HPLC同時(shí)測(cè)定虎杖及其提取物中4種有效成分的含量研究分析

葉冰 蘇慕霞 梁淑妍 譚苑芬 鄧青

(廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院藥劑科 廣州 510405)

虎杖為蓼科植物虎杖的干燥根莖和根。為傳統(tǒng)中藥,虎杖富含蒽醌類(lèi)、黃酮類(lèi)等藥用成分,其中以大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚等為主的羥基蒽醌類(lèi)化合物具有抗菌、消炎、抗病毒、抗腫瘤的功效,臨床應(yīng)用廣泛?，F(xiàn)代的分析技術(shù)中用于分析蒽醌類(lèi)成分定量分析的方法有很多,本文采用高效液相色譜法同時(shí)對(duì)虎杖及其提取物中大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚4種有效成分進(jìn)行含量測(cè)定方法的研究與分析。本法重現(xiàn)性好、效率高、結(jié)果準(zhǔn)確。為科學(xué)客觀(guān)評(píng)價(jià)中藥材虎杖的質(zhì)量提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

儀器:十萬(wàn)分之一電子天平(CPA22 5D德國(guó) 賽多利斯);高效液相色譜儀(Agilent 1260美國(guó) 安捷倫)。試劑:乙腈、甲醇(色譜純 迪馬公司)、磷酸(色譜純 天津科密歐)、乙醇、硫酸(分析純 國(guó)藥集團(tuán));對(duì)照品:大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚,均來(lái)源于中國(guó)藥品生物制品檢定所;樣品:市售中藥材虎杖三批(編號(hào):111101、111102、111103)及其自制乙醇提取物三批(編號(hào):T111101、T111102、T111103)。

2 色譜條件

色譜柱:Hyperbond C18(4.6mm×250mm,5μm);流動(dòng)相:A相為乙腈,B相為0.1%磷酸,按下表進(jìn)行梯度洗脫(表1);流速:1.0mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng):254nm;柱溫:30℃。

表1 A相B相不同時(shí)間段梯度洗脫結(jié)果

3 試驗(yàn)方法和結(jié)果

3.1 虎杖乙醇提取物的提取方法

通過(guò)查閱相關(guān)資料,對(duì)虎杖中的有效成分進(jìn)行提取分離。具體方法如下:取市售的虎杖中藥材細(xì)粉0.5kg置5L的圓底燒瓶中。加入8倍量的80%的乙醇溶液,加熱回流2h,過(guò)濾,收集濾液。至5L的燒杯中,加入20%的硫酸溶液200mL,靜置24h,抽濾,取濾餅置鼓風(fēng)干燥箱中,70℃干燥后,粉碎得虎杖乙醇提取物。

3.2 對(duì)照品溶液貯備液的制備

分別稱(chēng)取大黃酸約10mg,大黃素約20mg,大黃酚約10mg,大黃素甲醚約10mg,精密稱(chēng)定,置同一100mL量瓶中,加甲醇溶解并稀釋至刻度,搖勻,得1mL中約含上述對(duì)照品100、200、100、100μg的溶液作為貯備液。

3.3 樣品溶液的制備

取虎杖細(xì)粉,精密稱(chēng)取約1g,置具塞錐形瓶中,加甲醇50mL,超聲處理15min,濾過(guò),濾渣加甲醇50mL,再次超聲處理15min,過(guò)濾,濾渣用適量甲醇分次洗滌,合并濾液與洗液置250mL分液漏斗中,加10%鹽酸20mL,混勻后用氯仿萃取3次,每次60mL,收集氯仿層,蒸干,殘?jiān)眉状既芙獠⒍ㄈ葜?5mL,經(jīng)微孔濾膜濾過(guò)作為樣品溶液。取虎杖乙醇提取物精密稱(chēng)取約0.5g同法操作。

3.4 重復(fù)性試驗(yàn)

精密量取對(duì)照品溶液貯備液2.0mL置25mL量瓶中,加甲醇稀釋至刻度,搖勻。取該溶液20μL注入液相色譜儀,連續(xù)進(jìn)樣5針,記錄對(duì)照品的峰面積,計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。RSD%分別為0.26%、0.32%、0.28%、0.52%,說(shuō)明此方法重復(fù)性好。

3.5 線(xiàn)性試驗(yàn)

取對(duì)照品貯備液分別精密吸取0.5、1、1.5、2、2.5mL置25mL量瓶中,分別加甲醇稀釋至刻度。取上述溶液各20μL分別注入液相色譜儀,記錄各峰的峰面積,峰面積為縱坐標(biāo),以濃度為橫坐標(biāo),求回歸方程,計(jì)算相關(guān)系數(shù)r。4種對(duì)照品的回歸方程如表2。

表2 4種對(duì)照品的回歸方程

結(jié)果表明:4種對(duì)照品濃度與峰面積呈良好的線(xiàn)性關(guān)系。

3.6 樣品含量測(cè)定

按上述方法對(duì)市售中藥材及自制乙醇提取物進(jìn)行含量測(cè)定,結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 對(duì)市售中藥材及自制乙醇提取物進(jìn)行含量測(cè)定的結(jié)果比較

4 討論

虎杖提取物在醫(yī)藥領(lǐng)域應(yīng)用廣泛,但由于中藥材中化學(xué)成分多,給檢驗(yàn)工作和生產(chǎn)使用都帶來(lái)很大的困難,若能對(duì)兩種或兩種以上的功效成分同時(shí)進(jìn)行提取和檢驗(yàn),將會(huì)帶來(lái)巨大的經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益,節(jié)省了人力物力。

本文采用高效液相色譜法同時(shí)對(duì)虎杖及其提取物中大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚4種有效成分進(jìn)行含量測(cè)定方法的研究與分析。結(jié)果表明乙醇提取物中有效成分的含量遠(yuǎn)高于虎杖中藥材,且有效成分的含量也更加穩(wěn)定、可控。便于生產(chǎn)使用。

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