小兒支原體肺炎190例肺炎支原體DNA與超敏C反應(yīng)蛋白檢測(cè)及其應(yīng)用價(jià)值

湖北省咸寧市中心醫(yī)院兒科（咸寧437100）

羅劍紅

急性呼吸道感染是全世界兒童最常見(jiàn)的疾病之一，肺炎是發(fā)展中國(guó)家兒童死亡的首要原因，而肺炎支原體（Mycoplas ma pneu moniae，MP）是小兒時(shí)期感染性肺炎的重要病原體之一。肺炎支原體感染常年發(fā)病，最常見(jiàn)累及呼吸道，但是也可以使中樞神經(jīng)系統(tǒng)受累，病情重，如不及時(shí)治療，預(yù)后差。肺炎支原體臨床表現(xiàn)缺乏特異性，常有誤診。我院于2007年1月至2009年3月對(duì)190例支原體肺炎（MPP）患兒進(jìn)行肺炎支原體DNA（MP-DNA）及超敏C反應(yīng)蛋白（hs-CRP）檢測(cè)，同時(shí)與81例健康兒童進(jìn)行hs-CRP檢測(cè)對(duì)比，現(xiàn)將結(jié)果分析報(bào)告如下。

資料與方法

1 研究對(duì)象 本組選擇在我科住院治療并診斷為MPP者190例，其中男113例，女77例，年齡1月至12歲，所有患兒均符合國(guó)家衛(wèi)生部小兒支原體肺炎診斷標(biāo)準(zhǔn)［1］。任意抽取81例健康兒童作為對(duì)照組，其中男49例，女32例，年齡2月至13歲。兩組在年齡、性別構(gòu)成上經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理無(wú)顯著性差異（P＞0.05），具有可以比性。

2 MP-DNA檢測(cè) 患兒入院當(dāng)日或次日以無(wú)菌咽拭子擦拭咽后壁，避免觸碰舌面及口唇，于盛有1 ml生理鹽水EP管攪動(dòng)并擠壓管壁盡力擠干。咽拭液裝冰盒送至-80oC冰箱保存，留做PCR。應(yīng)用美國(guó)Stratagene公司生產(chǎn)的Mx3005P型熒光定量PCR儀檢測(cè) MP-DNA濃度，＞1.00×103copies／mL為陽(yáng)性，試劑盒由深圳匹基生物有限公司生產(chǎn)。

3 hs-CRP檢測(cè) 190例MPP患兒和81例健康對(duì)照兒童均靜脈采血2 ml置于干燥促凝試管內(nèi)送檢，采用日本Oly mpus3700全自動(dòng)生化分析儀和日本電化生研株式會(huì)社提供的hs-CRP試劑進(jìn)行檢測(cè)，正常值范圍為0～3 mg／L。

4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 本組數(shù)據(jù)均采用SPSS11.0軟件系統(tǒng)進(jìn)行處理，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，以P＜0.05為有顯著性差異，P＜0.01為有極顯著性差異。

結(jié) 果

1 MP-DNA的檢測(cè)結(jié)果 見(jiàn)表1。A組91例，MP-DNA濃度為1.00×103～1.00×104；B組69例，MP-DNA濃度為1.00×104～1.00×105；C組30例，MP-DNA濃度＞1.00×105；MP-DNA濃度在1.00×103～1.00×104者最多，而 MP-DNA濃度＞1.00×105者最少。

表1 190例支原體肺炎患兒MP-DNA濃度

2 hs-CRP的檢測(cè)結(jié)果 見(jiàn)表2。hs-CRP濃度及增高率均以C組最高，分別達(dá)到47.2±18.2 mg／L和100%。與對(duì)照組比較，A、B、C三組的增高h(yuǎn)s-CRP濃度和增高率均有極顯著性差異（P＜0.01）。

表2 不同MP-DNA濃度組患兒與對(duì)照組hs-CRP檢測(cè)增高例數(shù)、濃度和增高率

討 論

MPP是兒童和青少年時(shí)期常見(jiàn)的肺炎之一，由MP感染引起，約有10%～20%的肺炎病例由肺炎支原體引起，且近年有逐漸增多的趨勢(shì)［2］。其臨床常累及呼吸道，出現(xiàn)持續(xù)性咳嗽、咽炎和氣管支氣管炎，表現(xiàn)無(wú)特異性，早期快速診斷困難。目前，MPP診斷的新指標(biāo)層出不窮，但是尚無(wú)標(biāo)準(zhǔn)的診斷方法。MP是呼吸道感染常見(jiàn)的致病菌，是介于細(xì)菌和病毒之間的能獨(dú)立生活的病原微生物中最小者。傳統(tǒng)的肺炎支原體分離培養(yǎng)及抗體測(cè)定費(fèi)時(shí)、繁瑣、培養(yǎng)陽(yáng)性率低，不利于肺炎支原體感染的早期快速診斷［3］。采用熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（FQ-PCR）技術(shù)檢測(cè)痰、血標(biāo)本可快速、敏感、準(zhǔn)確地定量檢測(cè)標(biāo)本中 MP-DNA，可了解MP在患兒體內(nèi)感染和復(fù)制情況［4］。文獻(xiàn)報(bào)道，肺炎支原體PCR拷貝數(shù)越大，越能支持MP感染的診斷，并常提示病情越重［5］。

C-反應(yīng)蛋白在1930年由Tillet和Francis發(fā)現(xiàn)，他們觀察到一些急性病人的血清能和肺炎鏈球菌的莢膜C-多糖物質(zhì)起沉淀反應(yīng)，1941年證實(shí)血清中造成沉淀反應(yīng)的是一種蛋白質(zhì)，稱(chēng)之為C-反應(yīng)蛋白（CRP）。人CRP的基因序列在1985年被查明，屬于五球體蛋白Oligo meric鈣結(jié)合蛋白，分子量約120k D，由5個(gè)（每個(gè)含206個(gè)氨基酸）相同單體以共價(jià)鍵結(jié)合為環(huán)狀五球體。CRP為急性時(shí)相反應(yīng)蛋白之一，由肝臟合成，在炎癥或急性組織損傷6～8h內(nèi)開(kāi)始升高，24～48h達(dá)到高峰，比正常值高幾百倍甚至上千倍。經(jīng)積極、合理治療后，3～7d迅速降至正常，CRP的水平與組織損傷后修復(fù)的程度有密切關(guān)系，因此CRP可作為感染性疾病診斷及療效判斷的指標(biāo)［6］。臨床實(shí)驗(yàn)室常規(guī)測(cè)定CRP的濃度值是應(yīng)用于檢測(cè)組織損傷和急性炎癥，檢測(cè)的范圍一般為5～200 mg／L，傳統(tǒng)的分析方法缺乏足夠的敏感性。近年來(lái)采用乳膠增強(qiáng)免疫比濁法技術(shù)大大提高了分析靈敏度，能應(yīng)用于全自動(dòng)生化分析儀，檢測(cè)低限為0.10 mg／L，在低濃度CRP（如0.15～10 mg／L）測(cè)定范圍內(nèi)有很高的準(zhǔn)確度。用這種高靈敏度方法測(cè)定的CRP稱(chēng)為高敏感或超敏感CRP，簡(jiǎn)稱(chēng)超敏CRP（hs-CRP）。hs-CRP并不是一種新的CRP，而是根據(jù)測(cè)定方法更敏感命名。

健康人血漿中hs-CRP含量甚微（＜10 mg／L），而在炎癥或急性組織損傷后，hs CRP合成則在4～6h內(nèi)迅速增加，36～50h達(dá)到高峰，峰值可為正常值的100～1000倍，其半衰期較短4～6 h。而且hs-CRP的水平與組織損傷后修復(fù)的程度有密切關(guān)系，也不受性別、年齡、貧血、高球蛋白血癥等因素的影響。即使患兒機(jī)體反應(yīng)低下，常規(guī)檢查（如WBC）正常時(shí)，hs-CRP亦可呈陽(yáng)性，并隨著感染的加重而升高，因此它優(yōu)于其他急性期的反應(yīng)物質(zhì)［7］。Hs-CRP的檢測(cè)對(duì)于臨床上白細(xì)胞不高或免疫功能低下的肺炎患者其診斷價(jià)值更高，尤其是小兒和老年人。小兒支原體肺炎急性期血清hs-CRP升高，且出現(xiàn)時(shí)間明顯比支原體抗體要早，恢復(fù)期逐漸下降。雖然hs-CRP升高水平與感染程度并不一定成比例，但微量hs-CRP水平的升高，也可與較嚴(yán)重的臨床情況相聯(lián)系［8］。這些研究說(shuō)明，超敏C反應(yīng)蛋白可以作為鑒別感染嚴(yán)重程度的指標(biāo)。

在本研究中，MP-DNA拷貝數(shù)越高組，hs-CRP濃度越高，＞3 mg／L者越多，呈正相關(guān)。說(shuō)明hs-CRP可以作為肺炎支原體肺炎的一個(gè)病情評(píng)估指標(biāo)，而且具有靈敏性高的特點(diǎn)。聯(lián)合肺炎支原體DNA和超敏C反應(yīng)蛋白的檢測(cè)，可以早期較為正確地診斷及評(píng)估小兒肺炎支原體肺炎，為治療提供幫助。

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