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    HPLC法測(cè)定頸椎通絡(luò)丸桂皮醛、芍藥苷含量△

    2012-11-29 08:00:38孟克巴牙爾張高娃白音夫
    中國(guó)民族醫(yī)藥雜志 2012年1期
    關(guān)鍵詞:桂皮芍藥通絡(luò)

    孟克巴牙爾 常 嵐 張高娃 趙 陽(yáng) 白音夫?

    (1.內(nèi)蒙古自治區(qū)中蒙醫(yī)醫(yī)院,內(nèi)蒙古呼和浩特010020;2.呼和浩特市環(huán)境科學(xué)研究所,內(nèi)蒙古呼和浩特010030;3.內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)院2010級(jí)研究生,內(nèi)蒙古呼和浩特 010050)

    頸椎通絡(luò)丸是我院所臨床協(xié)定處方制劑。具有祛風(fēng)通絡(luò),活血化瘀作用,用于頸椎病引起的頭痛、頭暈、耳鳴等癥。主要由白芍、葛根、桂枝、羌活、地龍、烏蛇、防風(fēng)、制草烏、甘草等藥材組成。制法,以上藥材粉碎成細(xì)粉,加蜂蜜制成小蜜丸。本文采用液相色譜法對(duì)桂皮醛、芍藥苷含量進(jìn)行測(cè)定。

    1 儀器、試劑及樣品

    高效液相色譜儀:1100型(美國(guó) Agilentg公司制造);NC-2000中北色譜工作站;1/10萬(wàn)光電天平:TG332A型(湘儀制造);超聲清洗儀:AS2060B型(上??茖W(xué)儀器公司制造)。

    甲醇、乙腈:色譜純,由美國(guó)Tedai公司生產(chǎn);磷酸為分析純;水為三蒸水。桂皮醛(710~9005)芍藥苷(0736~200014)由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供。頸椎通絡(luò)丸由內(nèi)蒙古中蒙醫(yī)醫(yī)院制劑中心生產(chǎn)。

    2 方法與結(jié)果

    2.1 色譜條件:非羅門(mén) Kromasil色譜柱 C18(4.6×200mm,5μm)。流速:1mL·min-1;柱溫:30℃。桂皮醛測(cè)定波長(zhǎng)290nm,流動(dòng)相:甲醇-1%:磷酸(300:200);芍藥苷測(cè)定波長(zhǎng)為230nm,流動(dòng)相:乙腈-0.1%磷酸溶液(22:78)[1]。

    2.2 測(cè)定溶液的制備

    2.2.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱(chēng)取桂皮醛對(duì)照品適量,用甲醇配制成0.08mg·mL-1;濃度的溶液。精密稱(chēng)取芍藥苷對(duì)照品適量,用甲醇配制成0.09mg·mL-1;濃度的溶液。

    2.2.2 供試品溶液的制備:取本品,用剪刀剪碎,稱(chēng)取0.4g,置研缽內(nèi),加甲醇2ml研磨直到全部溶散,甲醇溶液轉(zhuǎn)移至50mL具塞錐形瓶中,用甲醇沖洗研缽3次,每次2mL。超聲處理(功率250W,頻率40kHz)30min,再將甲醇溶液轉(zhuǎn)移至10mL量瓶中,加甲醇至刻度,搖勻,靜止,用0.45μm濾膜濾過(guò),即的。

    2.2.3 專(zhuān)屬性試驗(yàn):依照樣品制備方法分別制備不含肉桂和芍藥的頸椎通絡(luò)丸的陰性制劑,依照色譜條件測(cè)定。桂皮醛陰性樣品與芍藥苷陰性樣品在與樣品相應(yīng)的保留時(shí)間內(nèi)無(wú)干擾峰出現(xiàn),表明,其它藥材對(duì)桂皮醛及芍藥苷的測(cè)定無(wú)干擾。

    2.3 線性關(guān)系考察:精密吸取桂皮醛溶液1mL置10mL量瓶?jī)?nèi)為A溶液,由A溶液量取1mL按上法稀釋為B溶液。吸取 B 溶液2.5、5μL,A 溶液 1、2、4、8μL 按色譜條件測(cè)定峰面積。回歸方程:Y=5738+4369354x,r=0.9999。桂皮醛在 0.02 ~0.64μg成線性關(guān)系。

    芍藥苷對(duì)照品溶液為A,精密吸取1mL置10mL量瓶?jī)?nèi)加甲醇至刻度為B溶液。吸取A溶液4、6、8μL,B溶液2、4、6μL按色譜條件測(cè)定峰面積?;貧w方程:Y=20038+3807746x,r=0.999。芍藥苷在 0.0182 ~0.546μg 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

    2.4 精密度試驗(yàn):精密吸取同一供試品溶液4μL,連續(xù)進(jìn)樣5次,分別測(cè)定桂皮醛和芍藥苷峰面積,結(jié)果峰面積的RSD分別為0.74%與1.01%。

    2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn):取同批號(hào)供試品溶液,分別于樣品制備后第0,2,4,8h進(jìn)樣 4μL,測(cè)定桂皮醛和芍藥苷峰面積,結(jié)果峰面積的RSD分別為0.65%與1.10%,樣品在8h內(nèi)穩(wěn)定

    2.6 重復(fù)性試驗(yàn):取同批次樣品,按2.2項(xiàng)下的方法制備5份樣品。分別測(cè)定桂皮醛和芍藥苷含量,桂皮醛平均含量 0.21 mg·g-1,RSD 為 3.5%;芍藥苷平均含量 0.16 mg·g-1,RSD 為 3.7%。

    2.7 回收率試驗(yàn):取已知桂皮醛和芍藥苷含量頸椎通絡(luò)丸0.3g,置10mL容量瓶?jī)?nèi)分別精密加入桂皮醛對(duì)照品溶液1mL(0.08mg·mL-1),芍藥苷對(duì)照品溶液 0.5mL(0.091mg·mL-1),加甲醇至刻度,溶液轉(zhuǎn)入置50mL具塞錐形瓶中,按供試品方法制備,提取,過(guò)濾。按色譜條件測(cè)定。計(jì)算測(cè)定平均回收率。見(jiàn)表1樣品編號(hào)1~5為桂皮醛加樣回收率測(cè)定,6~10為芍藥苷加樣回收率測(cè)定3樣品測(cè)定分別吸取對(duì)照品溶液與樣品溶液4μL,依上述色譜條件測(cè)定不同批號(hào)桂皮醛和芍藥苷含量,二者平均含量分別為 0.24 mg﹒ g-1、0.16 mg﹒g–1。

    表1 頸椎通絡(luò)丸加樣回收率測(cè)定

    表2 樣品中桂皮醛和芍藥苷含量測(cè)定(n=5)

    4 討論

    對(duì)供試品溶液制備方法進(jìn)行研究。分別考察超聲、回流提取方法,結(jié)果表明超聲處理方法操作簡(jiǎn)便、省時(shí),提取效率高。對(duì)提取時(shí)間考察表明,樣品超聲處理30min后桂皮醛與芍藥苷含量不再增加。色譜柱適用性研究表明,Agilent XDB -C8柱 (150×4.6 mm,5μm)、非羅門(mén)Kromasil C18柱(200×4.6 mm,5μm)均可適用本試驗(yàn)測(cè)定。測(cè)定結(jié)果表明,桂皮醛含量在 0.21 ~0.27 mg·g-1,芍藥苷含量0.12 ~0.19mg·g-1,批次之間含量差異不大。采用 HPLC法測(cè)定頸椎通絡(luò)丸指標(biāo)性成分,可作為有效控制藥品的質(zhì)量的方法之一。該方法重現(xiàn)性好,操作簡(jiǎn)便、靈敏、準(zhǔn)確、可靠。

    [1]中華人民共和國(guó)藥典委員會(huì).中國(guó)藥典(一部)[S].中國(guó)醫(yī)藥出版社,2010.127,96

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