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    慢性應激對2型糖尿病大鼠血漿去甲腎上腺素、腎上腺素含量影響的實驗研究

    2012-11-21 12:29:12劉艷民李慶和苑朝升李慧吉
    世界中醫(yī)藥 2012年2期
    關鍵詞:心身去甲動物模型

    劉艷民 李 杰 李慶和 韓 娟 苑朝升 李慧吉

    (1中國人民解放軍272醫(yī)院,天津市和平多倫道185號,300020;2內(nèi)蒙古師范大學心理系;3天津中醫(yī)藥大學)

    情志刺激對生物機體生理功能影響是多方面的,尤其與神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)關系密切[1]。本實驗觀察了情志刺激對2型糖尿病大鼠血漿去甲腎上腺素(NE)、腎上腺素(E)含量的影響,同時觀察了具有理氣降逆散結功效的復方中藥心身5號方的調(diào)節(jié)作用。

    1 材料與方法

    1.1 實驗動物 健康雄性Wister大鼠120只,體重120~150g。由軍事醫(yī)學科學院第四研究所提供。適應性飼養(yǎng)1周。動物室內(nèi)自然光照,室溫保持24℃,通風良好。飼以全價營養(yǎng)料,自由進食飲水,除實驗應激外無其他不良刺激。

    1.2 實驗動物模型及分組

    1.2.1 實驗性糖尿病動物模型 120只大鼠隨機分為2組,一組為40只,另一組為80只。80只大鼠腹腔注射鏈脲佐菌素(STZ,美國Sigma公司產(chǎn)品,溶解在0.1mol/L檸檬酸緩沖液內(nèi),pH為 4.0),30mg/kg,1次/日,連續(xù)2天(參考《現(xiàn)代藥理實驗方法與技術》)。余40只大鼠注射等量檸檬酸緩沖液,1次/日,連續(xù) 2天。注射30日后測查大鼠空腹血糖,以9.3mmol/L為標準(參考《現(xiàn)代藥理實驗方法與技術》),篩除高血糖鼠,再隨機選取45只STZ鼠和20只正常鼠進入應激造模實驗。

    1.2.2 動物分組 全部動物共分為5組,其中45只STZ大鼠隨機分為3組,即單純STZ組(無應激)、STZ+應激組、中藥組(STZ+應激),15只/組。20只正常大鼠分為應激組和正常組,10只/組。

    1.2.3 動物模型實驗方法 參照Carter等[1]方法,改良后建立本實驗應激方法。1)限制:將大鼠放入20cm×5cm×5cm塑料筒中,水平置于實驗臺,保證大鼠不受壓。以不能回轉身為度,但其運動受限制,光線晦暗,限制刺激每周隨機擇時進行3次,每次45min。2)旋轉:利用舊式唱機改裝為旋轉器,轉速為45r/min,在此轉速下離心力最小,避免離心力過大傷害大鼠。旋轉時將大鼠置于代謝籠中。旋轉刺激每45~150min內(nèi)擇時進行1次,每次15~20min。旋轉刺激隔日進行1次。3)擁擠:標準大鼠飼養(yǎng)籠,按應激組15只/籠,非應激組5只/籠喂養(yǎng)。刺激貫穿于實驗全過程,持續(xù)6周。

    2 中藥制備及給藥方法

    心身5號由旋覆花、代赭石、陳皮、茯苓、半夏、竹茹、丹參、赤芍、降香、烏藥、瓜蔞、遠志、炙枇杷葉、合歡皮、知母、蒼術、龍齒、黃芩組成,自動煎煮機煎煮,濃縮后置于-20℃冰箱貯藏備用。中藥組大鼠灌胃2mL/次(其生藥濃度為960g/L),2次/日至實驗結束,余組大鼠給予等量生理鹽水灌胃,2次/日。

    3 實驗指標測定

    3.1 血漿去甲腎上腺素(NE)、腎上腺素(E)含量測定 采用高效液相色譜——電化學方法。取全血5mL,加入EDTA保護劑60μL,離心,取血漿2mL加入內(nèi)標 DHBA,Na2SO3,EDTA·Na2,Tris- HCl,氧化鋁,充分混勻15min,離心,吸去上清,用純水洗3次,冷凍干燥,加入鹽酸,混勻,取上清進樣。

    3.2 色譜條件 1)儀器:日本島津LC-6A高效液相色譜儀;CTO-6A柱溫箱;ECD電化學檢測儀;C18色譜柱。2)流動相為磷酸鹽緩沖液,流速:0.8mL/min,靈敏度:AUFS 2。

    4 統(tǒng)計學方法

    5 實驗結果

    血漿去甲腎上腺素(NE)、腎上腺素(E)含量比較,見表1。

    表1 血漿去甲腎上腺素、腎上腺素含量比較(±sD)

    表1 血漿去甲腎上腺素、腎上腺素含量比較(±sD)

    組別 例數(shù) NE(ng/mL) E(ng/mL)10 4.86±1.168 3.81±0.773應激組 10 4.71±2.156 4.59±1.392單純STZ組 10 4.99±1.502 4.42±1.067 STZ+應激組 10 5.77±1.886 6.99±1.964▲▲◆◆中藥組 10 5.64±1.223 5.19±1.324正常組☆

    血漿NE含量各組之間比較無統(tǒng)計學意義,但STZ+應激組呈升高趨勢。對血漿E比較發(fā)現(xiàn),應激組大鼠血漿E含量有升高趨勢,與正常組比較無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。與單純STZ組相比,STZ+應激大鼠血漿E升高較顯著(P<0.01),提示應激可增加STZ大鼠血漿中E含量。與STZ+應激大鼠相比,中藥組大鼠血漿E含量減少(P<0.05),表明中藥具有降低STZ大鼠血漿E的作用。

    6 討論

    腎上腺素、去甲腎上腺素對糖代謝均有影響,尤其腎上腺素更明顯。當不良情志刺激時,引起交感神經(jīng)興奮,在肝內(nèi)的交感神經(jīng)末梢分泌去甲腎上腺素,直接加速肝糖原的分解,促進肝糖輸出增多,血糖升高。腎上腺素可使肝和肌肉的細胞膜上腺苷酸環(huán)化酶激活,細胞內(nèi)cAMP增多,進而激活磷酸化酶,促進肝糖原分解,結果導致血糖升高[2]。兒茶酚胺可參與糖異生的調(diào)節(jié),它可作用于肝細胞膜上的α受體,通過Ca2+-蛋白激酶體系,促進丙酮酸激酶磷酸化,而抑制丙酮酸激酶的活性,又通過Ca2+激活線粒體中的丙酮酸羧化酶和磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶,促進糖異生過程。兒茶酚胺還可直接抑制肌肉葡萄糖的攝取和利用。此外,兒茶酚胺還能通過促進腸道對葡萄糖吸收,抑制胰島素分泌,促進胰高血糖素分泌等途徑使血糖升高。

    Kuhn等[3]系列研究結果證明,具有糖尿病傾向的動物模型鼠E釋放的升血糖效應較正常鼠更為明顯,且伴有血漿胰島素濃度降低。本實驗結果發(fā)現(xiàn)實驗性應激可引起正常大鼠血中腎上腺素水平顯著上升,STZ+應激組血中腎上腺素水平增加更顯著,說明應激引起交感神經(jīng)-腎上腺髓質(zhì)系統(tǒng)興奮,導致具有胰腺病理缺陷的STZ鼠對應激刺激的腎上腺素能反應敏感性增加,E持續(xù)大量的釋放,進入血液循環(huán)中,產(chǎn)生升血糖的作用,同時應激也可通過神經(jīng)傳導直接作用胰腺,抑制胰島素的分泌。本實驗中去甲腎上腺素各組之間無明顯差異,但STZ+應激組有升高趨勢。推測可能與中樞去甲腎上腺素釋放作用有關,確切的機制尚待進一步研究。

    針對心身疾病共同的病機為氣機失調(diào)(主要以氣滯、氣逆為主)及由其所產(chǎn)生的瘀血、寒結、熱結或寒熱互結的基本病理變化,同時結合糖尿病自身的病機特點為陰虛燥熱,課題組提出理氣降逆,散結活血,滋陰清熱為糖尿病的基本治則,并擬定心身5號方藥。實驗結果表明心身5號具有降低STZ大鼠血漿E的作用。本實驗說明心身5號既可整體調(diào)整氣機,又對具體疾病有所專攻,是治療心身疾病糖尿病的有效臨床方劑。

    [1]唐己婷,陳家旭.束縛應激與中醫(yī)肝病的關系.中國醫(yī)藥學報,2002,17(2):82-85.

    [2]朱禧星.現(xiàn)代糖尿病學[M].第1版.上海:上海醫(yī)科大學出版社,2000:42,58 -59,78,113.

    [3]Kuhn C M,et al.Physiol Biochem Behav,1987,26:491 -495.

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