瘤果黑種草子顆粒對腎陽虛模型小鼠影響的實驗研究△

魏鴻雁徐曉琴李曉瑾肖 瓊孫 宇

（1.新疆維吾爾自治區(qū)中藥民族藥研究所，新疆 烏魯木齊 830002；2.新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團農(nóng)六師醫(yī)院，新疆 五家渠 831300；3.新疆大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，新疆 烏魯木齊 830046）

瘤果黑種草子(Nigella glandulifera Freyn.)為毛莨科植物黑種草屬瘤果黑種草的干燥種子，是我國新疆維吾爾族習(xí)用藥材，性味甘、辛、溫[1]。具有利尿，補腦，補腎，活血，解毒，下乳，通經(jīng)，止咳，烏發(fā)，抗衰老等作用。常用于胸悶氣促，乳房腫痛，耳鳴，乳汁減少，熱淋，石淋，閉經(jīng)等癥[2]。本課題組加工制成的瘤果黑種草子顆粒在預(yù)實驗中發(fā)現(xiàn)具有溫補腎陽、抗衰老的作用，因此，本文就其對腎陽虛癥的影響進行研究，為進一步研發(fā)瘤果黑種草子顆粒奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 實驗動物：昆明品系小鼠 200只，體重（18±2）g，由新疆醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供，動物合格證號：醫(yī)動字16－003號。

1.2 實驗試藥與儀器：瘤果黑種草子（新疆藥業(yè)集團西天山藥材有限公司種植基地提供）；瘤果黑種草子顆粒自制（在4℃冰箱內(nèi)保存?zhèn)溆茫粴浠傻乃勺⑸湟海?5mg/ml）（批號：國藥準字

H14020980，山西晉新雙鶴藥業(yè)有限責任公司生產(chǎn)）；Metter AE163電子天平 (瑞士梅特勒－托利多公司)；YB－Z真空恒溫干燥箱（天津藥典標準儀器廠）；N－1000旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（日本Eyela公司）；BS200S分析天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）；GS－671電子秤（大連星海生物有限公司）；YLS－1A型多功能小鼠自主活動記錄儀（山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院設(shè)備供應(yīng)站）。

1.3 實驗方法[3－4]

1.3.1 模型的建立：選取健康昆明種小鼠60只,雌性，動物房飼養(yǎng)3天后隨機分為5組，第一組作為空白對照組，第二組為模型組，其余三組為給藥組，除空白組外，模型組與給藥組腹腔注射氫化可的松注射液（25 mg/kg·d－1）進行造模。

1.3.2 給藥方法與劑量：空白對照組與模型組給予蒸餾水灌胃

0.2 mL/10 g，其余各組分別按表1劑量給予灌胃,連續(xù)給藥10d。

末次給藥1 h后,稱重測定小鼠自主活動次數(shù)、小鼠游泳存活時間及小鼠臟器指數(shù)[5－6]。

1.3.3 觀測指標：①對小鼠自主活動次數(shù)的影響：末次給藥1h后，稱體重后，將小鼠放入自主活動儀內(nèi),前3min為適應(yīng)期,后5min由計數(shù)儀統(tǒng)計小鼠自主活動次數(shù)。室內(nèi)需安靜，室溫保持18℃～22℃、濕度 20% ～40%[7－11]。②對小鼠游泳存活時間的影響測小鼠自主活動次數(shù)后，將小鼠放入水溫為20℃±1℃，水深20cm的50cm×30cm×25cm的玻璃缸內(nèi)，每次1只，小鼠尾根部負荷7%體重的重物，置水游泳，觀察小鼠游泳至力竭（在水下10s不能上浮），該時間為小鼠的游泳時間[12－16]。③對小鼠臟器指數(shù)的影響記錄完小鼠的游泳存活時間后，即刻將小鼠取出解剖，取其腎、睪丸、附睪、前列腺+精囊，用分析天平稱重并計算臟器指數(shù)[17－21]。

表1 實驗小鼠分組及給藥劑量

2 實驗結(jié)果

2.1 對小鼠自主活動次數(shù)的影響:模型組小鼠自發(fā)活動次數(shù)明顯低于空白對照組（P＜0.01），瘤果黑種草子顆粒組、原藥材組及去油瘤果黑種草子組的自發(fā)活動次數(shù)明顯高于模型組（P＜0.01），有顯著性差異。瘤果黑種草子顆粒組與原藥材組、去油瘤果黑種草子組在自主活動次數(shù)方面相近，無統(tǒng)計學(xué)差異。實驗結(jié)果見表2。

2.2 對小鼠游泳存活時間的影響：模型組的小鼠游泳存活時間明顯短于空白對照組(P＜0.01)，模型組的小鼠游泳存活時間明顯短于瘤果黑種草子顆粒組、原藥材組及去油瘤果黑種草子組(P＜0.01)。瘤果黑種草子顆粒組與原藥材組、去油瘤果黑種草子組在小鼠游泳存活時間方面無統(tǒng)計學(xué)差異。實驗結(jié)果見表3。

表2 小鼠自主活動次數(shù)（±s）

表2 小鼠自主活動次數(shù)（±s）

注: 與對照組比較,*P＜0.01,**P＜0.05，與模型組比較▲P＜0.01,▲▲P＜0.05。

組別 n 自主活動次數(shù)對照組模型組瘤果黑種草子制劑組瘤果黑種草子原藥材組去油瘤果黑種草子組12 12 12 12 12 402.33±40.33▲335.25±58.53*412.08±70.32▲440.50±38.25▲439.75±82.64▲

表3 游泳存活時間的影響（±s）

表3 游泳存活時間的影響（±s）

注: 與對照組比較,*P＜0.01,**P＜0.05，與模型組比較▲P＜0.01,▲▲P＜0.05

組別 n 存活時間(min)對照組模型組瘤果黑種草子制劑組瘤果黑種草子原藥材組去油瘤果黑種草子組12 12 12 12 12 285±105▲146±33*201±28▲207±32▲201±26.97▲

2.3 對小鼠臟器指數(shù)的影響：腎陽虛模型組的腎、前列腺+精囊、附睪、睪丸的重量較空白對照組顯著減輕，瘤果黑種草子顆粒組能提高腎陽虛癥小鼠的附睪與睪丸指數(shù)，但無統(tǒng)計學(xué)意義，兩組間腎指數(shù)相近；瘤果黑種草子原藥材、去油瘤果黑種草子組均能提高腎陽虛小鼠附睪、睪丸指數(shù)（P＜0.01），具有統(tǒng)計學(xué)差異。實驗結(jié)果見表4。

表4 對腎陽虛癥小鼠臟器指數(shù)的影響（±s）

表4 對腎陽虛癥小鼠臟器指數(shù)的影響（±s）

注: 與對照組比較 *P＜0.01,**P＜0.05，與模型組比較▲P＜0.01,▲▲P＜0.05

組別 n 腎 前列腺+精囊 附睪 睪丸(g)對照組模型組瘤果黑種草子制劑組瘤果黑種草子原藥材組去油瘤果黑種草子組12 12 12 1.86±0.15 1.67±0.20**1.66±0.23 0.64±0.12 0.45±0.17*0.40±0.12*0.18±0.09 0.10±0.02*0.11±0.03*0.61±0.09 0.51±0.09**0.58±0.15 121.66±0.210.39±0.10*121.99±0.29▲0.50±0.16**0.18±0.05▲0.23±0.05▲0.67±0.07▲0.70±0.10▲

4 討 論

4.1 腎陽虛模型的建立：現(xiàn)代研究認為，下丘腦－垂體－靶腺軸功能障礙和功能低下是腎陽虛癥的病理基礎(chǔ)。靶腺軸主要包括腎上腺軸、甲狀腺軸、性腺軸。這3個軸中的一個或幾個出現(xiàn)功能低下都可能引起腎陽虛癥。腎陽虛癥動物模型中，氫化可的松模型是比較經(jīng)典的模型，應(yīng)用最多[22]。氫化可的松所致的小鼠腎陽虛模型在病理方面與腎陽虛證實質(zhì)研究成果在很大程度上取得一致,小鼠癥狀表現(xiàn)也較好地符合腎陽虛證的辨證診斷。造模后,小鼠出現(xiàn)一系列“耗竭”現(xiàn)象：神淡、精神不振、反應(yīng)遲鈍、被毛疏松、失去光澤及脫毛、消瘦、肢尾冷、肛溫降低、畏寒肢冷、拱背蜷曲等外形衰弱及寒象。

4.2 不同給藥組對腎陽虛癥小鼠的影響：不同給藥組（瘤果黑種草子顆粒組、原藥材組、去油瘤果黑種草子組）小鼠的負重游泳時間和自主活動次數(shù)均高于腎陽虛模型組，說明瘤果黑種草子顆粒、原藥材及去油瘤果黑種草子均可改善小鼠的腎陽虛癥，增強腎陽虛小鼠的體質(zhì)、提高其對環(huán)境的適應(yīng)能力。腎陽虛癥小鼠的各種器官會有萎縮現(xiàn)象，其中以腎、睪丸、附睪、精液囊和前列腺的重量下降最為明顯。模型組小鼠的睪丸指數(shù)附睪指數(shù)明顯低于不同給藥組（P＜0.01），推測藥物可能可以改善腎陽虛小鼠生殖器官的狀況。

[1]劉勇民.維吾爾藥志[M].烏魯中齊:新疆科技衛(wèi)生出版社,1999.5.15.

[2]郝海峰,任麗娟.黑種草的應(yīng)用及化學(xué)成分研究概況[J].國外醫(yī)學(xué)中醫(yī)中藥分冊,1994,16(6);8.

[3]柳永青.腎陽虛證的分子機制進展和展望[J].湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報 2009,29(10):66－67.

[4]賴展少,劉明,馬建東.腎陽虛患者體內(nèi)性激素水平針灸療法研究近況和評述[J].中華現(xiàn)代中醫(yī)學(xué)雜志.2010年,6(3):134－137.

[5]袁本利.藥物安全評價中臟器系數(shù)的意義及不足[J].中國新藥雜志,2003,12(11):960－963.

[6]郝志紅,張劍宇,趙思俊.補腎方對腎陽虛模型小鼠影響的實驗研究[J].山西中醫(yī),2008,3(24):42－44

[7]杜標炎.腎陽虛造模及補腎中藥對大鼠免疫功能的影響[J].廣州中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報,1996,13(1):37

[8]郭凱,徐蓉,俞偉,等.金匱腎氣丸對腎陽虛動物模型影響的拆方研究[J].中醫(yī)藥學(xué)報,2003,31(1):20.

[9]王建紅,伍慶華,劉海云,等.腎陽虛大鼠垂體－甲狀腺軸功能動態(tài)分析[J].遼寧中醫(yī)雜志,2006,33(6):751.

[10]史紅,劉雪莉,繆云萍,等.腎寶合劑改善性功能的藥理作用研究[J].中藥新藥與臨床應(yīng)用,2002,13(1):17.

[11]楊裕華,李震.補腎中藥對腎陽虛動物模型影響的試驗研究進展[J].時珍國醫(yī)國藥,2008,19(1):13－15.

[12]盧文麗,方肇勤.陽虛癥動物模型的造模方法與評析[J].上海中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報,2004,18(4):44－48.

[13]呂志強,李有貴,林天寶,計東風.桑葚素對老齡小鼠腎陽虛癥狀的療效試驗[J].蠶業(yè)科學(xué),2008,34(1):124－127.

[14]肖靜,王毅興,高建東,等.腎陽虛癥的研究進展[J].上海中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報,2008,22(2):73－76.

[15]陳奇.中藥藥理研究方法學(xué)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,1994:11 2－118.

[16]張均田.現(xiàn)代藥理學(xué)實驗方法[M].北京:北京醫(yī)科大學(xué)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)聯(lián)合出版社,1998:1382.

[17]徐叔云,卞如廉.藥理學(xué)實驗方法[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,20 02:1414.

[18]呂圭源,蘇潔,陳素紅,等.甘涼與甘溫歸肝腎經(jīng)中藥對雌二醇致小鼠腎陽虛的影響[J].中藥新藥與臨床藥理,2008,6(19):422－425.

[19]彭蘊茹,沈明勤,羅宇慧.金匱腎氣丸防治小鼠腎陽虛的實驗研究[J].中成藥,2004,26(5):395－397.

[20]李文蘭,戴燁,徐棟,季宇彬.金匱腎氣丸不同極性部位對可的松致腎陽虛大鼠睪酮和氧化應(yīng)激的影響[J].中國新藥雜志,20 07,23(16):1944－1946.

[21]張宇,崔松煥,金春愛,等.鹿茸保健飲品對氫化可的松所致小鼠腎陽虛癥的影響[J].特產(chǎn)研究,2009,3:14－16.

[22]李震.腎主生殖的現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究[J].實用中西醫(yī)結(jié)合雜志,199 7,10(7):625－626.