健康人口服奧硝唑片的藥代動力學(xué)研究

姜芳寧 劉光斌 鄒干朋 楊立順

（甘肅省嘉峪關(guān)市酒鋼醫(yī)院，甘肅 嘉峪關(guān)735100）

奧硝唑是繼甲硝唑和替硝唑之后的第三代新型硝基咪唑類衍生物，比甲硝唑和替硝唑療效更強，體內(nèi)分布更廣，臨床常用于厭氧菌感染和滴蟲感染等的治療[1]。本文采用HPLC 測定健康人口服奧硝唑片的血藥濃度并進行藥物代謝動力學(xué)（藥動學(xué)）特征的研究。

1 材料和試劑

LC-2010 AHT 型高效液相色譜儀（日本島津）；LC solution 色譜工作站（日本島津）；AUY220 電子分析天平（日本島津）；TG16-W 型臺式高速離心機（滬康）。

奧硝唑片（浙江愛生藥業(yè)有限公司，批號：20100406，規(guī)格：0.25 g/ 片）；奧硝唑?qū)φ掌罚ㄖ袊幤飞镏破窓z定所，批號：100608-200301）；甲醇、乙腈為色譜純；實驗中溶液配制均使用新制純化水。

2 方法和結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱為Inertsil ODS-SP 柱（150 mm ×4.6 mm，5 μm），流動相∶甲醇-水（28∶72），流速1.0 mL/min，紫外檢測波長316 nm，柱溫30 ℃，進樣體積20 μL。

2.2 專屬性考察

圖1 人血漿中奧硝唑的HPLC 圖

血漿樣品按本法分離測定所得結(jié)果表明，空白血漿對測定無干擾，采用外標法定量，奧硝唑保留時間為8.758 min，見圖1。

2.3 受試者的選擇

12 名健康志愿者（男性6 名，女性6 名），年齡20 ～30 歲，平均體重（62.46±8.66）kg，無急、慢性疾病及家族遺傳病史，實驗前2 周無用藥史，查體肝腎功能及各項實驗相關(guān)檢查正常，實驗期間禁煙、酒、茶和含咖啡的飲料，各受試者均為自愿參加，經(jīng)醫(yī)院倫理委員會討論通過，在實驗前由受試者本人簽署知情同意書。

2.4 給藥與樣品采集

志愿者實驗前禁食12 h，受試當(dāng)天清晨空腹頓服奧硝唑片1 g，飲水200 mL，2 h 后統(tǒng)一進食早餐。于服藥前0 h和 服 藥 后0.5、1、1.5、2、3、4、6、8、10、12、24、48、72 h 取肘靜脈血3 mL。

2.5 血漿樣品處理

精密吸取血漿樣品0.5 mL，置1.5 mL 離心管中，加乙腈1 mL，旋渦振蕩3 min，離心（4 000 rpm）10 min，取上清液置1.5 mL 離心管中，離心（13 000 rpm）5 min，取上清液用0.22 μm 微孔濾膜濾過，進樣20 μL。

2.6 標準曲線的制備

2.6.1 標準溶液的配制 精密稱取奧硝唑?qū)φ掌?5.2 mg加純化水配制成252 mg/L 的標準溶液，置4 ℃冰箱中保存?zhèn)溆茫脮r以水稀釋成不同濃度的奧硝唑系列溶液。

2.6.2 標準曲線的制備 取健康人空白血漿0.25 mL 5份，分別加入不同濃度的奧硝唑標準溶液，使血漿濃度分別為2.52、5.04、10.08、15.12、20.16 mg/L。按“2.4”項下的方法進行處理，經(jīng)HPLC 測定奧硝唑血漿濃度。以峰面積A為縱坐標，濃度C為橫坐標進行回歸，得標準曲線：A=51 395.7C－13 466.4（n= 5，r= 0.999 8）。奧硝唑血藥濃度在2.52 ～20.16 mg/L 范圍內(nèi)與峰面積之間有良好線性關(guān)系。定量下限為2.52 mg/L，信噪比以S/N = 3∶1 計，最低檢測限0.50 mg/L。

2.7 提取回收率

在空白血漿中加入不同量的奧硝唑標準溶液，配制成高、中、低（2.52、10.08、20.16 mg/L）3 個濃度樣品，采用“2.4”項下的方法提取后進樣測定，每個濃度樣本重復(fù)5次，求得平均回收率分別為（101.03±0.02）%（RSD=0.85%）、（100.14±0.03）%（RSD= 0.28%）、（99.98±0.02）%（RSD= 0.12%）。

2.8 精密度

取奧硝唑標準溶液高、中、低（2.52、10.08、20.16 mg/L）3 種濃度樣品，1 個濃度同1 日分5 次測定，計算日內(nèi)變異率分別為（2.53± 0.02）（RSD= 0.85%）、（10.05± 0.03）（RSD= 0.28%）、（20.14±0.02）（RSD= 0.12%）。并于不同的5 d 分別測定，計算日間變異率分別為（2.51±0.02）（RSD= 0.85%）、（10.05±0.03）（RSD= 0.32%）、（20.20±0.31）（RSD= 1.52%）。均滿足生物樣品分析方法的要求。

2.9 樣品穩(wěn)定性實驗

制備奧硝唑血漿濃度分別為2.52、10.08、20.16 mg/L的低、中、高3 種濃度的血漿樣品，分別在室溫條件下放置8 h，-20℃冰凍24 h 后室溫融化，反復(fù)凍融3 次，取樣測定，考察其穩(wěn)定性。結(jié)果3 種濃度血漿樣品測得的RSD均小于8%，表明血漿樣品在上述條件下均穩(wěn)定。

2.10 平均藥-時曲線

采用SPSS 12.0 軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析，12 名健康受試者單劑量口服奧硝唑片1 g 后的結(jié)果見圖2。

圖2 健康受試者口服1g 奧硝唑片后的平均藥-時曲線（n=12）

2.11 藥物動力學(xué)參數(shù)

采用3p97 程序軟件進行藥代動力學(xué)擬合計算。計算過程按最佳擬合模型選擇模型和權(quán)重。由血藥濃度計算出藥物動力學(xué)參數(shù)（見表1）。結(jié)果表明，單次口服奧硝唑片在血漿中的分布符合一室模型。

藥動學(xué)參數(shù) 數(shù)值Ke（1/h） 0.05 ±0.01 Ka（1/h） 18.80 ±23.50 T1/2(Ka)（h） 0.14 ±0.24 T1/2(Ke)（h） 15.61 ±1.87 Tpeak（h） 0.76 ±1.18 Cmax（mg/L） 20.55 ±3.02 AUC0-∞（mg.h/L） 474.07 ±63.21 Cl（L/h） 2.15 ±0.31 V/F（L） 48.04 ±6.68

3 討論

3.1 據(jù)文獻報道[2]，實驗中選用乙腈沉淀處理血樣，經(jīng)1次提取后，直接取上清液進樣進行紫外色譜分析，方法簡便，沉淀快速、完全，達到了生物樣品分析的要求，能保證色譜柱進行大量樣品的連續(xù)分析，可為臨床上奧硝唑血藥濃度監(jiān)測提供參考。

3.2 本實驗采用HPLC 測定奧硝唑的血藥濃度簡便、穩(wěn)定、靈敏，可滿足藥動學(xué)研究的需要。由表1 可見，12 名健康志愿者藥代動力學(xué)參數(shù)Ka、T1/2(Ka)、Tpeak差別較大，吸收相各受試者在相同時間點血藥濃度各不相同，標準偏差較大，不同個體之間差別較明顯，這與實驗中吸收相取點過少有關(guān)。

3.3 12 名健康志愿者單劑量口服奧硝唑片1 g 后，在實驗期間未發(fā)現(xiàn)明顯不良反應(yīng)，全部受試者均未影響實驗過程。

[1] 楊玉平，陳笑，姚飛，等. 甲硝唑、替硝唑和奧硝唑的拉曼光譜研究[J].中央民族大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版），2010，19（4）：26-29.

[2] 蔡震.奧硝唑血藥濃度的高效液相色譜法測定[J].現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生，2008，24（5）：655-657.