氯沙坦及其代謝物在朝鮮族和漢族健康人體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)

楊長青，楊 璐，郭 濤，夏東亞（. 中國藥科大學(xué)藥學(xué)院，江蘇 南京 0009；. 沈陽藥科大學(xué)藥學(xué)院，遼寧 沈陽 006；. 沈陽軍區(qū)總醫(yī)院藥劑科，遼寧 沈陽 0840）

氯沙坦（losartan）是非肽類血管緊張素Ⅱ受體AT1拮抗藥，具有與AT1受體親和力強(qiáng)、高選擇性阻滯受體AT1、只影響血管緊張素Ⅱ受體、無激動(dòng)活性的特點(diǎn)，是常用的降壓藥，在體內(nèi)被CYP2C9代謝成具有長效降壓活性的E-3174[1]。本文首次進(jìn)行了氯沙坦在中國朝鮮族和漢族健康人體以及不同性別間的藥代動(dòng)力學(xué)比較，為臨床合理用藥提供參考。

1 材料與方法

1.1 儀器

高效液相色譜儀，包括600型四元泵，717自動(dòng)進(jìn)樣器，2475熒光檢測(cè)器，Empower色譜工作站（美國waters公司）；YKH-2液體快速混合器（江西醫(yī)療器械廠）；KQ3200DE型超聲波清洗器（昆明市超聲儀器有限公司）；TDL-5型低速離心機(jī)（上海醫(yī)療器械三廠）；AEL-160電子分析天平（日本島津公司）；PB-10型pH計(jì)。

1.2 藥品和試劑

氯沙坦鉀片（杭州默沙東制藥有限公司，規(guī)格：0.05 g/片，批號(hào)09020）；氯沙坦對(duì)照品（中國藥品生物制品檢定所，純度＞ 98.0%，批號(hào)100597-200501）；E-3174對(duì)照品（加拿大TRC公司，純度＞ 99.0%，批號(hào)1-IHB-144-2）；纈沙坦對(duì)照品（北京賽科藥業(yè)，純度＞ 99.0%，批號(hào)0806028）；乙腈，甲醇（色譜純，美國Fisher公司）；其余試劑均為分析純。

1.3 受試者選擇

選擇朝鮮族健康受試者10名，男女各5名，年齡（23±1）歲，體重（64.4±11.3） kg，身高（169.6±7.8）cm，體重指數(shù)（22.3±2.6）；漢族健康受試者10名，男女各5名，年齡（23±1）歲，體重（57.4±6.5） kg，身高（167.3±7.2） cm，體重指數(shù)（22.5±1.2）。受試者父母、祖父母、外祖父母三代均為同族婚配。體格檢查示肝、腎功能正常，ECG檢查、血、尿常規(guī)無異常，無既往慢性病史，無凝血障礙，無代謝異常史、藥物過敏史、精神病史及藥物依賴史，不嗜煙酒。整個(gè)試驗(yàn)期間不得服用其他藥物。所有項(xiàng)目正常者方可入選，并簽署知情同意書。試驗(yàn)方案經(jīng)沈陽軍區(qū)總醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.4 給藥方法及樣品采集

健康受試者于試驗(yàn)前1日19:00開始禁食，試驗(yàn)當(dāng)日7:00空腹口服單劑量氯沙坦鉀片50 mg，用200 mL溫開水送服，服藥2 h后方可飲水，4 h后進(jìn)食統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)飲食。服藥后受試者避免劇烈運(yùn)動(dòng)。于服藥前（0 h）和服藥后0.33、0.66、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、6.0、8.0、12、24 h由前臂靜脈取血4 mL置肝素抗凝的離心管中，取靜置離心后的血漿樣品，冷凍保存?zhèn)溆谩?/p>

1.5 血藥濃度測(cè)定

1.5.1 色譜條件 色譜柱：Diamonsil C18柱（150 mm×4.6 mm, 5 μm）；流動(dòng)相：0.02 mol·L-1磷酸二氫鈉緩沖液（用磷酸調(diào)pH=2.35）-乙腈（57∶43）；流速：0.5 mL·min-1；柱溫：室溫；熒光檢測(cè)激發(fā)波長：250 nm，發(fā)射波長：370 nm；進(jìn)樣量：20 μL。

1.5.2 血漿樣品處理 取血漿0.5 mL，分別加入甲醇100 mL，內(nèi)標(biāo)溶液（40 ng·mL-1纈沙坦溶液）50 mL，6%甲酸溶液100 mL，渦旋混勻30 s；加乙醚5 mL，渦旋混勻5 min，4000 r·min-1離心10 min，分取上層有機(jī)相于另一試管中，于40 ℃氮?dú)饬飨麓蹈?，殘留物加入流?dòng)相100 mL溶解，取20 mL進(jìn)行HPLC分析[2]。

1.6 數(shù)據(jù)處理

采用DAS2.0軟件進(jìn)行血藥濃度數(shù)據(jù)處理，AUC0-24用梯形法計(jì)算。Cmax，tmax用實(shí)測(cè)值。采用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，比較不同性別受試者的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)，其中tmax、t1/2采用非參數(shù)秩和檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 色譜行為

在所建立的色譜條件下，氯沙坦、E-3174、內(nèi)標(biāo)與血漿組分分離良好，保留時(shí)間分別為12.1、20.3、28.2 min。典型色譜圖見圖1。

圖1 典型的高效液相色譜圖A – 空白血漿；B – 空白血漿＋對(duì)照品；C – 漢族受試者服用50 mg氯沙坦后血漿；D – 朝鮮族受試者服用50 mg氯沙坦后血漿；1 – 氯沙坦；2 – E-3174；3 – 纈沙坦（內(nèi)標(biāo)）Fig 1 HPLC chromatogramsA – blank plasma; B – blank plasma spiked with losartan, E-3174 and internal standard (IS, valsartan); C – plasma obtained from a Han volunteer after an oral dose of 50 mg losartan; D – plasma obtained from a Korean volunteer after an oral dose of 50 mg losartan; 1 –losartan; 2 – E-3174; 3 – valsartan(IS)

2.2 方法學(xué)評(píng)價(jià)

氯沙坦和E-3174標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍分別為10～ 1000 ng·mL-1和5 ～ 1000 ng·mL-1，r = 0.998 6 和r =0.998 1，定量下限分別為10 ng·mL-1和5 ng·mL-1；氯沙坦和E-3174的方法回收率分別為（101.9±8.0）%和（106.4±5.2）%，提取回收率分別為（69.8±0.9）%和（68.7±1.8）%，日內(nèi)、日間精密度＜ 8.3%；血漿樣品在室溫放置12 h、凍融3次以及– 20 ℃保存30 d的條件下穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果偏移在±5.0%內(nèi)，均滿足生物樣品分析方法的要求。測(cè)定血漿樣品時(shí)，于每個(gè)分析批內(nèi)隨行測(cè)定低、中、高3種濃度的QC樣品，結(jié)果RSD值均小于15%，符合生物樣品測(cè)定的要求。

2.3 安全性評(píng)價(jià)

20名健康受試者均未發(fā)生明顯不良反應(yīng)，說明志愿者在試驗(yàn)期間單劑量口服氯沙坦鉀片耐受良好。

2.4 血藥濃度與藥動(dòng)學(xué)參數(shù)

10名朝鮮族和10名漢族受試者口服單劑量氯沙坦鉀片50 mg后，氯沙坦的平均血藥濃度-時(shí)間曲線見圖2，E-3174的平均血藥濃度-時(shí)間曲線見圖3。藥動(dòng)學(xué)參數(shù)見表1。

圖2 口服氯沙坦鉀片50 mg后氯沙坦的平均藥-時(shí)曲線圖Fig 2 Mean plasma concentration-time curves of losartan after oral administration of 50 mg losartan potassium tablet

圖3 口服氯沙坦鉀片50 mg后E-3174的平均藥-時(shí)曲線圖Fig 3 Mean plasma concentration-time curves of E-3174 after oral administration of 50 mg losartan potassium tablet

表1 20名健康受試者口服50 mg氯沙坦鉀片后主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù). n = 10, ±sTab 1 Pharmacokinetic parameters of 20 healthy volunteers after a single oral dose of 50 mg losartan. n = 10, ±s

表1 20名健康受試者口服50 mg氯沙坦鉀片后主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù). n = 10, ±sTab 1 Pharmacokinetic parameters of 20 healthy volunteers after a single oral dose of 50 mg losartan. n = 10, ±s

注：與朝鮮族比較，*P ＜ 0.05Note: compared with Korean volunteers, *P ＜ 0.05

參數(shù) 氯沙坦 E-3174朝鮮族 漢族 朝鮮族 漢族AUC0-∞/ng·h·mL-1 752.0±331.0 523.0±184.0*2 608.0±766.0 1 960.0±182.0 t1/2/h 1.5±0.4 0.8±0.4* 3.1±0.7 4.7±1.1*tmax/h 0.9±0.4 1.3±1.1 2.4±0.8 3.6±1.7 CL/L·h-1 79.0±38.2 106.5±36.3 20.6±5.5 25.7±2.5 Vd/L 165.0±91.7 115.0±43.4 87.6±14.8 170.0±30.5*Cmax/ng·mL-1524.0±349.0 351.0±168.0 493.0±188.0 242.0±60.0*

經(jīng)SPSS軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，結(jié)果顯示朝鮮族和漢族健康受試者口服單劑量氯沙坦鉀片后，氯沙坦的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)t1/2、AUC0-∞和E-3174的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)Cmax、t1/2、Vd差異有顯著性（P ＜ 0.05）。

2.5 不同性別受試者藥動(dòng)學(xué)參數(shù)的比較

20名朝鮮族和漢族不同性別健康受試者口服單劑量氯沙坦鉀片50 mg的主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)見表2。經(jīng)SPSS軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，結(jié)果顯示不同性別健康受試者口服單劑量氯沙坦鉀片后，氯沙坦和E-3174的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 討論

細(xì)胞色素P450是重要的參與藥物Ⅰ相反應(yīng)氧化、還原、水解的藥物代謝酶，具有臨床意義的藥物反應(yīng)變異和細(xì)胞色素P450酶的活性存在遺傳多態(tài)性有關(guān)[3-5]。不同種族的人有著不同的生存環(huán)境、飲食習(xí)慣、營養(yǎng)狀況等，造成基因遺傳上的千差萬別，因而種族間存在藥物代謝差異的可能性非常大[6-7]。

口服單劑量氯沙坦鉀片后，朝鮮族與漢族健康受試者氯沙坦的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)t1/2、AUC0-∞和E-3174的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)Cmax、t1/2、Vd差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜ 0.05）。

表2 男性和女性健康受試者單劑量口服50 mg氯沙坦后的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)比較. n = 5, ±sTab 2 The comparison of pharmacokinetic parameters between male and female volunteers after a single oral dose of 50 mg losartan. n = 5, ±s

表2 男性和女性健康受試者單劑量口服50 mg氯沙坦后的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)比較. n = 5, ±sTab 2 The comparison of pharmacokinetic parameters between male and female volunteers after a single oral dose of 50 mg losartan. n = 5, ±s

E-3174朝鮮族 漢族 朝鮮族 漢族男性 女性 男性 女性 男性 女性 男性 女性t1/2/h 1.6±0.5 1.3±0.3 0.9±0.7 0.8±0.2 2.9±0.4 3.3±0.9 4.8±1.2 3.8±0.8 tmax/h 1.1±0.4 0.7±0.3 1.7±1.5 0.9±0.2 2.9±0.5 1.9±0.7 3.8±1.6 2.2±0.4 Cmax/ng·mL-1 307.0±150.0 794.0±344.0 338.0±216.0 382.0±156.0 363.0±36.0 622.0±191.0 206.0±29.0 366.0±85.0 CL/L·h-1 97.7±41.4 57.7±20.6 122.0±47.5 100.0±26.2 23.0±5.3 18.1±5.1 25.7±2.9 25.9±4.1 Vd/L 213.0±97.6 105.0±33.6 123.0±48.8 112.0±47.9 93.2±10.9 81.9±17.1 174.0±23.7 143.0±36.8 AUC0-∞/ng·h·mL-1 314.0±237.0 955.0±342.0 482.0±262.0 522.0±125.0 2 257.0±474.0 2 958.0±886.0 1 966.0±213.0 1 973.0±337.0氯沙坦參數(shù)

在藥物吸收方面，原型藥的Cmax與吸收的關(guān)系密切，朝鮮族人體內(nèi)氯沙坦的Cmax是漢族人的1.5倍，表明朝鮮族和漢族人對(duì)藥物的吸收存在差異。另外，在藥物的代謝方面，氯沙坦在朝鮮族人中t1/2為1.4 h，漢族人為0.8 h，前者是后者的1.75倍，表明漢族人對(duì)藥物的代謝更快。CYP2C9的藥物代謝多態(tài)性存在很明顯的種族差異，可能是藥物產(chǎn)生藥動(dòng)學(xué)差異的原因[8]。

不同性別間藥動(dòng)學(xué)參數(shù)的差異雖然不存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但從藥動(dòng)學(xué)參數(shù)的數(shù)值比較上來看，氯沙坦和E-3174的Cmax在女性體內(nèi)均比在男性體內(nèi)高，且男性的V/F均比女性大，這可能與男性體重、體液、肌肉量多于女性，從而影響了藥物及其代謝物在受試者體內(nèi)的分布及吸收有關(guān)。另外，男性氯沙坦的t1/2較女性的長，可能是因?yàn)槁壬程钩私?jīng)CYP2C9代謝，還經(jīng)CYP3A4代謝[9-10]，CYP3A4具有種族差異和性別差異，女性體內(nèi)CYP3A4活性高于男性，這可能導(dǎo)致氯沙坦在女性體內(nèi)比在男性體內(nèi)代謝得快[11]。