替米沙坦延緩糖尿病大鼠腎病的發(fā)生發(fā)展

許傳文，徐艷梅

(華中科技大學(xué)同濟醫(yī)學(xué)院附屬普愛醫(yī)院腎內(nèi)科，湖北武漢430030)

糖尿病腎病(Diabetic Nephropathy，DN)是糖尿病常見的慢性微血管并發(fā)癥，臨床資料顯示，E-選擇素(E-selectin)介導(dǎo)的炎性反應(yīng)對糖尿病腎病的發(fā)展有一定的影響，其增加尿蛋白，并推動細胞外基質(zhì)沉淀，導(dǎo)致腎小球纖維化。有研究者指出，血管緊張素受體Ⅱ(AngⅡ)拮抗劑(ARB)能夠通過對黏附分子合成進行抑制，進而減緩腎小球出現(xiàn)炎性反應(yīng)。本研究觀察替米沙坦對糖尿病大鼠腎小球E-selectin表達的影響，目的是從黏附分子層面來研究替米沙坦對糖尿病腎病所產(chǎn)生的保護機制。

1 材料與方法

1.1 試劑與動物:Trizol試劑盒(Gibco公司);SP試劑盒(北京中山公司);山羊抗大鼠E-selectin抗體(Santa Cruz公司);替米沙坦(德國勃林格殷格翰制藥有限公司);雄性SD大鼠30只，體質(zhì)量(180±20)g(華中科技大學(xué)同濟醫(yī)學(xué)院實驗動物中心，合格證號:00200700186)。

1.2 方法

1.2.1 動物模型的建立與分組:在切除左腎一周后，復(fù)制糖尿病模型分為糖尿病組(DM組);替米沙坦治療組(R組);另設(shè)對照組(C組)，每組各10只。R組每日替米沙坦(5 mg/kg)灌胃給藥;DM組與C組使用體積相同的0.9%氯化鈉注射液對該組進行灌胃。全部大鼠在灌胃時都喂飲食，不使用胰島素。12周后取標(biāo)本。

1.2.2 生化檢測，組織病理學(xué)檢測，免疫組化:采用常規(guī)方法，按試劑盒說明書操作。

2 結(jié)果

2.1 生化、腎重和病理改變:DM組中大鼠的蛋白尿定量、血糖以及血清肌酐明顯升高(p＜0.01)。R組血清肌酐、蛋白尿定量則明顯低于DM組(p＜0.01，表1)。大鼠腎組織在光鏡下其DM組和R組腎小球出現(xiàn)部分體積增大，系膜區(qū)增生程度不一致，間質(zhì)可以發(fā)現(xiàn)中性粒子和單核淋巴細胞浸潤(圖1)。

2.2 E-selectin免疫組化:R組和DM組的E-selectin表達明顯增加(p＜0.01)，但是R組中的E-selectin表達明顯低于DM 組(P ＜0.01)(表2，圖2)。

3 討論

表1 各組大鼠血、尿生化結(jié)果Table 1 The blood and urine biochemical test，n=10)

表1 各組大鼠血、尿生化結(jié)果Table 1 The blood and urine biochemical test，n=10)

*p＜0.05 compared with C;#p＜0.05 compared with DM．

group glucose(mmol/l) proteinuria(mg/d) creatinine(umol/L)ECG/GA C 5.46±0.79 10.50±2.48 58.69±12.63 0.21±0.03 DM 22.38±2.37* 59.03±11.37* 152.12±18.63* 0.63±0.04*R 20.50±1.73* 38.21±3.70*# 89.09±12.39*# 0.41±0.03*#

本研究建模12周之后，其腎重/體質(zhì)量之比、尿蛋白排泄率、血清肌酐等明顯增加，光鏡下可發(fā)現(xiàn)腎臟細胞外基質(zhì)出現(xiàn)明顯積聚，其基底膜明顯增厚，充分說明模型建造成功，和文獻資料［1］闡釋一致，說明該大鼠處在糖尿病腎病初期。

糖尿病腎病時，腎小球與腎間質(zhì)中的白細胞浸潤是導(dǎo)致糖尿病腎病組織表現(xiàn)特征之一，并且對腎小球硬化上起到了一定的作用。有研究顯示糖尿病腎病患者當(dāng)中，E-selectin的分布是沿著系膜區(qū)與腎小球毛細血管，腎組織的E-selectin表達具有顯著意義?？梢哉J(rèn)為間質(zhì)炎性細胞浸潤、E-selectin介導(dǎo)的腎小球是導(dǎo)致細胞外基質(zhì)增生、間質(zhì)纖維化、腎小球硬化等的機制。有報道糖尿病腎病kk-ay小鼠腎小球E-selectin表達高于對照組，這充分說明E-selectin能參加糖尿病腎病發(fā)展。

表2 各組大鼠E-selectin免疫組化Table 2 E-selectin in rats by immunohistoche，n=6)

表2 各組大鼠E-selectin免疫組化Table 2 E-selectin in rats by immunohistoche，n=6)

*p＜0.01 compared with C;#p＜0.01 compared with DM．

group immunohistochemistry 0.18±0.06 M 2.13±0.18*R 1.18±0.26*#C

本研究結(jié)果表明，E-selectin在正常對照組內(nèi)表達很少，但是糖尿病模型對照組、實驗藥物組內(nèi)的表達則顯著增加，這充分說明其在高糖狀態(tài)下已經(jīng)激活。E-selectin歸屬于黏附分子之中選擇素家族，分布在系膜細胞與內(nèi)皮細胞內(nèi)，介導(dǎo)內(nèi)皮細胞的識別和單核/巨噬細胞、淋巴細胞的黏附，進而將炎性細胞逐漸游走到腎小球內(nèi)，容易產(chǎn)生細胞因子參加糖尿病微血管病變的發(fā)展［2］。本實驗使用免疫組化證實DM組大鼠中的E-selectin蛋白表達顯著增加，證明E-selectin在糖尿病腎病中起作用。

有報道腎素、血管緊張素參與了糖尿病腎病的發(fā)生發(fā)展，其間AngⅡ起了重要作用。糖尿病時高血糖導(dǎo)致腎素、血管緊張素活性提升，特別是腎組織中的AngⅡ含量明顯增加，導(dǎo)致血管通透性大大增加，炎性細胞浸潤［3］。替米沙坦作為高選擇性、高活性的血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)受體拮抗劑，AngⅡ經(jīng)過和血管、心臟、腎臟及腎上腺的AT1受體充分結(jié)合發(fā)揮其應(yīng)有作用。本研究發(fā)現(xiàn)，替米沙坦治療之后能夠顯著下調(diào)高表達的E-selectin，與此同時，腎小球的病理改變大大減輕，血清肌酐與尿蛋白顯著下降，進而提示替米沙坦可以間接或者是直接經(jīng)過降低E-selectin的表達來達到改善糖尿病大鼠腎臟體內(nèi)病變。但是替米沙坦是通過怎樣的環(huán)節(jié)來對E-selectin表達產(chǎn)生影響，還需要進一步研究明確。

［1］Sviglerova J，Kuncova J，Tonar Z．Streptozotocin-indudced model of type 1 diabetes mellitus［J］．Cesk Fysiol，2006，55:96－102．

［2］Blaha V，Andrys C，Smahelova A，et al．Effect of atorvastatin on soluble CD14，CD40 Ligand，sE-and sP-selectins and MCP-1 in patients with type 2 diabetes mellitus:relationship to cholesterol turnover［J］．Pharmacol Res，2006，54:421－428．

［3］曾龍驛，林可意，張圍超，等．伊貝沙坦對糖尿病大鼠腎氧化應(yīng)激、NF-κB活性和ICAM-1 mRNA表達的影響［J］．中山大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)科學(xué)版)，2008，29:402－406．