廣東清遠鵝弓形蟲病血清學調(diào)查

王新秋，高 艷，李功勇，2，何 勇，袁子國，翁亞彪，林瑞慶

（1.華南農(nóng)業(yè)大學獸醫(yī)學院，廣東 廣州510642；2.廣東省清遠市動物衛(wèi)生監(jiān)督所，廣東 清遠511515）

弓形蟲病是由孢子蟲綱、弓形蟲屬的龔地弓形蟲（Toxoplasmagondii）引起的一種寄生于動物或人的細胞內(nèi)的多宿主原蟲病，是一種呈世界性分布的人獸共患寄生蟲?。?－2］。弓形蟲病在人群中流行范圍廣，全世界有約1／4人口受到感染，平均血清陽性率為25%～50%，甚至可高達85%以上［3］。龔地弓形蟲血清學調(diào)查在許多國家都有研究［1－2］，并且在中國的許多省份也見報道，但禽類的報道相對較少［4－7］。盡管禽類感染弓形蟲常呈亞臨床癥狀或無臨床癥狀，但禽作為其傳播的中間宿主，在該病的傳播中起重要作用［1］。廣東是我國水禽的傳統(tǒng)出口大省，而清遠市是廣東養(yǎng)鵝業(yè)的重要的生產(chǎn)基地，對弓形蟲特異性抗體的檢測可以揭示弓形蟲在鵝群中的感染情況，有助于了解該病在廣東地區(qū)以至我國養(yǎng)鵝業(yè)的流行情況，并有利于審時度勢，提前預防，以減少病原對養(yǎng)鵝業(yè)及對社會的影響和危害，為更好的預防和控制此類寄生蟲提供參考。

1 材料與方法

1.1 血清樣品的采集 血清樣品從廣東省清遠市12個鵝場（編號 MG1－MG8，BG1－BG4）不同日齡的鵝只，共520只，其中包括1～30日齡肉鵝，31～60日齡肉鵝和60日齡以上肉鵝各120只，91～360日齡種鵝和360日齡以上種鵝各80只（表1）。無菌采集受檢動物的靜脈血1.5～2.0mL，離心獲得血清。

1.2 檢測試劑 血清稀釋液及抗原稀釋液由本實驗室自備保存。檢測抗原由美國農(nóng)業(yè)部動物與自然資源研究所Jitender Dubey教授惠贈。

1.3 方法 應用美國農(nóng)業(yè)部動物與自然資源研究所Jitender Dubey教授所贈弓形蟲抗原按常規(guī)方法進行抗體檢測，反應在96孔微孔板上進行。抗原按500μL的抗原稀釋液中加入7μL的2－巰基乙醇、10μL的伊文氏藍和30μL的抗原的比例稀釋備用。每孔加血清稀釋液24μL，除陽性對照孔、陰性對照孔和空白對照孔之外，每孔加1μL的待檢血清。在加入25μL稀釋后的抗原。充分振蕩后于37℃溫育過夜。結果判定：判定“＋＋”以上的為陽性，“＋”以下的判定為陰性。

1.4 數(shù)據(jù)分析 應用SPSS 17.0軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。

2 結果

被檢520份鵝血清中，共檢出弓形蟲抗體陽性的9份，陽性率為1.73%。其中肉鵝血清360份，檢出弓形蟲抗體陽性2份，陽性率為0.56%，鵝場MG2和MG3各檢出1例陽性血清，陽性率均為2.22%；種鵝血清160份，檢出弓形蟲抗體陽性7份，陽性率為4.38%，鵝場BG1、BG2、BG3和BG4的陽性率分別為：2.5%、5%、7.5%、2.5%，見表1。

表1 清遠市鵝弓形蟲抗體的血清學調(diào)查樣品及結果

3 分析與討論

由于弓形蟲病的感染一般無特異性臨床癥狀而難以確診，病原分離限于機率及感染期不同等原因使得這一確診方法不易達到預期目的，因此血清學診斷方法仍為目前主要的診斷方法。常見的血清學方法有染色試驗（DT）、補體結合試驗（CFT與CIT）、直接凝集試驗（DAT）、間接凝集試驗（IHAT）、乳膠凝集試驗（LAT）、酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）、間接免疫熒光抗體試驗（IFAT）以及本試驗所用的改良凝集試驗（MAT）。MAT方法是在直接凝集試驗的基礎上經(jīng)改良發(fā)展而來的，是目前檢測禽弓形蟲抗體最為特異、敏感的方法，其原理是用福爾馬林浸泡的弓形蟲速殖子和稀釋的血清在微量“U”型板上反應，陽性樣品產(chǎn)生凝集現(xiàn)象，而陰性樣品將在孔底出現(xiàn)速殖子沉積團。由于試驗前血清樣品經(jīng)2－巰基乙醇的處理將IgM 蛋白變性直接檢測IgG抗體，使得MAT方法克服了直接凝集試驗特異性不強的缺點；在抗原稀釋液中加入伊文氏藍染液，使得陰、陽性結果在藍色背景下更容易觀察，可直接用肉眼觀察，不需任何儀器。鑒于上述優(yōu)點，本方法已經(jīng)廣泛應用于禽弓形蟲的流行病學調(diào)查、蟲株分離以及臨床檢測［2］。

本次調(diào)查發(fā)現(xiàn)，清遠市不同鵝場的鵝弓形蟲抗體檢測陽性率較低，與之前實驗室的對清遠散養(yǎng)鵝［7］調(diào)查的陽性率比較差異極顯著（P＜0.01），造成這種差異可能的原因有以下幾個方面：（1）本次調(diào)查樣品來源于清遠市的規(guī)?；B(yǎng)殖場，規(guī)?；B(yǎng)殖場能夠有效控制環(huán)境因素，采用封閉式飼養(yǎng)管理，有利于疾病控制，也有利于藥物的合理使用。（2）貓、犬等多種動物都可作為弓形蟲的中間宿主，同時貓又為弓形蟲的終未宿主，農(nóng)村散養(yǎng)戶犬貓活動較頻繁，而規(guī)模化養(yǎng)殖場養(yǎng)犬貓的少，且能夠有效控制其他中間宿主動物在養(yǎng)殖場的活動，有助于弓形蟲病的控制。（3）由于本次調(diào)查樣品量的限制，可能存在一些誤差，故需加大樣品量，進行進一步分析。在本次調(diào)查中，清遠地區(qū)種鵝的弓形蟲感染率明顯高于肉鵝，差異顯著（P＜0.05），可能與鵝的日齡和飼養(yǎng)管理不同等有關，肉鵝飼養(yǎng)周期相較于種鵝的要短很多，故而接觸病原的機會相對地也更少；兩種鵝的用途不一樣，其飼養(yǎng)喂料、用藥方式等也不盡相同。

本次調(diào)查有利于掌握廣東省清遠市鵝弓形蟲病的流行情況，種鵝的感染率較之于肉鵝的要高，可能會給畜禽和人類健康帶來威脅，應引起重視，采取進一步綜合戰(zhàn)略措施預防和控制鵝弓形蟲病，減少對社會帶來的危害。

［1］Dubey J P，Jones J L.Toxoplasma gondii infection in humans and animals in the United States［J］.Int J Parasitol，2008，38：1257－1278.

［2］Dubey J P.Toxoplasmosis in pigs－the last 20years［J］.Vet Parasitol，2009，164：89－103.

［3］于恩庶.弓形蟲病學［M］.2版.福州：福建科學技術出版社，1992.

［4］Yan C，Yue C L，Yuan Z G，etal.Toxoplasma gondii infection in domestic ducks，free－range and caged chickens in southern China［J］.Vet Parasitol，2009，165（3－4）：337－340.

［5］Zou F C，Sun X T，Xie Y J，etal.Seroprevalence of Toxoplasma gondii in pigs in Southwestern China［J］.Parasitol Int，2009，58：306－307.

［6］Huang C Q，Lin Y Y，Dai A L，etal.Seroprevalence of Toxoplasma gondii infection in breeding sows in Western Fujian Province，China［J］.Trop Anim Health Prod，2010，42：115－118.

［7］Yan C，Yue C L，Zhang H，etal.Serological Survey of Toxoplasma gondii Infection in the Domestic Goose（Anser domestica）in Southern China［J］.Zoonoses Public Health，2011，58（4）：299－302.