，即得。

1.2.2.2 供試品溶液的制備 取養(yǎng)陰清肺丸約0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加稀乙醇50 mL，密塞，稱定質(zhì)量，超聲處理50 min，放冷，再稱定質(zhì)量，用稀乙醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，用微孔濾膜(0.45 μm)濾過(guò)，即得。

1.2.2.3 陰性對(duì)照溶液的制備 按養(yǎng)陰清肺丸處方比例和工藝同法制成缺牡丹皮及白芍藥的陰性樣品，按上述供試品溶液的制備方法制成陰性溶液。

1.2.2.4 樣品測(cè)定干擾性試驗(yàn) 按上述色譜條件，分別取對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性樣品溶液各10 μL，注入色譜儀，測(cè)定。供試品色譜中，芍藥苷峰與其他峰分離較好，陰性樣品在芍藥苷出峰處無(wú)干擾峰出現(xiàn)，結(jié)果表明本法可行。

1.2.3 線性關(guān)系考察 精密稱取芍藥苷對(duì)照品0.021 07 g，置100 mL容量瓶中，加稀乙醇溶解至刻度，搖勻，分別精密量取 2、3.5、5、6、7.5、9 mL，置 50 mL 容量瓶中，加稀乙醇制備成不同濃度對(duì)照品溶液。精密吸取10 μL，注入液相色譜儀，按上述條件分別測(cè)定芍藥苷的吸收峰峰面積。

1.2.4 精密度試驗(yàn) 精密吸取上述對(duì)照品溶液10 μL，重復(fù)進(jìn)樣5次，測(cè)得峰面積并計(jì)算。

1.2.5 重復(fù)性試驗(yàn) 取北京同仁堂股份有限公司同仁堂制藥廠生產(chǎn)的養(yǎng)陰清肺丸(批號(hào):0013657)樣品，按0.5 g精密稱取樣品6份，按1.2.2項(xiàng)制備供試品溶液，吸取10 μL，注入液相色譜儀，測(cè)定并計(jì)算含量。

1.2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取1.2.5供試品溶液(北京同仁堂股份有限公司同仁堂制藥廠，批號(hào):0013657)，每隔2 h進(jìn)樣測(cè)定峰面積。

1.2.7 加樣回收率試驗(yàn) 取已知含量的養(yǎng)陰清肺丸樣品(北京同仁堂股份有限公司同仁堂制藥廠，批號(hào):0013657)，取0.25 g，精密稱定共9份，分別精密加入濃度為 7.380 0、9.615 0、11.070 0 mg/mL 的芍藥苷對(duì)照品溶液50 mL(精密稱取芍藥苷對(duì)照品0.014 76、0.012 82 g置100 mL的容量瓶中，分別加稀乙醇使溶解，并稀釋至刻度，再分別吸取濃度為 0.1476 mg/mL的對(duì)照品 10、15 mL，濃度為0.1282 mg/mL的對(duì)照品溶液15 mL，分別置于200 mL容量瓶中，加稀乙醇稀釋至刻度，搖勻，備用)，按1.2.2項(xiàng)下自“精密加入稀乙醇50 mL”起制備得供試品溶液，用外標(biāo)法測(cè)定，計(jì)算回收率。

1.2.8 樣品測(cè)定 按 1.2.1、1.2.2 方法測(cè)定 3 批樣品含量。

2 結(jié)果

2.1 對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性對(duì)照溶液的色譜見(jiàn)圖1～3。

圖1 芍藥苷對(duì)照品HPLC圖

圖2 樣品溶液HPLC圖

圖3 陰性樣品溶液HPLC圖

2.2 芍藥苷對(duì)照品的精密度試驗(yàn)結(jié)果 見(jiàn)表1。

表1 芍藥苷對(duì)照品的精密度試驗(yàn)結(jié)果

由表1可見(jiàn)，芍藥苷對(duì)照品精密度良好。

2.3 供試品溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果 見(jiàn)表3。

表2 供試品溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

由表2可見(jiàn)，供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.4 芍藥苷回收率測(cè)定結(jié)果 見(jiàn)表3。

表3 芍藥苷回收率測(cè)定結(jié)果

由表3可見(jiàn)，芍藥苷含量測(cè)定加樣回收率試驗(yàn)符合規(guī)定。

2.5 芍藥苷線性關(guān)系考察結(jié)果 見(jiàn)表5。

表4 芍藥苷線性關(guān)系考察結(jié)果

由表4可見(jiàn)，峰面積為3次測(cè)定平均值。以進(jìn)樣量(μg)與峰面積進(jìn)行回歸計(jì)算，得回歸方程:Y=1.258 3×106X+2.306 4 ×104 r=0.999 5，表明芍藥苷在0.081 ～0.365 μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.6 含量測(cè)定重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果 見(jiàn)表5。

表5 含量測(cè)定重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果

由表5可見(jiàn)，6次含量測(cè)定數(shù)據(jù)重復(fù)性良好。

2.7 樣品中芍藥苷含量測(cè)定結(jié)果 見(jiàn)表6。

表6 樣品中芍藥苷含量測(cè)定結(jié)果

由表6可見(jiàn)，芍藥苷含量均符合規(guī)定。

3 討論

養(yǎng)陰清肺丸是中藥復(fù)方制劑，成分復(fù)雜，為達(dá)到芍藥苷的理想分離效果，本試驗(yàn)參照《中國(guó)人民共和國(guó)藥典2010年版》一部方法，采用乙腈－0.1%磷酸溶液(14∶86)的流動(dòng)相［1］，測(cè)定本品中芍藥苷的含量，對(duì)流動(dòng)相比例進(jìn)行了調(diào)整，比較了乙腈 －0.1%磷酸溶液(13∶87)、(15∶85)、(16∶84)等不同比例流動(dòng)相的分離效果，結(jié)果證明(14∶86)的流動(dòng)相可使芍藥苷的峰形對(duì)稱，分離完全，效果最好。通過(guò)對(duì)不同時(shí)間超聲提取結(jié)果的比較，確定超聲50 min最好。通過(guò)對(duì)不同提取試劑的試驗(yàn)比較，確定稀乙醇作為提取試劑效果最好。

用本法測(cè)定養(yǎng)陰清肺丸中芍藥苷的含量作為定量指標(biāo)具有實(shí)際意義，方法簡(jiǎn)便、快速，準(zhǔn)確可靠。

［1］ 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典2010年版:一部［M］.北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010:96.

R284.1

A

1002－2619(2012)07－1063－03

△通訊作者:河北省醫(yī)學(xué)情報(bào)研究所，河北 石家莊 050071

1 河北省衡水市食品藥品檢驗(yàn)所中藥室，河北 衡水 053000

范桂強(qiáng)(1978—)，男，主管藥師，學(xué)士。從事藥品檢驗(yàn)與標(biāo)準(zhǔn)研究工作。研究方向:藥品檢驗(yàn)與分析。

2012－04－11)