食管鱗癌組織中nm23的表達及臨床意義

李秀娟，劉軍超，張林西，金春亭，范 婕，李玉珍，李海軍

（1.河北北方學院病理教研室，河北 張家口075000；2.河北北方學院附屬第一醫(yī)院病理科，河北 張家口075000）

食管癌死亡率較高的主要原因之一是由于早期癥狀不明顯，多數患者在確診時已達癌癥的中晚期而延誤了最佳治療時機。

腫瘤轉移抑制基因nm23定位于17號染色體的q21.3上，編碼二磷酸核苷激酶，是新近發(fā)現(xiàn)的一種腫瘤轉移抑制基因，在大多數惡性腫瘤中nm23低水平表達者易發(fā)生轉移[1－5]。有研究表明，nm23基因表達率的降低與腫瘤的轉移有一定的關系，且nm23基因的陽性表達與腫瘤患者的預后密切相關，nm23基因表達陰性的病人的存活率明顯低于表達陽性的病人。本研究應用免疫組織化學SP法檢測食管鱗癌組織中nm23的表達情況，為探討nm23與食管癌預后的關系提供有利的依據。

1 材料與方法

1.1 一般資料

1.1.1 標本來源 收集2009－06—2010－12月期間河北北方學院附屬第一醫(yī)院病理科切除的食管癌存檔標本蠟塊74例。全部病例術前未經任何治療，手術后病理切片證實均為食管鱗狀細胞癌。其中男70例，女4例；中位年齡62歲。高分化鱗癌16例，中分化鱗癌40例，低分化鱗癌18例；淋巴結轉移33例，無淋巴結轉移41例；外膜浸潤28例，無外膜浸潤46例。另外收集22例正常食管黏膜組織作為對照。

1.1.2 試劑 鼠抗人nm23單克隆抗體、免疫組化二抗工作液和DAB試劑盒均購自北京中杉金橋生物制品有限公司。試劑均嚴格按照說明書使用，以確保實驗的可靠性。

1.2 方法

采用免疫組化SP二步法進行染色，切片常規(guī)脫蠟至水，3%H2O237℃5min，檸檬酸緩沖液加熱抗原修復15min，滴加一抗，37℃60min，PBS清洗后滴加二抗，37℃30min，DAB顯色，中性樹膠封片。同時用PBS代替一抗作染色的陰性對照，用已知nm23染色陽性的胃癌組織片做陽性對照。

1.3 結果判斷

nm23主要定位于細胞核，細胞核中出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性。采用Image－Pro Plus圖像分析軟件進行圖像分析。測定條件：每張切片隨機觀察5個高倍（10×40）視野計算均值，平均每高倍視野陽性癌細胞數占所觀察癌細胞總數的百分率作為陽性結果，陽性細胞數＜10%為（－），10%～50%為（＋），＞50%為（＋＋）[6]。

1.4 統(tǒng)計學方法

采用SPSS13.0統(tǒng)計學軟件進行分析，nm23蛋白表達與各臨床病理參數的關系采用χ2檢驗，檢驗水準α＝0.05。

2 結 果

2.1 食管鱗癌及正常食管組織中nm23的表達（圖1～2、表1）

圖1 nm23expression in ESCC（IHC200＊ ）

圖2 nm23expression in NEM（IHC200＊）

74例食管癌組織中nm23蛋白陽性表達率為71.6%（53/74），22例正常組織中nm23蛋白陽性表達率為95.5%（21/22），兩組比較差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。

2.2 食管鱗癌中nm23與各臨床病理指標的關系（表2）

表1 食管鱗癌與正常食管組織中nm23的表達

表2 食管鱗癌nm23與臨床病理指標的關系

食管癌組織中nm23蛋白在高中分化組和低分化組陽性表達率分別為78.6%和50.0%，兩組比較差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；在有淋巴結轉移組和無淋巴結轉移組nm23蛋白陽性表達率分別為57.6%和82.9%，兩組比較差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。提示nm23表達與組織分化和有無淋巴結轉移有相關性，而與年齡、性別及浸潤深度無關。

3 討 論

nm23即腫瘤轉移抑制基因，1988年被Steeg[7]等用消減雜交法從轉移潛力不同的K－1735鼠黑色素瘤細胞株中分離出來。目前該基因家族有6個成員，其中nm23－H1基因與腫瘤轉移關系最為密切，故臨床上研究最多。nm23－H1基因定位于人類于人類17號染色體上，長度為18kD，含有5個外顯子。

nm23基因編碼的nm23蛋白與二磷酸核苷激酶（NDPK）的氨基酸順序約有89%的同源性。主要位于細胞漿和細胞核，也可見于細胞膜。因此，nm23蛋白很可能通過與NDPK一致或相似的途徑調節(jié)細胞的信號傳遞、細胞分化等過程[8]。NDPK為細胞提供除ATP外的所有三磷酸核苷，它能使GDP還原為GTP，而GTP可以直接調節(jié)細胞膜G蛋白活性，發(fā)揮生長抑制等負性調節(jié)功能。提示nm23所具有的功能一旦被破壞，便有可能導致細胞分化受阻而影響細胞發(fā)育和促進腫瘤發(fā)展。另外，GTP還可直接影響微管、微絲等細胞骨架蛋白的生物活性，通過調節(jié)細胞微管系統(tǒng)的狀態(tài)影響紡綞體的形成和細胞運動。如果NDPK出現(xiàn)異常，會發(fā)生紡綞體形成障礙，從而出現(xiàn)非整倍體細胞，細胞運動也將出現(xiàn)異常，進而促進腫瘤細胞轉移。

最近研究表明，nm23通過下調EDG2（內皮細胞分化溶血磷脂酸G蛋白偶聯(lián)受體2）的水平來抑制腫瘤轉移[9]。Leone將nm23cDNA導入乳腺癌細胞，結果表明乳腺癌的轉移潛能顯著下降，直接證實了nm23作為腫瘤轉移抑制基因的功能。目前已明確在胃癌、肝癌、膽囊癌和結直腸癌等腫瘤中，nm23基因的高表達能有效抑制腫瘤轉移，提高患者預后水平[10]。

本實驗運用免疫組織化學SP法檢測了nm23在食管鱗癌中的表達。結果顯示，食管癌組織中nm23的陽性表達率明顯低于正常食管粘膜組織（P＜0.05），在高中分化食管癌組織中nm23的陽性表達率（78.6%）明顯高于低分化組（50.0%），在無淋巴結轉移組（82.9%）明顯高于淋巴結轉移組（57.6%）。以上結果提示nm23蛋白在食管鱗癌發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮負性調節(jié)作用，其表達程度越低預示預后越差。故食管癌患者手術前后檢測nm23蛋白的表達可以用來預測食管癌的淋巴結轉移，nm23可作為評價食管癌預后的指標之一。

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