竹節(jié)參皂苷類化學(xué)成分的研究

鄒海艷 趙 暉 邱 葵 崔小桂 于 萍

(1首都醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)藥學(xué)院，北京，100069;2首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京朝陽醫(yī)院藥事部)

竹節(jié)參又名竹節(jié)人參、竹節(jié)三七、白三七等，是五加科植物竹節(jié)參Panax Japonicus C.A.Mey.的干燥根莖，為2010版《中華人民共和國藥典》收載品種。竹節(jié)參始載于《百草鏡》，具有散瘀止血，消腫止痛等功效［1］。竹節(jié)參中主要含有皂苷、揮發(fā)油、多糖和氨基酸等類化學(xué)成分［2］。前期研究發(fā)現(xiàn)竹節(jié)參總皂苷口服給藥后對大鼠腦缺血模型有很好的保護(hù)作用，可有效改善腦缺血?jiǎng)游锏纳窠?jīng)功能癥狀及減輕腦組織病理形態(tài)學(xué)改變［3－4］。為深入探討其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，本實(shí)驗(yàn)對竹節(jié)參中的皂苷類化合物進(jìn)行了提取分離，得到了5個(gè)化合物。

圖1 化合物1～5的結(jié)構(gòu)

1 儀器與試藥

島津CBM－20A半制備高壓液相色譜儀;BRUKER AVANCE 500MHz核磁共振儀;Agilent 6320XCT型離子阱質(zhì)譜儀;AR1140型萬分之一電子天平;KQ5200DU型數(shù)控超聲波清洗器。乙腈和甲醇為色譜純，水為哇哈哈純凈水，其余試劑均為分析純。竹節(jié)參皂苷 IVa對照品(批號:111861－201001，含量測定用)，購于中國藥品生物制品檢定所;人參皂苷Ro對照品(批號:MUST－12010503，純度＞98%)，購于北京世紀(jì)奧科生物技術(shù)有限公司。竹節(jié)參藥材，購于湖北，由首都醫(yī)科大學(xué)李佳副教授鑒定為五加科人參屬植物竹節(jié)參Panax japonicus C.A.Mey.的干燥根莖。

2 方法與結(jié)果

2.1 提取與分離 取竹節(jié)參藥材粗粉5kg，用70%的乙醇加熱回流提取3次，溶劑用量依次為10、10和8倍量，每次2h。合并提取液減壓回收溶劑，用含水正丁醇等量萃取3次，合并萃取液，減壓回收溶劑得粗總皂苷。將粗總皂苷用85%乙醇溶液充分溶解，緩慢加入4～5倍量丙酮，靜置，收集沉淀物，真空干燥(60℃)，得精制竹節(jié)參總皂苷479.1g。

取精制的竹節(jié)參總皂苷適量，加50%甲醇溶解，采用反相半制備高效液相色譜進(jìn)行分離，以甲醇－0.1%三氟乙酸水溶液(72∶28)為流動(dòng)相，等度洗脫，收集6個(gè)流份(Fr.1－6)，甲醇重結(jié)晶后得到化合物1(15mg)、2(12mg)、4(14mg)和 5(16mg)。取 Fr.4 進(jìn)行二次制備，得到化合物3(9mg)。

表1 化合物1、3和5的13C－NMR(125MHz，Pyr－d5)數(shù)據(jù)

2.2 結(jié)構(gòu)鑒定 1)化合物1 白色無定形粉末，溶于甲醇。ESI－MS neg.m/z:955.5［M －H］–，793.3［M－glc－H］–，631.3［M －2glc－H］–，455.3［M －2glcglcUA －H］–;1H －NMR(500MHz，Pyr－d5)δ:6.27(1H，d，J=8.0Hz，glc － H －1)，5.05(1H，d，J=7.5Hz，glc－H －1)，5.41(1H，br.d，12 － H)，5.01(1H，d，J=7.5Hz，glcUA － H － 1)，1.31，1.27，1.10，1.00，0.89，0.88，0.85(各 3H，s，CH3× 7)。13C － NMR(125MHz，Pyr－d5)數(shù)據(jù)見表1。以上數(shù)據(jù)與相關(guān)文獻(xiàn)［5］比對，確定該化合物為巨花雪膽皂苷B(Hemsgiganosides B)。

2)化合物2 白色無定形粉末，溶于甲醇。ESIMS neg.m/z:955.5［M －H］–，631.3［M －glc－H］–，455.3［M－2glc－glcUA －H］–。采用 HPLC色譜，通過對照品增高色譜峰試驗(yàn)，判斷該化合物為竹節(jié)參皂苷Ⅴ，即人參皂苷Ro。

3)化合物3 白色無定形粉末，溶于甲醇。ESIMS neg.m/z:925.6［M －H］–，793.4［M －ara－H］–，631.3［M－ara－glc－H］–，455.2［M －ara－glc－glcUA －H］–;1H －NMR(500MHz，Pyr－d5)δ:6.33(1H，d，J=8.5Hz，glc － H － 1)，5.42(1H，br.d，12 － H)，5.03(1H，d，J=4.0Hz，ara － H － 1)，4.97(1H，d，J=7.5Hz，glcUA － H － 1)，1.27，1.25，1.09，0.97，0.92，0.89，0.80(各 3H，s，CH3× 7)。13C － NMR(125MHz，Pyr－d5)數(shù)據(jù)見表 1。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)比對［6－7］確定該化合物為竹節(jié)參皂苷Ⅳ，即楤木皂苷A。

4)化合物4 白色無定形粉末，溶于甲醇。ESIMS neg.m/z:793.5［M －H］–，631.3［M －glc－H］–，455.2［M－glc－glcUA－H］–。采用HPLC色譜，通過對照品增高色譜峰試驗(yàn)，判斷該化合物為竹節(jié)參皂苷Ⅳa。

5)化合物5 白色無定形粉末，溶于甲醇。ESIMS neg.m/z:793.4［M －H］–，631.3［M －glc－H］–，455.3［M －glc－glcUA －H］–;1H －NMR(500MHz，Pyr－d5)δ:6.28(1H，d，J=7.5Hz，glc－H －1)，5.45(1H，br.d，12 －H)，5.01(1H，d，J=7.5Hz，glcUA － H －1)，2.54(1H，d，J=11Hz，H － 18)，1.31(3H，s，H － 23)，1.23(3H，s，H －27)，1.14(3H，s，H －24)，0.99(3H，d，J=7.0Hz，H －29)，0.97(3H，d，J=7.0Hz，H －30)，0.92(3H，s，H －25)，0.85(3H，s，H －26);13C － NMR(125MHz，Pyr－d5)數(shù)據(jù)見表1。與文獻(xiàn)［8］比對確定該化合物為Cynarasaponin C。

3 討論

作為人參和三七的同屬植物，竹節(jié)參中富含三萜皂苷類化合物，現(xiàn)代藥理研究表明，竹節(jié)參總皂苷具有保護(hù)缺血性心肌損傷、強(qiáng)心、擴(kuò)冠、鎮(zhèn)靜、保肝、抗腫瘤等多方面的藥理活性［2］，是中藥竹節(jié)參中的主要有效成分。目前，從竹節(jié)參中分離得到的皂苷主要為齊墩果烷型和達(dá)瑪烷型，而烏索烷型的化合物為首次從該屬植物中分離得到，竹節(jié)參中是否含有該類型的其他化合物需要進(jìn)一步研究。

［1］國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典2010年版一部［S］.北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2010:129.

［2］頓耀艷，袁丁.竹節(jié)參化學(xué)成分的研究進(jìn)展［J］.時(shí)珍國醫(yī)國藥，2006，17(10):1909 －1912.

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