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    CD44v6及VEGF在子宮腺肌病中的表達(dá)及意義

    2012-11-27 14:17:40楊蘇安
    關(guān)鍵詞:腺肌病肌層異位

    楊 靜,楊蘇安,段 智

    (長沙市第一醫(yī)院,湖南 長沙 410002)

    子宮腺肌?。╝denomyosis)是指子宮內(nèi)膜間質(zhì)和腺體存在于子宮肌層中,伴隨周圍肌層細(xì)胞的代償性肥大和增生[1]。目前病因不明確。多數(shù)研究者認(rèn)為子宮腺肌病(AM)是基底層內(nèi)膜細(xì)胞增生,侵入至肌層間質(zhì)的結(jié)果[1]。CD44分子作為細(xì)胞黏附分子中的一類,是一種分布極廣的細(xì)胞表面跨膜糖蛋白。能與多種配體分子結(jié)合。主要參與細(xì)胞與細(xì)胞間,細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)間的黏附過程及腫瘤轉(zhuǎn)移過程[2]。VEGF是近年來發(fā)現(xiàn)的最主要的一個(gè)血管調(diào)節(jié)因子。VEGF的表達(dá)與腫瘤浸潤,轉(zhuǎn)移有明顯相關(guān)性。本研究采用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)CD44v6及VEGF在子宮腺肌?。ˋM)患者在位內(nèi)膜及異位內(nèi)膜中的表達(dá),進(jìn)一步探討他們?cè)贏M發(fā)生,發(fā)展中的作用。

    1 對(duì)象和方法

    1.1 對(duì)象

    選取2010年11月~2011年8月在本院進(jìn)行子宮切除并經(jīng)病理證實(shí)的子宮腺肌病標(biāo)本45例作為實(shí)驗(yàn)組。其中子宮內(nèi)膜增生期30例,分泌期15例。年齡35~55歲(平均44歲)。另選同期子宮切除病理診斷為子宮平滑肌瘤標(biāo)本共35例作為對(duì)照組。其中子宮內(nèi)膜增生期20例,分泌期15例。術(shù)前3個(gè)月均未使用激素類藥物。

    1.2 標(biāo)本取材與方法

    標(biāo)本經(jīng)10%甲醛固定,石蠟包埋,切成4μm厚的切片。采用免疫組化SP法。即用型UltraSensitive-SP試劑盒,鼠抗人單克隆抗體CD44v6(克隆號(hào)2F10)及VEGF(克隆號(hào)VG1)均購自福州邁新生物技術(shù)有限公司。CD44v6一抗工作濃度1∶100,VEGF一抗工作濃度1∶500。染色步驟參照說明書進(jìn)行。二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色,脫水,透明,封片。CD44v6用已知胃癌切片作陽性對(duì)照,VEGF用已知胃癌切片作陽性對(duì)照。磷酸鹽緩沖液代替一抗作陰性對(duì)照。

    1.3 結(jié)果判定

    染色結(jié)果判定:CD44v6主要表達(dá)于細(xì)胞膜和(或)細(xì)胞質(zhì)。為標(biāo)黃色顆粒。①按照細(xì)胞中著色深淺評(píng)分:無著色(0分),淺黃色(1分),棕黃色(2分),棕褐色(3分)。②按照陽性細(xì)胞百分比評(píng)分:<5%為0分,6%~≤25%為 1分,26%~<50%為 2分,>50%為3分。?、佗陧?xiàng)評(píng)分的乘積作為總評(píng)分,0分為陰性(-);1~5分為弱陽性(+);6分~8分為陽性(++);≥9分為強(qiáng)陽性(+++)。

    1.4 VEGF主要表達(dá)于細(xì)胞漿

    標(biāo)為棕黃色。根據(jù)細(xì)胞中染色深淺評(píng)分:無著色(0分)、淺黃色(1分)、橘黃色(2分)和棕黃色(3分)。按照陽性細(xì)胞百分比評(píng)分:0為0分、<25%為1分、26%~50%為2分和>50%為3分。將兩者評(píng)分相加,相加結(jié)果:<3 分為陰性(-);3~5 分為弱陽性(+);6~8分為陽性(++);≥9分為強(qiáng)陽性(+++)。

    1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

    應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析,采用秩和檢驗(yàn)比較各組CD44v6和VEGF的表達(dá)差異。采用Spearman等級(jí)相關(guān)分析CD44v6和VEGF間的關(guān)聯(lián)程度。

    2 結(jié)果

    2.1 CD44v6在各組內(nèi)膜組織中的表達(dá)

    CD44v6在AM異位內(nèi)膜組織中的表達(dá)強(qiáng)度高于在位內(nèi)膜組織及對(duì)照組。在位內(nèi)膜組CD44v6的表達(dá)強(qiáng)度高于對(duì)照組。各組增生期與分泌期CD44v6的表達(dá)差異無顯著性。

    表1 CD44v6在各組內(nèi)膜組織中的表達(dá)

    表2 VEGF在各組內(nèi)膜組織中的表達(dá)

    2.2 VEGF在各組內(nèi)膜組織中的表達(dá)

    VEGF在AM異位內(nèi)膜組織中的表達(dá)強(qiáng)度高于在位內(nèi)膜組織及對(duì)照組。在位內(nèi)膜組VEGF的表達(dá)強(qiáng)度顯著高于對(duì)照組。各組的增生期內(nèi)膜及分泌期內(nèi)膜的VEGF表達(dá)強(qiáng)度差異無顯著性。

    2.3 AM組異位內(nèi)膜組織中CD44v6與VEGF表達(dá)的相關(guān)程度

    經(jīng)Spearman等級(jí)相關(guān)分析,CD44v6和VEGF在實(shí)驗(yàn)組的異位內(nèi)膜組織中表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.340,P=0.01)。

    3 討論

    CD44v6在不同子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá)及意義。CD44是一類分布廣泛的具有高度異質(zhì)性的單鏈膜表面蛋白。包括胞外區(qū),疏水性的跨膜區(qū)及胞內(nèi)區(qū)3個(gè)部分。CD44通過細(xì)胞膜外受體與相應(yīng)配體如透明質(zhì)酸,纖維連接蛋白,選擇蛋白[3]等結(jié)合,介導(dǎo)細(xì)胞與細(xì)胞,細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix,ECM)之間的黏附作用,調(diào)節(jié)細(xì)胞的增殖與移動(dòng)。CD44是淋巴細(xì)胞歸巢和透明質(zhì)酸的主要受體,參與細(xì)胞偽足形成,引起細(xì)胞形態(tài)和游動(dòng)性改變,直接參與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移[4]。CD44v6是CD44的變異體,與CD44標(biāo)準(zhǔn)型的基本結(jié)構(gòu)相似,主要分布與上皮源性細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞。近年來許多研究表明,CD44v6參與腫瘤的發(fā)生,發(fā)展與轉(zhuǎn)移[5-6]。子宮腺肌病中子宮內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞黏附,種植于子宮肌層,與腫瘤細(xì)胞相似。本研究發(fā)現(xiàn)CD44v6在AM異位內(nèi)膜組織及在位內(nèi)膜組織中的表達(dá)強(qiáng)度均高于對(duì)照組。提示異位子宮內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞能破壞子宮肌層細(xì)胞外基質(zhì),黏附種植于子宮肌層,并浸潤性生長。在位子宮內(nèi)膜CD44v6表達(dá)上調(diào),提示在位子宮內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞能與基質(zhì)黏附性增強(qiáng),更容易突破基底層,向組織深層浸潤。研究發(fā)現(xiàn),各組中增生期及分泌期CD44v6的表達(dá)無明顯差異,提示AM在增生期及分泌期具有同樣侵襲性。

    VEGF最先從腫瘤細(xì)胞分離出來,是一種結(jié)合肝素的二聚體蛋白。其糖蛋白單體以二硫鍵結(jié)合成二聚體才有活性。是通過酪氨酸激酶?jìng)鲗?dǎo)通路發(fā)揮作用的?,F(xiàn)在已經(jīng)證實(shí)VEGF及其家族成員不單在腫瘤血管生成,在其他生理和病理的血管生成中都是必不可少的誘導(dǎo)因子。PEPPER等[7]在裸鼠子宮內(nèi)膜異位癥模型中發(fā)現(xiàn):注射VEGF能促進(jìn)異位病灶生長,DONNEZ等[8]研究結(jié)果表明,子宮內(nèi)膜異位癥患者原位子宮內(nèi)膜異位子宮內(nèi)膜VEGF水平較正常婦女子宮內(nèi)膜水平高。本研究應(yīng)用免疫組化方法檢測(cè)了子宮腺肌病患者在位和異位內(nèi)膜與子宮肌瘤子宮內(nèi)膜中VEGF的表達(dá),結(jié)果顯示VEGF在異位內(nèi)膜中表達(dá)明顯高于對(duì)照組,提示腺肌病中異位內(nèi)膜具有很強(qiáng)的血管生成能力,使異位內(nèi)膜能存活,并進(jìn)一步侵襲,使病灶不斷擴(kuò)大,加速異位病灶的種植,子宮腺肌病患者在位內(nèi)膜VEGF表達(dá)明顯高于對(duì)照組,提示子宮腺肌病患者在位內(nèi)膜可能因VEGF過度表達(dá)而表現(xiàn)比正常子宮內(nèi)膜更強(qiáng)的血管生成能力,子宮內(nèi)膜間質(zhì)血管滲透性增加,為子宮內(nèi)膜侵入子宮肌層創(chuàng)造條件,提示對(duì)在位子宮內(nèi)膜的研究可能成為揭示子宮腺肌病發(fā)病機(jī)制的關(guān)鍵。本研究中各組內(nèi)膜增生期和分泌期VEGF的表達(dá)無明顯差異,提示腺肌病病灶和在位內(nèi)膜的強(qiáng)血管生成能力貫穿于整個(gè)月經(jīng)周期,使病情遷延不愈,病情進(jìn)行性發(fā)展。

    目前對(duì)異位子宮內(nèi)膜細(xì)胞生物學(xué)特性的研究報(bào)道存在較大的分歧[9-10],其黏附與血管活性的相關(guān)性的研究報(bào)道不多。本研究結(jié)果顯示CD44v6與VEGF在AM異位內(nèi)膜組織中的表達(dá)存在正相關(guān),提示AM黏附性的改變與血管活性的持續(xù)性存在,兩者協(xié)同作用可能是導(dǎo)致其發(fā)病的病理基礎(chǔ)。CD44v6的表達(dá)上調(diào)使AM腺上皮細(xì)胞的黏附,游動(dòng)性增強(qiáng),VEGF表達(dá)上調(diào)使AM腺上皮細(xì)胞具有強(qiáng)的血管生成能力,兩者相互作用使AM腺上皮細(xì)胞易于突破基底層,并血管生成黏附、種植并生長于肌層,促使了子宮腺肌病的發(fā)生、發(fā)展。

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