密穗馬先蒿不同萃取部位抗運動性疲勞的體內(nèi)活性研究

朱梅菊，蔡彩鳳，譚寧華，熊靜宇，朱洪竹，羅齊軍

1湛江師范學院體育科學學院，湛江524048;2 中國科學院昆明植物研究所植物化學與西部植物資源持續(xù)利用國家重點實驗室，昆明650204;3 井岡山大學體育學院，吉安343009

玄參科馬先蒿屬植物約有500 余種，其中三分之二在我國有分布。多有滋陰補腎、補中益氣、健脾和胃等功效，亦有清熱解毒、利尿、保肝等作用［1］。藥理研究表明，該屬植物所含的苯丙素苷類化合物具有清除自由基、延緩骨骼肌疲勞等多種生理活性［2］。密穗馬先蒿(Pedicularis densispica Franch)為資源豐富的馬先蒿屬植物之一，民間用于產(chǎn)后體虛，效果顯著［1］。研究表明美觀馬先蒿(P.decora)的根(太白參)具有增強身體機能作用［3］，其冷提取物具有明顯的抗氧化損傷和延緩疲勞作用［4］。我們的研究表明密穗馬先蒿提取物具有明顯的改善長時間遞增大強度運動大鼠貧血狀態(tài)而達到抗疲勞的作用［5，6］，為此本研究進一步對密穗馬先蒿進行劃段分析其抗運動性疲勞的作用，為馬先蒿屬植物抗運動性疲勞活性成分的分離提取提供有益的依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗動物及分組

昆明種4 周齡健康雄性SPF 級小鼠70 只，體重22.67 ±2.65 g，由廣東醫(yī)學院實驗動物中心提供(粵檢證字99A053 號)。實驗動物適應性喂養(yǎng)2 d后，隨機分為正常組(Ⅰ)、運動組(Ⅱ)、陽性對照組(人參提取物，Ⅲ)、石油醚組(Ⅳ)、乙酸乙酯組(Ⅴ)、正丁醇組(Ⅵ)、正丁醇萃余物組(Ⅶ)。每組10 只，分籠飼養(yǎng)，自由飲食，室溫18～24 ℃。

1.2 人參提取物的制備

從昆明市藥材局購買云南產(chǎn)人參30 g。首先運用石油醚分別熱提3 次，減壓濃縮成浸膏。其殘渣先用95%的乙醇分別熱提3 次，減壓濃縮成浸膏。然后再用水煎煮3 次，在60 ℃的水浴中濃縮成浸膏。最后將此三者合并，得到3 g 混合提取物。提取物每mg 相當于0.01 g 生藥。放4 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 藥物處理及給藥方法

密穗馬先蒿采集于云南省中甸，由中國科學院昆明植物研究所王紅研究員鑒定為密穗馬先蒿。350 g 密穗馬先蒿，先用95%的乙醇分別熱提3 次(4、3、3 h)，減壓濃縮成浸膏，得到30 g 乙醇提取物。依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇進行萃取，分別減壓濃縮成浸膏，得到4.65 g 石油醚提取物(每mg 相當于0.075 g 生藥)、5.33 g 乙酸乙酯提取物(每mg 相當于0.065 g 生藥)、5.10 g 正丁醇提取物(每mg 相當于0.068 g 生藥)和5.78 g 正丁醇萃余物(每mg 相當于0.061 g 生藥)。放4 ℃冰箱保存?zhèn)溆?。石油醚提取物組、乙酸乙酯提取物組、正丁醇提取物組、正丁醇萃余物組分別灌胃石油醚提取物(0.62 g/kg 體重)、乙酸乙酯提取物(0.71 g/kg 體重)、正丁醇提取物(0.68 g/kg 體重)、正丁醇萃余物(0.77 g/kg 體重)。每天灌胃1 次，藥物劑量換算參照文獻［7］。正常組、運動組以等體積生理鹽水灌胃，陽性對照組以等體積人參提取物(0.32 g/kg體重)灌胃，實驗時間4 周。

1.4 運動方式

除正常組外分別于灌胃后3 h 進行無負重游泳，水溫29 ℃，水深40 cm。運動方案參照文獻［4］，第1、2 周每天30 min，第3 周每天60 min，第4 周每天90 min，每周游6 d，共4 周。第29 d 進行一次性力竭游泳，記錄力竭時間。力竭標準為小鼠沉入水中超過10 s，且小鼠在平面上無法完成翻正動作。

1.5 血液學參數(shù)的測定

小鼠力竭游泳運動后用1%戊巴比妥麻醉，心臟采血，肝素抗凝，用日本產(chǎn)Symsex K-4500 血細胞分析儀進行測定。檢測項目包括:紅細胞計數(shù)(RBC)、血紅蛋白含量(HB)、紅細胞比積(HCT)。

1.6 數(shù)據(jù)處理

2 結(jié)果與討論

2.1 結(jié)果

2.1.1 體重等一般情況的變化

本項研究結(jié)果(表1)表明實驗前各組小鼠健康活潑，毛發(fā)光澤，體重差異無顯著性(P ＞0.05)。實驗第一周各組小鼠體重明顯增長，差異無顯著性(P＞0.05)。實驗第二周各組小鼠體重均增長，但Ⅳ和Ⅴ組小鼠體重增長明顯低于Ⅰ和Ⅲ(P ＜0.01，P＜0.05)。實驗第三周末各組小鼠體重均增長，但均低于Ⅰ組小鼠體重(P ＜0.01，P ＜0.05)。實驗第四周末Ⅱ組小鼠活動減少，毛發(fā)枯萎，無光澤，有的小鼠出現(xiàn)大片脫毛現(xiàn)象，食欲減少，神疲乏力，體重明顯降低，與Ⅰ、Ⅲ、Ⅵ、Ⅶ組比較，有顯著性差異(P＜0.01，P ＜0.05);Ⅵ和Ⅶ組小鼠上述癥狀明顯減輕，食欲增加，體重持續(xù)增長;Ⅳ和Ⅴ組小鼠活動減少，毛發(fā)枯萎，無光澤，有的小鼠出現(xiàn)大片脫毛現(xiàn)象，食欲減少，神疲乏力，體重下降。提示密穗馬先蒿不同萃取部位抗運動性疲勞的效果以正丁醇提取物和正丁醇萃余物明顯。

2.1.2 對力竭游泳時間的影響

本項研究結(jié)果(見表2)表明Ⅵ和Ⅶ組小鼠力竭游泳時間比Ⅱ組長(P ＜0.01);Ⅳ和Ⅴ組小鼠力竭游泳時間與Ⅱ組，差異無顯著性(P ＞0.05)。Ⅵ和Ⅶ組小鼠力竭游泳時間比較差異無顯著性(P ＞0.05)。提示密穗馬先蒿不同萃取部位提高小鼠運動能力的效果以正丁醇提取物和正丁醇萃余物明顯。

表1 密穗馬先蒿不同萃取部位對小鼠體重的影響(g)Table 1 The effects of the different extracts from P.densispica on body weight of mice (g)

表2 密穗馬先蒿不同萃取部位對小鼠力竭游泳時間的影響(min)Table 2 The effects of different extracts from P.densispica on exhaustive swimming time of mice (min)

2.1.3 對血液學指標的影響

本項研究結(jié)果(見表3)表明Ⅱ組小鼠RBC 計數(shù)和HCT 值顯著低于其余各組小鼠(P ＜0.01，P ＜0.05)。Ⅳ、Ⅴ組小鼠RBC 數(shù)目和HCT 值低于Ⅵ、Ⅶ組(P ＜0.05);Ⅵ，Ⅶ組小鼠RBC 數(shù)目、HCT 值和HGB 含量差異無顯著性(P ＞0. 05)。Ⅱ組小鼠HGB 值低于Ⅰ、Ⅲ、Ⅵ、Ⅶ組(P ＜0.01，P ＜0.05);Ⅲ、Ⅵ，Ⅶ組小鼠HGB 值分別高于Ⅰ、Ⅳ、Ⅴ組(P ＜0.01)。Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ組小鼠HGB 值差異無顯著性(P＞0.05)。

表3 密穗馬先蒿不同萃取部位對小鼠血液學指標的影響Table 3 The effects of different extracts from P.densispica on hematology index of mice

2.2 討論

本項研究結(jié)果表明:通過4 周大強度遞增負荷運動以后，單純運動組小鼠出現(xiàn)了神疲乏力，活動減少，食欲降低，體重減輕，甚至脫毛等癥狀，提示4 周大強度遞增負荷運動以后小鼠運動性疲勞模型復制成功，與文獻［8］一致。從小鼠體重、食欲等疲勞相關(guān)癥狀和力竭游泳時間來看，密穗馬先蒿正丁醇提取物和正丁醇萃余物均能明顯推遲運動性疲勞的發(fā)生，提高機體的運動能力。

RBC、HGB 和HCT 是醫(yī)學界公認的診斷貧血的重要標準之一［9］. 血紅蛋白的主要作用是運輸氧氣，供組織利用，因此它是公認的監(jiān)測機體耐力運動能力的主要指標之一［10］。但是血紅蛋白只有存在于紅細胞內(nèi)才能發(fā)揮作用，如果紅細胞被破壞，血紅蛋白也就喪失其作用。故RBC 也能直接影響體內(nèi)物質(zhì)代謝和能量代謝，從而影響人體的身體機能和運動能力。一旦紅細胞受到損害，紅細胞的運氧能力下降，機體容易產(chǎn)生疲勞，嚴重影響運動能力。本項研究表明通過4 周的遞增游泳運動后單純運動組RBC 計數(shù)、HGB 含量和HCT 值明顯低于正常對照組，這可能是造成其運動能力低下和運動性疲勞出現(xiàn)的主要原因之一。Ⅳ、Ⅴ組小鼠RBC 計數(shù)、HGB含量和HCT 值分別低于Ⅵ、Ⅶ組，提示密穗馬先蒿正丁醇提取物和正丁醇萃余物改善長期遞增游泳運動小鼠貧血狀態(tài)的作用明顯強于其石油醚提取物和乙酸乙酯提取物。因此密穗馬先蒿正丁醇提取物和正丁醇萃余物能明顯推遲運動性疲勞的發(fā)生，提高機體的運動能力。同時研究結(jié)果也提示密穗馬先蒿改善長時間遞增大強度運動大鼠貧血狀態(tài)而達到抗疲勞作用［5，6］的有效成分部位主要是其極性較大的部分，為進一步的活性成分跟蹤分離提供了實驗依據(jù)。

綜上所述，我們得出結(jié)論:密穗馬先蒿正丁醇提取物和正丁醇萃余物具有一定的抗運動性疲勞作用，其機理可能與其改善長期遞增大強度運動所引起的貧血狀態(tài)有關(guān)。

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