高效毛細(xì)管電泳法測(cè)定纈沙坦苯磺酸氨氯地平

李志偉，趙云超，齊建敏

（河北科技大學(xué)化學(xué)與制藥工程學(xué)院，河北石家莊 050018）

高效毛細(xì)管電泳法測(cè)定纈沙坦苯磺酸氨氯地平

李志偉，趙云超，齊建敏

（河北科技大學(xué)化學(xué)與制藥工程學(xué)院，河北石家莊 050018）

建立了一種高效毛細(xì)管電泳方法，用于纈沙坦和苯磺酸氨氯地平的同時(shí)分析：以30 mmol／L磷酸鈉緩沖液（p H＝7.47）作為電解質(zhì)溶液，檢測(cè)波長(zhǎng)237 nm，分離電壓15 k V，高度差進(jìn)樣10 s.同時(shí)進(jìn)行了方法學(xué)驗(yàn)證：纈沙坦在0.050 4～0.504 0 mg／mL內(nèi)線性良好（r＝0.999 8，n＝6），遷移時(shí)間和峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）分別為0.3%和1.3%（n＝6），回收率為98.98%～99.79%；苯磺酸氨氯地平在0.050 4～0.504 0 mg／mL內(nèi)線性良好（r＝0.999 6，n＝6），遷移時(shí)間和峰面積的RSD為0.6%和1.4%（n＝6），回收率為98.22%～99.46%.通過(guò)上述高效毛細(xì)管電泳法，纈沙坦和苯磺酸氨氯地平在15.0 min內(nèi)分離良好，分離度（R＝29.8）.此方法快速，靈敏，實(shí)用.

纈沙坦；苯磺酸氨氯地平；高效毛細(xì)管電泳法

苯磺酸氨氯地平（amlodipine besylate）是一種重要的二氫吡啶類的鈣離子通道阻滯劑，纈沙坦（valsa－rtan）屬于血管緊張素Ⅱ受體拮抗劑.通過(guò)纈沙坦和苯磺酸氨氯地平綜合治療，高血壓患者的血壓可以降低到正常水平，而不會(huì)影響生活質(zhì)量［1］.2008年7月23日，F(xiàn)DA將纈沙坦和苯磺酸氨氯地平復(fù)方制劑，作為治療高血壓的一線藥物.降壓藥物的聯(lián)合應(yīng)用，可以降低用藥劑量，并且能夠更好地保護(hù)靶器官.通過(guò)不同的作用機(jī)制，發(fā)揮協(xié)同作用，使血壓得到長(zhǎng)期的控制.目前，測(cè)定纈沙坦和苯磺酸氨氯地平的方法主要有：分光光度法［2］，熒光法，氣相色譜法，流動(dòng)注射化學(xué)發(fā)光法，高效液相色譜法和液相色譜－質(zhì)譜聯(lián)用法［3－7］.本文建立了一種高效毛細(xì)管電泳方法，用于纈沙坦和苯磺酸氨氯地平片劑中2種成分的分析，具有柱效高、分離速度快、樣品用量少等優(yōu)點(diǎn).

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器和試劑

高效毛細(xì)管電泳儀（北京彩陸科學(xué)北京彩陸科學(xué)儀器有限公司），CL1020型紫外檢測(cè)器，HW－2000型色譜工作站，未涂層石英毛細(xì)管柱（75μm×75 cm，河北永年銳灃色譜器件公司）.所用化學(xué)試劑均為分析純或色譜純.氫氧化鈉、磷酸氫二鈉、甲醇和磷酸均購(gòu)自天津市科密歐化學(xué)試劑開(kāi)發(fā)中心，水為自制重蒸水.

1.2 電泳條件

電泳介質(zhì)30 mmol／L磷酸鈉緩沖液（用磷酸調(diào)p H＝7.47，使用前脫氣）；高度差進(jìn)樣10 s；分離電壓15 k V；檢測(cè)波長(zhǎng)237 nm；室溫下操作.實(shí)驗(yàn)前依次用0.1 mol／L NaOH沖洗2 min，重蒸水沖洗3 min，緩沖液沖洗3 min.2次進(jìn)樣之間，用緩沖液沖洗毛細(xì)管.

1.3 溶液配制

分別精密稱取纈沙坦和苯磺酸氨氯地平各10.0 mg，置10 mL量瓶中，用甲醇－水（V（甲醇）∶V（水）＝1∶1）溶解并稀釋至刻度；精密量取1 m L，置10 m L量瓶中，用甲醇－水（V（甲醇）∶V（水）＝1∶1）稀釋至刻度.制備一系列不同質(zhì)量濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液（0.050 4～0.504 0 mg／m L），進(jìn)樣前用0.45μm的濾膜過(guò)濾.

取纈沙坦苯磺酸氨氯地平薄膜衣片，置50 m L量瓶中，加入5 m L水，振搖45 min使崩散，超聲15 min再機(jī)械攪拌30 min，放冷，加溶劑甲醇－水稀釋至刻度，搖勻，離心，取上清液用0.45μm的濾膜過(guò)濾，作為供試品溶液.

2 結(jié)果與討論

2.1 分離條件

2.1.1 緩沖液及p H值的選擇

實(shí)驗(yàn)嘗試使用幾種不同類型的緩沖液如磷酸鈉，磷酸－硼砂，硼酸鈉.通過(guò)比較發(fā)現(xiàn)磷酸鈉的分離效果較好.隨后，考察了緩沖液的濃度和p H值的影響.對(duì)p H值在3.0～8.5內(nèi)進(jìn)行了考察，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：p H越高，遷移時(shí)間越短.但是，p H值過(guò)高或過(guò)低，纈沙坦和苯磺酸氨氯地平不能達(dá)到很好地分離.因此，最終確定的緩沖液p H＝7.47.

2.1.2 濃度的選擇

磷酸鈉緩沖液的濃度會(huì)影響到電滲流和分離度.本實(shí)驗(yàn)考察了一系列不同濃度的磷酸鈉緩沖液，結(jié)果表明：在低濃度時(shí)（7.5 mmol／L），峰部分重疊，而在高濃度時(shí)（40 mmol／L），由于離子強(qiáng)度增高而導(dǎo)致重現(xiàn)性變差，最終確定緩沖液的濃度為30 mmol／L.

2.1.3 分離電壓的選擇

工作電壓會(huì)影響到分離度及分析時(shí)間.實(shí)驗(yàn)在5～25 k V內(nèi)對(duì)分離電壓進(jìn)行了考察，結(jié)果顯示：隨著分離電壓的增大，分析時(shí)間縮短，柱效增大.然而，隨著電壓的增大，柱內(nèi)的焦耳熱也變大，分離度降低，系統(tǒng)變得不穩(wěn)定.綜合考慮分離度以及分析時(shí)間等因素，最終選擇分離電壓為15 k V.

通過(guò)上述考察，最終確定的分離條件是0.03 mol／L磷酸鹽緩沖液（用磷酸調(diào)p H＝7.47），分離電壓15 k V.在此條件下，纈沙坦和氨氯地平能夠在較短時(shí)間內(nèi)達(dá)到完全分離.圖1為電泳圖譜，其中，苯磺酸氨氯地平的遷移時(shí)間為4.12 min，纈沙坦的遷移時(shí)間為11.12 min，分離度良好（R＝29.8），并且沒(méi)有其他雜峰的干擾.結(jié)果表明，高效毛細(xì)管電泳法是一種簡(jiǎn)單，快速的測(cè)定纈沙坦和苯磺酸氨氯地平的方法.

圖1 標(biāo)準(zhǔn)溶液電泳（10 mg／L）Fig.1 HPCE electrophoregram of the standard solution（10 mg／L）

2.2 方法學(xué)驗(yàn)證考察

2.2.1 線性實(shí)驗(yàn)

在0.050 4～0.504 0 mg／mL內(nèi)，分別配制6種不同質(zhì)量濃度的纈沙坦和氨氯地平的標(biāo)準(zhǔn)溶液，每種質(zhì)量濃度進(jìn)樣6次.以質(zhì)量濃度和峰面積進(jìn)行線性回歸，苯磺酸氨氯地平的線性方程為Y＝720.2X＋2.85

（r＝0.999 6），纈沙坦的線性方程為Y＝2735.3X＋226.47（r＝0.999 8），其中，X為溶液質(zhì)量濃度（mg／m L），

Y為峰面積.結(jié)果表明：在0.050 4～0.504 0 mg／mL內(nèi)，纈沙坦和氨氯地平線性關(guān)系良好.

2.2.2 回收率實(shí)驗(yàn)

按照處方中主藥及輔料的比例，分別配制低、中、高3種不同質(zhì)量濃度的纈沙坦和苯磺酸氨氯地平溶液，按照2.2節(jié)下的方法進(jìn)行檢測(cè).苯磺酸氨氯地平的回收率為98.22%～99.46%，纈沙坦的回收率98.98%～99.79%.結(jié)果如表1和表2所示.

表1 纈沙坦回收率Tab.1 Assary results of recovery for valsartan

表2 苯磺酸氨氯地平回收率Tab.2 Assary results of recovery for amlodipine besylate

2.2.3 檢測(cè)限

依據(jù)色譜峰信噪比S／N＝3計(jì)算.纈沙坦和苯磺酸氨氯地平的檢測(cè)限分別為1.5 mg／L和9 mg／L.結(jié)果如圖2所示.

圖2 檢測(cè)限電泳Fig.2 Electrophoregram of the detection limit

2.2.4 重復(fù)性

在相同條件下，對(duì)配制好的溶液（按照處方比例）進(jìn)行重復(fù)檢測(cè)，計(jì)算遷移時(shí)間和峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差.纈沙坦遷移時(shí)間和峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.3%和1.3%（n＝6），苯磺酸氨氯地平遷移時(shí)間和峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.6%和1.4%（n＝6）.

2.3 樣品測(cè)定

按照已經(jīng)確定的方法，對(duì)3批纈沙坦氨氯地平片進(jìn)行檢測(cè)，電泳圖譜如圖3所示，3批樣品含量測(cè)定結(jié)果如表3所示.

圖3 纈沙坦氨氯地平片電泳Fig.3 Electrophoregram of the tablets

表3 3批片劑的含量測(cè)定結(jié)果Tab.3 Results of three batches of tablets

3 結(jié)論

實(shí)驗(yàn)考察了不同電泳條件對(duì)分離的影響，結(jié)果表明，與現(xiàn)有的液相色譜方法相比，該法是一種快速、簡(jiǎn)便、高效的方法，可以同時(shí)測(cè)定纈沙坦苯磺酸氨氯地平片中的有效成分.

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Simultaneous determination of valsartan and amlodipine besylate by high performance capillary electrophoresis

LI Zhi－wei，ZHAO Yun－chao，QI Jian－min
（College of Chemical and Pharmaceutical Enginering，Hebei University of Science and Technology，Shijiazhuang 050018，China）

A high performance capillary electrophoresis（HPCE）method was established for the simultaneous determination of valsartan and amlodipine.The background electrolyte system composed of 30 mmol／L phosphate buffer（p H＝7.47）was found to be the most suitable solution for this separation at the detection wavelength of 237 nm，separation voltage of 15 k V and the injection of sample for 10 s.The linear calibration ranges were 0.050 4 to 0.504 0 mg／mL（r＝0.999 8，n＝6）for valsartan，and 0.050 4 to 0.504 0 mg／mL（r＝0.999 6，n＝6）for amlodipine besylate.The relative standard deviations（RSD）（n＝6）of the migration time and peak－area counts of valsartan were 0.3%and 1.3%respectively，while amlodipine besylate 0.6%and 1.4%.The recoveries were determined to be 98.98%—99.79%for valsartan，98.22%—99.46%for amlodipine besylate.By using proposed HPCE method，valsartan and amlodipine besylate were well－separated within only 15.0 min（R＝29.8）.This method is rapid，sensitive and practical.

valsartan；amlodipine besylate； HPCE

O657.8

A

1000－1565（2012）02－0149－05

2011－11－20

河北省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（B2010000849）

李志偉（1977－），男，河北唐縣人，河北科技大學(xué)副教授，博士，主要從事藥物分析研究.E－mail：lizhiwei＠hebust.edu.cn

梁俊紅）