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    益骨化瘀丸定性鑒別方法研究

    2012-11-21 02:49:02張曉靜申小靜
    中國實用醫(yī)藥 2012年12期
    關(guān)鍵詞:蒸干殘渣本品

    張曉靜 申小靜

    益骨化瘀丸由牛膝(制)、黃芪、骨碎補(bǔ)、大黃(制)、自然銅(制)、女貞子、紅花、甘草等18味藥材組成,為醫(yī)院協(xié)定處方制劑,具有補(bǔ)肝益腎、祛瘀降脂之功效。臨床用于腎虛淤血型股骨頭壞死、各類骨壞死、脊髓壞死、陳舊性骨折等,效果良好。為更快、更好、更簡便地控制其質(zhì)量,采用顯微鑒別和薄層色譜對其進(jìn)行定性鑒別。由于藥材組織具有專屬性等特點(diǎn),擬對本方骨碎補(bǔ)、大黃、紅花進(jìn)行顯微鑒別,同時對黃芪、大黃、制牛膝進(jìn)行薄層色譜鑒別。

    1 儀器與試藥

    OLYMPUS顯微鏡;ZF-1型三用紫外分析儀;對照品(中國藥品生物制品檢定所),益骨化瘀丸(院內(nèi)制劑);所用試劑均為分析純。

    2 方法與結(jié)果

    2.1 顯微鑒別

    2.1.1 紅花的顯微特征 花冠、花絲、柱頭碎片多見,有長管道狀分泌細(xì)胞,常位于導(dǎo)管旁,直徑約至66 μm,含黃棕色至紅棕色分泌物?;ǚ哿n悎A形、橢圓形或橄欖形,直徑約至60 μm,具3個萌發(fā)孔,外壁有齒狀突起。

    2.1.2 甘草的顯微特征 纖維成束,直徑8~14 μm,壁厚,微木化,周圍薄壁細(xì)胞含草酸鈣方晶,形成晶纖維。

    2.1.3 大黃的顯微特征 草酸鈣簇晶直徑20~160 μm。淀粉粒甚多,單粒類球形或多角形,直徑3~45 μm,臍點(diǎn)星狀,復(fù)粒由2~8分粒組成。其中大型草酸鈣簇晶最具代表性。草酸鈣簇晶大,直徑20~140 μm。

    2.2 薄層色譜鑒別

    2.2.1 黃芪 取本品25 g,研細(xì),加甲醇50 ml,回流提取1 h,濾過,加甲醇20 ml分3次洗滌藥渣,合并濾液,置水浴上蒸干。殘渣加飽和氯化鈉水溶液30 ml使溶解,用水飽和正丁醇提取2次,每次20 ml,合并正丁醇液;用氨試液洗滌2次,每次20 ml,棄去水液;正丁醇液置水浴上蒸干,殘渣加甲醇0.5 ml使溶解,作為供試品溶液。另取黃芪甲苷對照品,加甲醇制成每1 ml含1 mg的溶液,作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2010年版一部附錄ⅥB)[1]試驗,吸取上述兩種溶液各2 μl,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以氯仿-甲醇-水(13∶7∶2)10℃以下放置的下層溶液為展開劑,展開,取出,晾干,噴以10%硫酸乙醇溶液,在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中,在與對照品色譜相應(yīng)的位置上,日光下顯相同的棕褐色斑點(diǎn),紫外光燈(365 nm)下顯相同的橙黃色熒光斑點(diǎn)(結(jié)果見圖1A)。

    2.2.2 大黃 取本品6 g,研細(xì),加甲醇20 ml,回流提取0.5 h,濾過,濾液蒸干,殘渣加水10 ml,鹽酸1 ml,加熱水解0.5 h,立即冷卻,用乙醚提取2次,每次10 ml,合并乙醚提取液,揮去乙醚,殘渣加醋酸乙酯1 ml使溶解,作為供試品溶液。另取大黃對照藥材1 g,同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法(中國藥典2010年版一部附錄ⅥB)[1]試驗,吸取上述兩種溶液各5 μl,分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上,以石油醚(30~60℃)-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)的上層溶液為展開劑,展開,取出,晾干,置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品色譜中,在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯相同的5個橙黃色熒光主斑點(diǎn);置氨蒸氣中熏后,日光下檢視,斑點(diǎn)變?yōu)榧t色 (結(jié)果見圖1B)。

    2.2.3 牛膝 取本品粉末20 g,加乙醇50 ml,加熱回流40 min,靜置。取上清液10 ml,加鹽酸1 ml,加熱回流1 h后濃縮至約5 ml,加水10 ml,用石油醚(60~90℃)20 ml提取,提取液蒸干,殘渣加乙醇2 ml使溶解,作為供試品溶液。另取牛膝對照藥材,同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法(中國藥典2010年版一部附錄ⅥB)[1]試驗,吸取供試品溶液10~20 μl,對照藥材溶液10 μl,分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上,以氯仿-甲醇(40∶1)為展開劑,展開,取出,晾干,噴以磷鉬酸試液,在110℃烘約10 min。供試品色譜中,在與對照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同的藍(lán)色斑點(diǎn)(結(jié)果見圖1 c)。

    3 討論

    本品處方復(fù)雜,干擾因素較多,經(jīng)反復(fù)試驗,選用了多種展開系統(tǒng)和純化方法,以及樣品的不同取樣量,摸索出處方中大黃、黃芪、牛膝3種藥材的薄層色譜鑒定方法。方法簡便,重現(xiàn)性好,專屬性強(qiáng),可作為益骨化瘀丸的定性鑒別方法,有效控制其質(zhì)量。

    另外,對方中骨碎補(bǔ)、甘草藥材成分也進(jìn)行了薄層定性鑒定研究。

    骨碎補(bǔ):取本品粉末6 g,加甲醇50 ml,加熱回流1 h,放冷,濾過,濾液蒸干,殘渣加甲醇1 ml使溶解,作為供試品溶液。同法制成缺骨碎補(bǔ)的陰性對照樣品溶液。另取柚皮甙對照品,加甲醇制成每1 ml含0.5 mg的溶液,作為對照品溶液。以柚皮苷為對照,選用氯仿-醋酸乙酯-甲酸-水(1∶12∶2.5∶3)的上層溶液為展開劑,三氯化鋁試液為顯色劑,置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品色譜中,在與對照品色譜相應(yīng)的位置上,未顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。故本鑒別不收入正文。

    甘草:取本品粉末10 g,加乙醚40 ml,置水浴上加熱回流1 h,濾過,藥渣加甲醇30 ml,置水浴上加熱回流1 h,濾過,濾液蒸干,殘渣加水40 ml使溶解,水溶液用正丁醇提取3次,每次20 ml,合并正丁醇液,用水洗滌3次,置水浴上蒸干,殘渣加甲醇5 ml使溶解,作為供試品溶液。另取甘草對照藥材,同法制成對照藥材溶液。同法制成缺甘草的陰性對照樣品溶液。以醋酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水(30∶2∶2∶4)為展開劑,10%硫酸乙醇溶液為顯色劑,105℃烘至顯色清晰,置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品色譜中,在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上,未顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。故本鑒別不收入正文。

    此外,對本制劑的定量分析在進(jìn)一步研究中。

    [1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部).北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010.

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