辛伐他汀對(duì)厄貝沙坦藥代動(dòng)力學(xué)影響的研究

周霞瑾，齊惠珍，牛哲哲，王明霞，常 青

(1.河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院藥劑科，河北石家莊 050011;2.河北醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，河北 石家莊 050017)

辛伐他汀是HMG-CoA(羥甲基戊二酸單酰輔酶A)還原酶抑制劑，在體內(nèi)被水解成β-羥基酸代謝物，可降低血總膽固醇和低密度脂蛋白水平。也可中度降低血三酰甘油和升高高密度脂蛋白水平，是臨床常用的調(diào)脂藥［1］。高血脂能導(dǎo)致血管結(jié)構(gòu)和功能異常，使血管舒張功能損傷［2］，加重高血壓病的危害，降血脂已成為高血壓的防治原則之一。因此臨床上他汀類降脂藥常與厄貝沙坦等抗高血壓藥聯(lián)用。有關(guān)二者的相互作用目前多限于藥效學(xué)方面，而辛伐他汀對(duì)厄貝沙坦藥代動(dòng)力學(xué)的影響，目前尚未見報(bào)道，值得我們深入探討。文獻(xiàn)報(bào)道，辛伐他汀在肝臟主要經(jīng)CYP3A4代謝［3］，厄貝沙坦則主要經(jīng)CYP2C9代謝，幾乎不經(jīng)CYP3A4代謝［4］。二者雖經(jīng)不同酶代謝，但藥物代謝酶的作用機(jī)制非常復(fù)雜。本課題研究了新西蘭大白兔灌胃服用辛伐他汀不同時(shí)間后對(duì)厄貝沙坦的藥代動(dòng)力學(xué)的影響，旨在為臨床藥物相互作用提供理論參考。

1 儀器與試劑

1.1 儀器 Waters高效液相色譜儀，515泵，474熒光檢測(cè)器，Empower色譜數(shù)據(jù)工作站;ZH-2渦旋混合器(天津藥典標(biāo)準(zhǔn)儀器廠);800型離心機(jī)(上海分析儀器廠);梅特勒AE240電子分析天平(瑞士);SANYO低溫冰箱。

1.2 藥品和試劑 替米沙坦標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品(美國(guó)Sigma-Aidrich公司，Lot No T-8949);厄貝沙坦標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào):100607-200301)，乙腈為色譜純，乙醚、二氯甲烷、磷酸為分析純，試驗(yàn)用水為多效蒸餾水。羧甲基纖維素CMCS(天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所批號(hào):20050815，化學(xué)純)，辛伐他汀片(杭州默沙東制藥有限公司，批號(hào):100292，規(guī)格:20 mg/片)，厄貝沙坦片［賽諾菲安萬(wàn)特(杭州)制藥有限公司，批號(hào):0A020，規(guī)格:0.15 g/片］。

1.3 動(dòng)物 新西蘭大白兔24只，均為♂，體質(zhì)量2.5～3 kg，購(gòu)于河北醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物中心，動(dòng)物合格證號(hào)為709198。

2 方法

2.1 動(dòng)物處置 每只籠子裝1只新西蘭大白兔，稱重，編號(hào)，進(jìn)入動(dòng)物室，經(jīng)1周適應(yīng)性飼養(yǎng)后，隨機(jī)分為4組，分別為:3 d對(duì)照組、5 d對(duì)照組、辛伐他汀(5 mg·kg-1)誘導(dǎo)3 d組和辛伐他汀(5 mg·kg-1)誘導(dǎo)5 d組，每組6只。

3 d對(duì)照組:1～3 d每天1次灌胃給予2%羧甲基纖維素溶液，于d 4早8:00灌胃給予厄貝沙坦(50 mg·kg-1)的2%羧甲基纖維素溶液。

5 d對(duì)照組:1～5 d每天1次灌胃給予2%羧甲基纖維素溶液，于d 6早8:00灌胃給予厄貝沙坦(50 mg·kg-1)的2%羧甲基纖維素溶液。

辛伐他汀誘導(dǎo)3 d組:1～3 d灌胃給予辛伐他汀(5 mg·kg-1，qd)的2%羧甲基纖維素溶液，于d 4早8:00灌胃給厄貝沙坦(50 mg·kg-1)的2%羧甲基纖維素溶液。

辛伐他汀誘導(dǎo)5 d組:1～5 d灌胃給予辛伐他汀(5 mg·kg-1，qd)的2%羧甲基纖維素溶液，于d 6早8:00灌胃給厄貝沙坦(50 mg·kg-1)的2%羧甲基纖維素溶液。

所有動(dòng)物于灌胃給予厄貝沙坦的前1 d晚8:00開始禁食不禁水，所有藥物的給藥劑量按人/兔體質(zhì)量的等效劑量換算。

2.2 取血方法 預(yù)先為動(dòng)物置留置針，分別于給藥前和給藥后 0.25、0.5、1、1.5、2、3、5、7、9、12、24、36 h從新西蘭大白兔的耳中動(dòng)脈取血2 ml，置肝素管中，3 000 r·min-1離心 10 min，取上清液，放入-80℃低溫冰箱保存，用于測(cè)定厄貝沙坦的濃度。

2.3 血漿樣品的處理 取血漿400 μl，置于10 ml具塞玻璃離心管中，精密加入內(nèi)標(biāo)工作液40 μl(5 mg·L-1)，渦旋混勻 15 s，加入 100 μl磷酸溶液(1 mol·L-1)，渦旋30 s，使其酸化，加入乙醚-二氯甲烷(7 ∶3)［5］混合液5 ml提取，渦旋振蕩5 min，離心(1 500 r·min-1)5 min，取有機(jī)層4.5 ml于潔凈干燥具塞玻璃離心管中，加入200 μl NaOH溶液(0.05 mol·L-1)，渦旋震蕩 3 min，離心(1 500 r·min-1)5 min，于-80℃低溫冰箱中冷凍15 min，棄去上層未凍有機(jī)相，待下層融化后，用微量取樣器取150 μl于1 ml的 Ephendroff管中，加入 100 μl磷酸溶液(0.2 mol·L-1)酸化，渦旋混勻 30 s，進(jìn)樣 50 μl分析。

2.4 色譜條件 色譜柱:Diamonsil C18柱(4.6 mm×200 mm，5 μm)，流動(dòng)相:水 - 乙腈(57 ∶43)，三乙胺0.1%，磷酸調(diào) pH為 3.00，流速:1.0 ml·min-1，柱溫:室溫;熒光檢測(cè)波長(zhǎng):激發(fā)波長(zhǎng)為254 nm，發(fā)射波長(zhǎng)為 371 nm［6］;內(nèi)標(biāo)物:替米沙坦;進(jìn)樣量:50 μl;該色譜條件下替米沙坦和厄貝沙坦的保留時(shí)間分別為4.2 min和6.0 min，分離效果良好，空白血漿的內(nèi)源性物質(zhì)對(duì)藥物和內(nèi)標(biāo)物無(wú)干擾。

2.5 藥代動(dòng)力學(xué)分析

2.5.1 分析軟件和方法 每只新西蘭大白兔的血漿厄貝沙坦?jié)舛戎稻肈AS version 3.0(Bontz Inc.，Beijing，China)藥代動(dòng)力學(xué)軟件進(jìn)行智能化數(shù)據(jù)處理，模擬血藥濃度-時(shí)間曲線，并計(jì)算非房室模型統(tǒng)計(jì)矩參數(shù)。Cmax和Tmax為實(shí)測(cè)值。

2.5.2 數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計(jì)分析 統(tǒng)計(jì)分析采用SPSS13.0軟件，計(jì)量資料采用±s，多組比較采用ANOVA，P＜0.05時(shí)，再用 Dunnett檢驗(yàn);Tmax采用秩和檢驗(yàn)。

3 結(jié)果

3.1 各組的平均血藥濃度－時(shí)間曲線 見Fig 1和Fig 2。

Fig 1 Mean plasma concentration-time curve of irbesartan in the control and simvastatin(5 mg·kg－1for 3 days)group(±s，n=6)

Fig 2 Mean plasma concentration-time curve of irbesartan in the control and simvastatin(5 mg·kg－1for 5 days)group(±s，n=6)

Tab 1 Mean noncompartment model's pharmacokinetic parameters of irbesartan after oral administration in the four groups(ig，50 mg·kg-1)(±s，n=6)

Tab 1 Mean noncompartment model's pharmacokinetic parameters of irbesartan after oral administration in the four groups(ig，50 mg·kg-1)(±s，n=6)

*P＜0.05 vs control;#P＜0.05 vs simvastatin for 3 d group

Parameter Control(3 d)Simvastatin(5 mg·kg-1for 3 d)Control(5 d)Simvastatin(5 mg·kg-1for 5 d)V/L·kg-1 68.07±24.46 31.41±18.84 68.10±49.56 29.21±20.25 T 12/h 4.37±1.09 6.36±5.70 4.52±2.05 10.53±5.40 Lambda-z/h-1 0.19±0.11 0.20±0.17 0.19±0.11 0.08±0.04 C-last/mg·L-1 0.03±0.03 1.55±3.51 0.03±0.04 0.75±1.14 MRT(0-36)/h 5.09±1.42 5.18±3.58 5.14±1.35 8.83±2.85*#MRT(0-∞)/h 6.04±1.34 7.80±5.65 6.13±1.62 18.94±9.66*#AUC(0-36)/mg·h·L-1 10.03±4.81 11.51±4.81 9.88±9.07 22.65±8.59*#AUC(0-∞)/mg·h·L-1 11.94±5.67 15.43±7.44 10.23±8.99 31.63±14.09*#CL/L·kg-1h-1 10.53±5.29 4.00±1.98 11.48±8.37 1.77±0.53*#Tmax/h 1.33±0.21 1.61±1.14 1.34±0.22 0.83±0.26 Cmax/mg·L-1 2.35±2.18 3.14±0.92 2.38±2.56 6.35±3.50*#

3.2 藥代參數(shù) 各組的血藥濃度-時(shí)間數(shù)據(jù)經(jīng)DAS 3.0軟件處理后的非房室模型統(tǒng)計(jì)矩參數(shù)見Tab 1。

經(jīng)單因素方差分析，辛伐他汀誘導(dǎo)3 d組與對(duì)照組比較，厄貝沙坦的主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;辛伐他汀誘導(dǎo)5 d組的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)，與對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)，AUC(0-36)、AUC(0-∞)、MRT(0-36)、MRT(0-∞)和Cmax均升高 (P＜0.05)，而CL降低(P＜0.05);辛伐他汀誘導(dǎo)5 d組與3 d組相比，厄貝沙坦的主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)差異有 顯 著 性 (P＜ 0.05)，AUC(0-36)、AUC(0-∞)、MRT(0-36)、MRT(0-∞)和Cmax均升高(P＜0.05)，而 CL降低(P＜0.05)，各組Tmax變化不大，經(jīng)秩和檢驗(yàn)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

4 討論

文獻(xiàn)報(bào)道，家兔取血多采用耳緣靜脈取血和心臟取血。我們實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，由于藥代動(dòng)力學(xué)研究中口服給藥吸收相的取血點(diǎn)相對(duì)密集，耳緣靜脈血難以滿足要求的取血量。而心臟取血因不能連續(xù)取血，不適用于藥動(dòng)學(xué)研究。本實(shí)驗(yàn)中，我們采用在兔耳中動(dòng)脈埋留置針取血，方法方便、快捷，血量充足，能滿足大多數(shù)藥代動(dòng)力學(xué)的研究。

在本實(shí)驗(yàn)中，經(jīng)辛伐他汀(5 mg·kg-1)誘導(dǎo)5 d 后，厄貝沙坦的 AUC(0-36)、AUC(0-∞)和Cmax均升高，清除率CL則由11.487±8.367降為1.773±0.531，減少了約5倍，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，表明辛伐他汀對(duì)厄貝沙坦的清除率亦具有明顯影響。而且厄貝沙坦的體內(nèi)滯留時(shí)間MRT亦延長(zhǎng)(P＜0.05)，與AUC升高、CL減少一致。辛伐他汀是CYP3A4的特異性底物［3］，而厄貝沙坦主要經(jīng)CYP2C9氧化，幾乎不被 CYP3A4代謝［4］。因此我們認(rèn)為辛伐他汀對(duì)厄貝沙坦藥代動(dòng)力學(xué)的明顯影響應(yīng)與CYP2C9無(wú)關(guān)，而可能涉及CYP3A酶和P-糖蛋白。

眾所周知 P-糖蛋白(P-glycoprotein，P-gp)是人體藥物處置中最重要的藥物轉(zhuǎn)運(yùn)體，它可利用ATP水解釋放的能量將作用底物從細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)至細(xì)胞外。在人體正常組織肝臟、腎臟、腸道、胎盤、血腦屏障、血睪屏障以及淋巴細(xì)胞系和心臟內(nèi)小動(dòng)脈、毛細(xì)血管等部位都有分布。P-gp在人體正常組織內(nèi)的分布以及對(duì)藥物的逆向轉(zhuǎn)運(yùn)功能使得P-gp在藥物的吸收、分布、代謝和清除方面具有重要意義［7］。

P-gp的作用底物范圍非常廣泛，底物的親脂性可能是決定它與P-gp結(jié)合的最重要參數(shù)。厄貝沙坦的脂溶性決定其可能為P-gp底物。Bourrié等［8］在研究中首先發(fā)現(xiàn)厄貝沙坦是P-gp的底物。Weiss等［9］在研究血管緊張素受體Ⅰ拮抗劑與ATP結(jié)合轉(zhuǎn)運(yùn)體的相互作用時(shí)，也發(fā)現(xiàn)厄貝沙坦對(duì)P-gp有弱抑制作用。

已知P-gp和CYP3A4的底物有重疊，辛伐他汀是CYP3A4的底物。Bogman等［10］證實(shí)他汀類如辛伐他汀、阿托伐他汀和洛伐他汀在高濃度時(shí)抑制P-gp。Wang等［11］也證實(shí)辛伐他汀、洛伐他汀和阿托伐他汀直接抑制P-gp。Sieczkowski等［12］發(fā)現(xiàn)辛伐他汀可能通過(guò)損壞P-gp的糖基化而抑制P-gp的功能，并且損壞程度隨使用時(shí)間延長(zhǎng)而增加，與本實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致。即與辛伐他汀誘導(dǎo)3 d組比，辛伐他汀誘導(dǎo)5 d組影響厄貝沙坦的藥代動(dòng)力學(xué)。

綜上所述，辛伐他汀對(duì)厄貝沙坦藥代動(dòng)力學(xué)的影響可能與辛伐他汀和厄貝沙坦同為藥物轉(zhuǎn)運(yùn)體P-gp的抑制劑有關(guān)，二者競(jìng)爭(zhēng)性抑制P-gp，從而引起厄貝沙坦藥動(dòng)學(xué)參數(shù)的改變。有關(guān)辛伐他汀對(duì)厄貝沙坦的藥代動(dòng)力學(xué)影響的P-gp作用機(jī)制有待今后做進(jìn)一步研究。

總之，本研究結(jié)果顯示，辛伐他汀誘導(dǎo)5 d后對(duì)兔體內(nèi)厄貝沙坦的主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)有明顯影響，其影響機(jī)制可能與P-gp有關(guān)。

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